3. CONJUNTO DE TECNICAS
MEDIANTE EL CUAL LAS
MOLECULAS SE SEPARAN
UNAS DE OTRAS EN
GRADIENTES DE
POTENCIAL ELECTRICO,
DEPENDIENDO DE SUS
CARGAS NETAS, TAMAÑOS
Y FORMAS, PERO
INDEPENDIENTEMENTE
DEL MEDIO CONDUCTOR.
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6. ELECTROFORESIS
DE ZONA
Para llevar a cabo una
separación
electroforética zonal se
necesitan: una fuente de
tensión (o de
alimentación) que
proporciona el campo
eléctrico
Mediante dos
electrodos, positivo
(ánodo) y negativo
(cátodo), entre los que
se establece una
diferencia de potencial.
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8. INMUNOELECTRO-
FORESIS
Es una combinación de
una electroforesis en
gel de agar (o agarosa)
seguida de una
inmunodifusión.
Estas no son idénticas
para todas las
proteínas presentes
en una muestra.
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10. EN GELES DE
POLIACRILAMIDA
La electroforesis
en geles de
poliacrilamida
(PAGE, del inglés
PolyAcrylamide
Gel
Electrophoresis)
se utiliza
mayoritariamente
para la separación de
proteínas, aunque
también es útil para
ácidos nucleicos.
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12. ELECTROENFOQUE
El electroenfoque (E.E.F)
es un tipo particular de
electroforesis en la que
los compuestos
anfóteros
(esencialmente se usa
para el análisis de
proteínas)
se separa según su
punto isoeléctrico, pI
(pH al cual su carga
neta es nula), en una
gradiente continuo
de PH.
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13. BIDIMENCIONAL
La Electroforesis
bidimensional es una
sucesión de dos
electroforesis distintas
(o en distintas
condiciones), realizadas
sobre una misma
muestra. En la primera
de ellas
(primera dimensión) se
separan los
componentes de la
muestra según un
criterio (carga, o tamaño,
o pI), y en la segunda
(segunda dimensión)
según un parámetro
distinto al anterior.
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15. EN ACIDOS
NUCLEICOS
La electroforesis de
ácidos nucleicos es el
método habitual para
separar, identificar y
purificar moléculas o
fragmentos de ADN Y
ARN. Abarca
aplicaciones tan diversas
como la determinación
de la estructura primaria
(secuencia de
nucleótidos) de un
segmento de ADN, la
separación de
cromosomas enteros, o
la identificación de las
regiones de unión de
proteínas al ADN.
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17. EN GELES DE
AGAROSA
Se trata del método más
común de ADN. Pero
también es un método
habitual para su purificación
y obtención. Las agarosas
disponibles comercialmente
presentan una amplia gama
de grados de pureza. La
presencia de polisacáridos
sulfatados, contaminantes
de algunas agarosas,
pueden ser perjudicial.
Tales polisacáridos son
inhibidores de las enzimas
con las que va a tratarse el
ADN purificado en la
electroforesis (polimerasa,
ligadas, endonucleasas de
restricción).
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18. EN GELES DE AGAROSA
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19. DE CAMPO
PULSANTE
Las electroforesis descritas
hasta ahora permiten
separar fragmentos de ADN
de hasta 20 Kb, incluso se
pueden separar fragmentos
de hasta 50 Kb en geles de
agarosa de muy pequeña
concentración.
Esta nueva electroforesis
logra la separación de
fragmentos de varios
cientos de kb.
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22. Actualmente, bajo la denominación de cromatografía se
engloban los procesos en los que los componentes de una
mezcla, disueltos en una fase móvil, se van desplazando con
diferente velocidad a través de una fase estacionaria. La
adecuada elección de estas fases puede hacer que tales
diferencias se traduzcan en una separación efectiva de los
solutos, a la vez que estos pueden identificarse atendiendo a su
particular velocidad de avance.
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25. CROMATOGRAFIA EN
PAPEL
Es básicamente una
cromatografía donde la
fase estacionaria es el
agua retenida (absorbida)
entre las fibras de
celulosa de una hoja de
papel. También es posible
realizar estas
cromatografías en sentido
descendente,
en cuyo caso el
desplazamiento de la fase
móvil será el resultado de la
acción capilar más de la
gravedad.
Actualmente, la
cromatografía en papel se
utiliza poco y ha sido
ampliamente reemplazada
por la cromatografía en capa
fina. No obstante, todavía se
utiliza como una poderosa
herramienta pedagógica.
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27. CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIOIÓNICO
En este tipo de
cromatografía la fase
estacionaria tiene
grupos cargados que
interaccionan
electrostáticamente
con iones de signo
contrario de la fase
móvil.
Por tanto, la
principal diferencia
entre los distintos
intercambiadores de
iones será la
naturaleza de sus
grupos cargados.
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29. CROMATOGRAFÍA EN
CAPA FINA
Este modo
cromatográfico se
puede considerar como
una optimización de la
cromatografía en
papel. La idea
subyacente es la
misma: hacer avanzar,
por capilaridad,
una fase móvil sobre
una fase estacionaria
plana, de forma que los
solutos de la muestra
aplicadas se separen por
su diferencia. Tipos:
cromatografia en capa
fina ascendente y
descendente.
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31. CROMATOGRAFÍA EN
COLUMNA
En este modo
cromatográfico la fase
estacionaria se dispone
como el relleno de un
recipiente cilíndrico, de
vidrio, plástico o metal,
abierto por ambos
extremos, que se
denomina columna.
Dicho relleno,
también llamado lecho
cromatográfico, ha de
tener una estructura
porosa a fin de que pueda
fluir la fase móvil. El flujo
estará propiciado por la
acción de la gravedad o
por sistemas de bombeo
de alta presión
(cromatografía líquida de
alta resolución).
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33. CROMATOGRAFÍA
CONVENCIONAL
Bajo el nombre de
cromatografía convencional
se engloban todas las
cromatografías en columna
llevadas a cabo a baja
presión; aquéllas en las que
el flujo de la fase móvil es
propiciado por la simple
acción de la gravedad o por
el empleo de sencillos
sistemas de bombeo.
La cromatografía convencional
cubre una importante misión en
el terreno preparativo; por ello
se la conoce también como
cromatografia preparativa.
Permite la separación de
mezclas con volúmenes
considerables (solutos en
cantidades que van desde los
miligramos a los gramos). Esto
es una apreciable ventaja en
Bioquímica, donde con
frecuencia es preciso procesar
grandes cantidades de muestra
(por ejemplo: homogeneizados,
medios de cultivo, etc.).
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34. CROMATOGRAFÍA DE
PENETRABILIDAD
Éste es el más simple,
conceptual y
metodológicamente, de
todos los tipos de
cromatografía. El nombre
que se le ha dado es una
propuesta más entre las
muchas existentes; algunas
de ellas son: cromatografía
de filtración en gel,
cromatografía de
permeación en gel,
cromatografía de tamizado
molecular y cromatografía
de exclusión por tamaño.
Cuando este tipo de
cromatografía se lleva a
cabo en sistemas de alta
presión, parece que existe
un consenso en
denominarla como
cromatografía de exclusión
por tamaño.
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35. CROMATOGRAFÍA DE
AFINIDAD
En esencia la
cromatografía de
afinidad se basa en
anclar covalentemente a
un soporte
cromatográfico uno de
los componentes de
tales sistemas
biológicos. Si el segundo
componente viaja en la
fase móvil,
y ambos están
funcionalmente activos,
se producirá su unión
específica; es decir, su
retención en la columna.
De esta forma se podrán
purificar biomoléculas a
partir de mezclas muy
complejas, ya que el resto
de solutos pasarán de
largo y podrán ser lavados
de la columna.
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37. CROMATOGRAFIA SOBRE
HIDROXIAPATITO
El hidroxiapatito es una
forma cristalina de fosfato
cálcico que,
convenientemente
pulverizada, puede
emplearse como fase
estacionaria. Dos de sus
principales campos de
aplicación son la purificación
de anticuerpos
monoclonales y la
separación de diferentes
formas de DNA.
Así, es posible separar
mediante este tipo de
cromatografía el DNA
desnaturalizado del nativo,
o el DNA de cadena
sencilla del DNA de doble
cadena; incluso es posible
separar el DNA
superenrrollado de las
dobles hélices lineales.
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38. CROMATOGRAFÍA
DE GASES
En esta técnica de
separación, la muestra se
volatiliza y posteriormente
es inyectada en una
columna cromatográfica. El
proceso de elución es
llevado a cabo por la
acción de un gas inerte
(fase móvil), cuya única
función es la de transportar
la muestra a través de la
columna.
En función de la naturaleza
de la fase estacionaria, la
cromatografía de gases
puede ser de dos tipos:
- Cromatografía gas-
líquido (GLC).
- Cromatografía gas-sólido
(GSC).
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