2.  Esla técnica de producir imágenes
visibles de estructuras o detalles
demasiado pequeños para ser
percibidos a simple vista. En este
campo ha habido gran impulso por
parte de la física.

3.  Robert Hooke fue quien le dio el nombre de célula a la
unidad estructural y funcional todos los seres vivos. Su
observación la realizo en un pedazo de corcho con un
microscopio rudimentario en el año 1655, sin embargo, no
estaba consciente de su descubrimiento. Posteriormente
Anthony Leewenhoek (1670) observó una gran cantidad de
organismos unicelulares, a los que llamo animalículos. Pero
no fue sino hasta 1838 cuando Shwann y Schleiden lanzaron
su teoría celular, la cual sigue vigente hasta el día hoy. Este
es el punto de partida de la biología celular como ciencia.
Su teoría nos dice que todos los organismos vivos están
compuestos por células y que estas células no se forman por
generación espontanea sino que provienen de otras células.
Por tal motivo se reconoce la importancia de la célula como
unidad mínima de vida y estructura fundamental de todo
organismo vivo.
 La célula sin embargo, es invisible al ojo humano. Por
suerte contamos contamos con un instrumento básico de
laboratorio.

4.  El microscopio es un instrumento que permite
observar objetos que son demasiado pequeños
para ser vistos a simple vista.
 el termino microscopio se deriva de mikros
(pequeños) skoopeo (observar).
 El microscopio óptico líder en investigación
celular porque es económico, sencillo de utilizar
y nos permite ampliar la imagen de la célula
hasta unas mil veces. Pero su resolución
(capacidad para distinguir dos puntos separados
por pequeñas distancias) no permite la
observación de organelos celulares.

5. Cabe destacar que en la observación de la
célula es mas importante el poder de
resolución que el poder de ampliación.
 Existen dos grandes tipos de
microscopios:
 simple: lente convergente (lupa)
 Compuesto: esta formado por un lente
objetivo y un ocular (el microscopio).

6.  Los microscopios pertenecen a dos clases, el
de luz (óptico) y el electrónico, según el
principio en que se base la amplificación.
 MICROSCOPIO ELECTRONICO: se basa para
obtener la imagen amplificada, en un haz de
electrones en lugar de ondas luminosas. Se
encuentran la microscopia de barrido y la de
transmisión.
 Permite la observación de las estructuras
interiores de las células.
 Sirve para visualizar virus.

7.  Permite la observación de muestra en cortes
ultra finos. Un MET dirige el haz de electrones
hacia el objeto que se desea aumentar.

8.  Crea una imagen ampliada de la superficie de un
objeto. No es necesario cortar el objeto en capas
para observarlo con un MEB, sino que puede
colocarse en el microscopio con muy pocos
preparativos. El MEB explora la superficie de la
imagen punto por punto, al contrario que el MET,
que examina una gran parte de la muestra cada
vez.

10. MICROSCOPIO ÓPTICO:
La amplificación se obtiene por un sistema
de lentes ópticas. Las mas importantes son:
microscopia de campo luminoso, de luz
ultravioleta, de contraste de fases y de
campo oscuro.

11.  El microscopio de campo oscuro utiliza un
haz enfocado de luz muy intensa en forma de
un cono hueco concentrado sobre el
espécimen.
 Esta forma de iluminación se utiliza para
analizar elementos biológicos transparentes y
sin pigmentar, invisibles con iluminación
normal, sin fijar la muestra, es decir, sin
matarla.
 También es bastante utilizado en la
observación de muestras metalográficas para
la observación de detalles en superficies con
alta reflectancia.

12. El microscopio de fluorescencia es una variación del
microscopio óptico, dotado de luz ultravioleta en el que
los objetos son iluminados por rayos de una determinada
longitud de onda.
La imagen observada es el resultado de la radiación
electromagnética emitida por las moléculas que han
absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con
mayor longitud de onda.
Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se
deben colocar filtros apropiados debajo del condensador
y encima del objetivo.
Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia
(vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.

14.  Es un microscopio óptico modificado que
permite contrastar sustancias de
diferente grosor o densidad.
 Se utiliza para visualizar estructuras
celulares sin necesidad de usar colorantes
o matar microorganismos.

15. SISTEMA ÓPTICO :
 1. OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía
la imagen del objetivo. Están constituidos por dos lentes
separadas por un diafragma. El aumento que producen se indica
por 4x, 5x, 6x, 8x y 10x.
 2. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la
imagen de ésta. Existen dos grupos de objetivos: los secos son
aquellos en los cuales entre la muestra y el objetivo solo hay
aire; y los de inmersión o húmedos, aunque en los cuales entre la
muestra y el objetivo se coloca un liquido, que por su índice de
refracción permite mayor luminosidad. El liquido puede ser agua,
glicerina, aceite de cedro, entre otros.
 Los objetivos más frecuentes son los de 4X, 10X, 40X y 100X
aumentos. Este último de 100x se llama de inmersión ya que para
su utilización se necesita aplicar aceite de cedro sobre la
preparación. Y se utiliza para observar láminas coloreadas
completamente secas.
El poder de aumento de cada objetivo se indica en el número
grabado en la manga del lente. Generalmente el objetivo de 4X
se encuentra marcado por un anillo rojo, el de 10X por un anillo
de color amarillo, el de 40=x con un anillo de color azul y el de
100X con un anillo de color blanco.

16.  3. CONDENSADOR: Lente que concentra los
rayos luminosos sobre la preparación. Se sitúa
debajo de la platina.
 4. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que
entra en el condensador.
 5. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el
condensador. Las lentes presentan dos defectos
ópticos inherentes : aberración esférica y
acromática.
 La aberración esférica no se logra enfocar
directamente todo el campo del microscopio, lo
que produce imágenes borrosas.
 La aberración acromática produce irisaciones
(anillos coloreados) en torno a los objetos que
están en el campo del microscopio. Este defecto
se elimina en parte mediante el uso de lentes
múltiples. Lentes correctoras adicionales).

17.  SISTEMA MECÁNICO
1. SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene
dos partes: el pie o base y el brazo.
2. PLATINA: Lugar donde se deposita la
preparación.
3. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes
oculares. Puede ser monocular, binocular.
4.REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes
objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
5. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que
aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto.

19. MICROSCOPIO OPTICO MICROSCOPIO ELECTRONICO
La Potencia amplificadora de un utiliza electrones para iluminar un
microscopio óptico está limitada por objeto. Dado que los electrones
la longitud de onda de la luz visible. tienen una longitud de onda mucho
menor que la de la luz pueden
mostrar estructuras mucho más
pequeñas.
La longitud de onda más corta de la La longitud de onda de los
luz visible es de alrededor de 4.000 electrones que se utilizan en los
angstroms (1 angstrom es microscopios electrónicos es de
0,0000000001 metros). alrededor de 0,5 angstroms.
Lentes de cristal o de vidrio, con Lentes magnéticas, alambre de
distancias focales fijas. cobre enrollado, cuya distancia focal
varia en relación con la corriente
que pasa por la bobina.
Sistema de vacio no necesario. Sistema de vacio imprescindible,
para facilitar desplazamiento de
electrones.

21.  1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y
bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió
correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas
condiciones.
 2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las
pinzas metálicas.
 3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en
posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es
de bacterias.
 4. Para realizar el enfoque:
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la
preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe
hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que
se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación
pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.

22.  Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando
lentamente el objetivo de la preparación con el
macrométrico y, cuando se observe algo nítida la
muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque
fino.
 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya
casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el
micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible
volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy
poca distancia de la preparación y por ello es fácil que
ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la
preparación si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
 6. Empleo del objetivo de inmersión:
 Bajar totalmente la platina.
 Subir totalmente el condensador para ver claramente el
círculo de luz que nos indica la zona que se va a
visualizar y donde habrá que echar el aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión
dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.

23.  Colocar una gota mínima de aceite de
inmersión sobre el círculo de luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta
la posición del objetivo de inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la
platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como
si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico.
La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun
menor que con el de 40x por lo que el riesgo
de accidente es muy grande.

24.  Una vez se haya puesto aceite de inmersión
sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
mancharía de aceite. Por tanto, si desea
enfocar otro campo, hay que bajar la platina y
repetir la operación desde el paso 3.
 Una vez finalizada la observación de la
preparación se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el
revólver. En este momento ya se puede retirar
la preparación de la platina. Nunca se debe
retirar con el objetivo de inmersión en posición
de observación.
 Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado
empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.

25.  Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor
aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte
mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo
cubierto con su funda.
 Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo
cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si
no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro
de un armario para protegerlo del polvo.
 Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
 No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando
el microscopio.
 Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite
que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel
de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por
la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza,
porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las
lentes y su sujeción.
 No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).

26.  7. El cambio de objetivo se hace girando el
revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente
con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo
ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
 8. Mantener seca y limpia la platina del
microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de
aceite, limpiarla con un paño humedecido en
xilol.
 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre
los microscopios al finalizar la sesión práctica
y, al acabar el curso, encargar a un técnico
un ajuste y revisión general de los mismos.