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Fiches Milieux De Culture
Ensemencement                 Composition             Caractères              Résultats
   (Technique)                                           recherchés

   Isolement par la       • extrait de viande    1,0g    Ces milieux             Certaines colonies
   méthode des cadrans.   • extrait de levure    2,0g    permettent la           peuvent avoir des
                          • peptone              5,0g    culture des bactéries   couleurs caractéristique.
                          • chlorure de sodium   5,0g    peu exigeantes
                          • Agar                 15,0g

                          • pH                   7.4




Aspect du milieu avant utilisation                        Aspect du milieu après utilisation
Ensemencement                         Composition                   Caractères          Résultats
(Technique)                                                         recherchés

• Milieu présenté en         Gélose nutritive additionnée           Mise en évidence    L’hydrolyse de la caséine se
boîte.                       à 45 °C d’un volume de lait stérile.   de l’hydrolyse de   traduit par l’apparition
• Faire une strie centrale                                          la caséine,         d’une zone claire autour de
à la surface du milieu.                                             protéine du lait.   la culture.
• Incuber 24H à 7jours à
la température désirée.




        Aspect du milieu                                                           Aspect du milieu




           Caséinase -
                                                                                          Caséinase +
Principe                                             Composition           Technique

                                                    • Gélose de base :       • Ajouter 5 % de sang dans une gélose
  • Ce milieu contient des facteurs de croissance   Gélose Mueller-Hinton    fondue dont la température a été
  variés par la présence d’un mélange de            ou Gélose Columbia.      ramenée aux environs de 45°C.
  peptone. C’est un milieu riche.                   • Ajouter au moment de   Bien mélanger.
  L’amidon de maïs neutralise les substances        l’emploi à la gélose     • Porter le tube ou le flacon dans un
  toxiques libérées par les cultures.               fondue 5 à 10 % de       bain-marie dont la température est
  • C’est un milieu d’isolement enrichi préconisé   sang frais défibriné.    voisine de 80°C et l’y maintenir pendant
  pour l’étude des Neisseria notamment le                                    15 minutes.
  méningocoque. Il est aussi utilisé pour la                                 • Laisser refroidir aux environs de 45°C.
  culture de Haemophilus influenza.                                          Bien homogénéiser et couler en boîtes
                                                                             de Pétri.



Aspect du milieu avant utilisation                              Aspect du milieu après utilisation
Principe                                                    Composition                   Lecture

• Ce milieu contient une base nutritive         • Bio-Trypcase                      10    S. aureus donne des colonies :
riche.                                          • Extrait de levure                 5     - noires
• Il contient des accélérateurs de la           • Chlorure de lithium
                                                                                    2     - brillantes, convexes
croissance : le pyruvate de sodium et le        • Pyruvate de sodium
glycocolle                                      • Glycocolle                        5     - de 1 à 2 mm de diamètre
• Il contient 2 inhibiteurs : le chlorure de    • Tellurite de potassium            10    - entourées d'un halo clair.
lithium et le tellurite de potassium.           • Emulsion de jaune d'oeuf à 10 %   12
• Il contient 3 critères de différenciation:    • Agar                              1mL   La plupart des autres espèces de
     - réduction du tellurite en tellure noir                                       1mL   staphylocoques sont inhibées ou ne
     - protéolyse des protéines du jaune        pH = 7,2
                                                                                    15    produisent pas de colonies
d'oeuf ⇒ halo clair autour de la colonie
     - hydrolyse par une lécithinase des                                                  caractéristiques en 24 heures.
lécithines du jaune d'oeuf ⇒ liseré blanc                                                 Les microcoques, Bacillus et quelques
opaque autour de la colonie                                                               levures peuvent pousser sur ce
    lécithine + H20 diglycérides + choline                                                milieu.



Aspect du milieu avant utilisation                                          Aspect du milieu après utilisation
Intérêt                 Principe                                              Composition              Lecture

Ce milieu facilite la   C’est un milieu non sélectif qui est utilisé    • Peptone             5g       La fermentation du lactose
différenciation des     pour l’isolement de nombreuses espèces          • Extrait de viande   3g       se traduit par le virage du
colonies par le         appartenant aux entérobactéries.
                                                                        • Lactose             10g      bromocrésol pourpre à sa
caractère lactose.      • C’est un milieu contenant une base
Il inhibe               nutritive ordinaire permettant la pousse        • Agar                15g      teinte acide jaune.
l’envahissement         des bactéries non exigeantes.                   • BCP                 0,025g
de la surface de la     • Il contient un critère de différenciation :   • Eau qsp 1 L                  Colonies jaunes → bactéries
boite par des           la fermentation du lactose révélée par le                                      lactose +
nappes de Proteus       virage en milieu acide de l’indicateur                                         Colonies bleues → bactéries
car il ne contient      coloré de pH, le bromocrésol pourpre.
                                                                        pH = 7
pas d'électrolytes.     • Il est déficient en électrolytes : absence                                   lactose –
                        d'ions minéraux.




Aspect du milieu avant utilisation                                           Aspect du milieu après utilisation
Intérêt          Principe                                               Composition            Lecture
                                                                          (en g/L)
 Milieu          • Ce milieu contient une base nutritive          • Bio-Trypcase        17     •Pousse de petites colonies
d'isolement      riche grâce aux 2 peptones et à l’extrait        •Bio-Thionz           3
                                                                                               sur le milieu →
                 de levure.                                       •Extrait de levure    5
sélectif des                                                                            10     Streptocoques D
                 • Il contient 2 inhibiteurs : la bile de boeuf   •Bile de boeuf
Streptocoques    et l’azide de sodium. Ces 2 inhibiteurs          •Chlorure de sodium   5
D                permettent de sélectionner la culture des        •Citrate de sodiu
                                                                                        1      •Colonies entourées d'un
                                                                                        1
(entérocoques    streptocoques du groupe D                        •Esculine             0,5    halo noir → esculine +
et non           • Il contient un critère de différenciation :    •Citrate de fer       0,25
entérocoques).   l’hydrolyse de l’esculine révélée par le         •Ammoniacal           13,5
                 citrate de fer ammoniacal :
                 Esculine + H2O → Glucose + Esculétine
                                                  ↓
                                   citrate de fer ammoniacal
                                   Coloration noire
                 •Les bactéries esculines + présentent des
                 colonies noires.
                 • C’est un milieu sélectif des
                 streptocoques peu exigeants.




       Aspect du milieu avant utilisation                              Aspect du milieu après utilisation
Intérêt           Principe                                          Composition               Lecture
                                                                      (en g/L)
La gélose au      • Ce milieu gélosé est relativement        • Peptone                20      • Sur ce milieu de très
cétrimide est     pauvre, et contient un antiseptique: le    • Sulfate de potassium   10      nombreuses bactéries sont
                  cétrimide (bromure de N-cétyl-N, N, N-     • Chlorure de            3       inhibées de par la présence de
un milieu
                  triméthylammonium).                        magnésium                        l'antiseptique cétrimide, ainsi
sélectif, qui     • Ce milieu, proche du milieu King A,      • Hydrogénophospate      0,3     que par la présence de
permet            favorise aussi la production de pigments   de potassium                     l'antibiotique acide nalidixique
l'isolement des   par P.aeruginosa.                          • Cétrimide              0,2     (inhibiteur de nombreuses
Pseudomonas                                                  • Acide nalidixique      0,015   bactéries à Gram négatif).
et notamment                                                 • Agar                   13      •A 37°C se développent
                                                             • Eau distillée (qsp)    1L      P.aeruginosa, et éventuellement,
de
                                                                                              P.putida, P.stutzeri et
P.aeruginosa.                                                                                 P.maltophilia.
                                                                                              •A 42°C il y a développement
                                                                                              presque exclusif de P.aeruginosa.

                                                                                              Milieu bleu : pyocyanine
                                                                                              Milieu jaune- vert : pyoverdine




       Aspect du milieu avant utilisation                           Aspect du milieu après utilisation

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Fiches Milieux De Culture

  • 2. Ensemencement Composition Caractères Résultats (Technique) recherchés Isolement par la • extrait de viande 1,0g Ces milieux Certaines colonies méthode des cadrans. • extrait de levure 2,0g permettent la peuvent avoir des • peptone 5,0g culture des bactéries couleurs caractéristique. • chlorure de sodium 5,0g peu exigeantes • Agar 15,0g • pH 7.4 Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
  • 3. Ensemencement Composition Caractères Résultats (Technique) recherchés • Milieu présenté en Gélose nutritive additionnée Mise en évidence L’hydrolyse de la caséine se boîte. à 45 °C d’un volume de lait stérile. de l’hydrolyse de traduit par l’apparition • Faire une strie centrale la caséine, d’une zone claire autour de à la surface du milieu. protéine du lait. la culture. • Incuber 24H à 7jours à la température désirée. Aspect du milieu Aspect du milieu Caséinase - Caséinase +
  • 4. Principe Composition Technique • Gélose de base : • Ajouter 5 % de sang dans une gélose • Ce milieu contient des facteurs de croissance Gélose Mueller-Hinton fondue dont la température a été variés par la présence d’un mélange de ou Gélose Columbia. ramenée aux environs de 45°C. peptone. C’est un milieu riche. • Ajouter au moment de Bien mélanger. L’amidon de maïs neutralise les substances l’emploi à la gélose • Porter le tube ou le flacon dans un toxiques libérées par les cultures. fondue 5 à 10 % de bain-marie dont la température est • C’est un milieu d’isolement enrichi préconisé sang frais défibriné. voisine de 80°C et l’y maintenir pendant pour l’étude des Neisseria notamment le 15 minutes. méningocoque. Il est aussi utilisé pour la • Laisser refroidir aux environs de 45°C. culture de Haemophilus influenza. Bien homogénéiser et couler en boîtes de Pétri. Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
  • 5. Principe Composition Lecture • Ce milieu contient une base nutritive • Bio-Trypcase 10 S. aureus donne des colonies : riche. • Extrait de levure 5 - noires • Il contient des accélérateurs de la • Chlorure de lithium 2 - brillantes, convexes croissance : le pyruvate de sodium et le • Pyruvate de sodium glycocolle • Glycocolle 5 - de 1 à 2 mm de diamètre • Il contient 2 inhibiteurs : le chlorure de • Tellurite de potassium 10 - entourées d'un halo clair. lithium et le tellurite de potassium. • Emulsion de jaune d'oeuf à 10 % 12 • Il contient 3 critères de différenciation: • Agar 1mL La plupart des autres espèces de - réduction du tellurite en tellure noir 1mL staphylocoques sont inhibées ou ne - protéolyse des protéines du jaune pH = 7,2 15 produisent pas de colonies d'oeuf ⇒ halo clair autour de la colonie - hydrolyse par une lécithinase des caractéristiques en 24 heures. lécithines du jaune d'oeuf ⇒ liseré blanc Les microcoques, Bacillus et quelques opaque autour de la colonie levures peuvent pousser sur ce lécithine + H20 diglycérides + choline milieu. Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
  • 6. Intérêt Principe Composition Lecture Ce milieu facilite la C’est un milieu non sélectif qui est utilisé • Peptone 5g La fermentation du lactose différenciation des pour l’isolement de nombreuses espèces • Extrait de viande 3g se traduit par le virage du colonies par le appartenant aux entérobactéries. • Lactose 10g bromocrésol pourpre à sa caractère lactose. • C’est un milieu contenant une base Il inhibe nutritive ordinaire permettant la pousse • Agar 15g teinte acide jaune. l’envahissement des bactéries non exigeantes. • BCP 0,025g de la surface de la • Il contient un critère de différenciation : • Eau qsp 1 L Colonies jaunes → bactéries boite par des la fermentation du lactose révélée par le lactose + nappes de Proteus virage en milieu acide de l’indicateur Colonies bleues → bactéries car il ne contient coloré de pH, le bromocrésol pourpre. pH = 7 pas d'électrolytes. • Il est déficient en électrolytes : absence lactose – d'ions minéraux. Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
  • 7. Intérêt Principe Composition Lecture (en g/L) Milieu • Ce milieu contient une base nutritive • Bio-Trypcase 17 •Pousse de petites colonies d'isolement riche grâce aux 2 peptones et à l’extrait •Bio-Thionz 3 sur le milieu → de levure. •Extrait de levure 5 sélectif des 10 Streptocoques D • Il contient 2 inhibiteurs : la bile de boeuf •Bile de boeuf Streptocoques et l’azide de sodium. Ces 2 inhibiteurs •Chlorure de sodium 5 D permettent de sélectionner la culture des •Citrate de sodiu 1 •Colonies entourées d'un 1 (entérocoques streptocoques du groupe D •Esculine 0,5 halo noir → esculine + et non • Il contient un critère de différenciation : •Citrate de fer 0,25 entérocoques). l’hydrolyse de l’esculine révélée par le •Ammoniacal 13,5 citrate de fer ammoniacal : Esculine + H2O → Glucose + Esculétine ↓ citrate de fer ammoniacal Coloration noire •Les bactéries esculines + présentent des colonies noires. • C’est un milieu sélectif des streptocoques peu exigeants. Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
  • 8. Intérêt Principe Composition Lecture (en g/L) La gélose au • Ce milieu gélosé est relativement • Peptone 20 • Sur ce milieu de très cétrimide est pauvre, et contient un antiseptique: le • Sulfate de potassium 10 nombreuses bactéries sont cétrimide (bromure de N-cétyl-N, N, N- • Chlorure de 3 inhibées de par la présence de un milieu triméthylammonium). magnésium l'antiseptique cétrimide, ainsi sélectif, qui • Ce milieu, proche du milieu King A, • Hydrogénophospate 0,3 que par la présence de permet favorise aussi la production de pigments de potassium l'antibiotique acide nalidixique l'isolement des par P.aeruginosa. • Cétrimide 0,2 (inhibiteur de nombreuses Pseudomonas • Acide nalidixique 0,015 bactéries à Gram négatif). et notamment • Agar 13 •A 37°C se développent • Eau distillée (qsp) 1L P.aeruginosa, et éventuellement, de P.putida, P.stutzeri et P.aeruginosa. P.maltophilia. •A 42°C il y a développement presque exclusif de P.aeruginosa. Milieu bleu : pyocyanine Milieu jaune- vert : pyoverdine Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation