2. Es posible efectuar una identificación
preliminar de Enterobacteriaceae
sobre la base de las características de
las colonias y reacciones químicas en
medios de aislamiento primario.
3. Para una mayor identificación de
especie requiere la determinación de
otras características fenotípicas que
reflejan el código genético e
identidad única del microorganismo
en estudio.
4. Las pruebas más ampliamente usadas
para evaluar aquellas características
metabólicas por las que identifican a
las Enterobacteriaceae, excepto unas
pocas especies raras o atípicas.
7. Producción de Indol
El indol es un compuesto que se genera
mediante la desaminación reductiva
del triptófano.
Esta reacción es llevada a cabo por algunas
bacterias que poseen la enzima triptofanasas,
produciendo Indol, ácido pirúvico y amoniaco
(NH3)
8. El indol puede detectarse en un medio de
prueba con triptófano, observando la
aparición del color rojo al adicionar el
reactivo de Ehrlich o Kovac que contiene
p-dimetilaminobenzaldehido
Siendo el reactivo más sensible el de
Ehrlich y preferible cuando se evalúa
bacilos no fermentadores o anaerobios
9. Medios con Triptófano
Caldo con triptófano
Agar sulfuro indol motilidad
(SIM)
Agar ornitina indol motilidad
(MIO)
P-dimetilaminobenzaldehido
10. Caldo con Triptófano
Reacción Indol
positivo
13. Determinar habilidad de las
bacterias para producir ácidos
estables por fermentación de la
glucosa.
ROJO DE METILO
14. FUNDAMENTO
Una de las pruebas bioquimicas que se
utilizan para identificar los diferentes
géneros de enterobacterias lo constituyen
el tipo y la proporción de productos de
fermentación que se originan por la
fermentación de la glucosa.
Las enterobacterias son anaerobios
facultativos que utilizarán la glucosa en dos
fases: primero la metabolizarán
aeróbicamente (respiración oxidativa)
consumiendo rápidamente el oxígeno del
medio, para, en segundo lugar, continuar
metabolizándola por vía anaerobia
(fermentación).
15. Esta diferencia en el metabolismo
bacteriano podría ser reconocida por
la adición de un indicador como rojo
de metilo, para revelar la presencia
de productos ácidos,
y por la adición de Alfa-Naftol e
Hidróxido de Potasio para evidenciar
la presencia de productos finales
neutros.
16. Fermentación ácido mixta:
La realizan las bacterias del grupo de
E.coli y los productos finales son
ácidos orgánicos (ácidos fórmico,
acético, láctico y succínico) que
provocan un fuerte descenso del pH
inicial del medio.
Puede detectarse por el viraje del
indicador de rojo de metilo que
permanece amarillo por encima de pH
5,1 y rojo por debajo de 4,4.
17. El rojo de metilo es un indicador de
pH. Por lo tanto, permite
determinar la formación de ácidos
que se producen durante la
fermentación de un carbohidrato.
Una reacción positiva indica que el
microorganismo realiza una
fermentación de la glucosa por la
vía ácido-mixta.
18.
19. MEDIOS DE CULTIVO
El Medio es el Caldo RMVP o Caldo de Clark y Lubs.
Disuelva los ingredientes en agua destilada y
esterilice en autoclave por 15 minutos a 121°C a
15 libras de presión.
Solución indicadora de Rojo de Metilo:
Se prepara disolviendo 0.1 gr de este indicador
en 300 ml de Etanol al 95% y diluyendo luego
con agua hasta 500 ml.
20. Inocule con el asa de platino transfiriendo una
porción de cultivo puro. Incube a 37°C por 24 a 48
hrs.
Incubar a 35°C durante 48 horas.
Finalizado el tiempo de incubación transfiera 5ml de
cultivo a un tubo
Agregar 5 gotas del reactivo de rojo de metilo a uno
de los tubos y al otro añadir los Reactivos A y B
(0,6ml del KOH y 0,2ml del Alfa-Naftol).
21. INTERPRETACION
La prueba es positiva si se desarrolla de un
color rojo estable. Esto indica que la
producción de ácido es suficiente para
producir el viraje del indicador y el
microorganismo fermentó la glucosa por la vía
de ácido mixta.
Un color anaranjado, intermedio entre el rojo
y el amarillo no es considerado como positivo.