Recuento manual de leucocitos en cámara

1. RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS
FUNDAMENTO.
Consiste en realizar el recuento de los leucocitos presentes en una dilución de sangre. Es un método poco usado debido al elevado
error que presenta. La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA en líquido de Turck, y realizar el recuento de las
células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico. Para calcular el valor total de recuento
tendremos en cuenta la dilución utilizada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.
MATERIAL Y REACTIVOS.
 Microscopio.
 Pipetas de 20 µl
 Cámara de Neubauer.
 Sangre anticoagulada con EDTA.
 Papel de filtro.
 Líquido diluyente Türck. La composición del líquido de Türck es la siguiente:
O 2 ml de ácido acético glacial
O 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
O 100 ml de agua destilada
DESTACADO.
El ácido acético provoca la lisis de los hematíes sin alterar los leucocitos y el violeta de genciana tiñe ligeramente de azul el núcleo de
los leucocitos mejorando la observación
TÉCNICA.
1. Preparar un tubo con 0,38 ml (380 µL) de líquido de Turck.
2. Pipetear 20 μl de sangre. Limpiar la sangre adherida en la parte exterior de la punta de la pipeta con una gasa o
papel de filtro sin arrastrar sangre del interior. Poner los 20 μl en el tubo con diluyente. En la parte superior del
tubo lava varias veces con diluyente el interior de la punta de pipeta para conseguir arrastrar toda la sangre,
evitando que quede dentro de la punta de la pipeta.
3. Mezclar suavemente la sangre y el diluyente.
4. Montar la cámara de igual forma que en el recuento de rojos.
5. Llenar la cámara por capilaridad. (Debe llenarse de forma que el líquido ocupe toda su superficie)
6. Dejar que repose durante 5 minutos para que sedimenten los leucocitos.
7. Enfoca primero con objetivo 10x y después con el de 20x. Comprueba que la distribución de las células es
uniforme.
8. Enfoca ahora con 40x. Cuenta todos los leucocitos presentes en los 16 cuadros de los 4 cuadros grandes situados
en las esquinas de la cámara.
9. ¡Ten cuidado! No cuentes artefactos microscópicos como partículas extrañas, pequeñas burbujas, etc. Recuerda
que para realizar un recuento correcto y no contar el mismo leucocito dos veces debes seguir el siguiente criterio.
“Si existen células sobre los bordes exteriores de un cuadrado, se cuentan solo aquellos situados sobre las líneas
superior y derecha y no se cuentan los que están situados en las líneas inferior e izquierda”
10. Calcular la cifra de leucocitos de la muestra (expresado en leucocitos por mm3
de sangre) teniendo en cuenta la
dilución realizada y el volumen total en el que se ha realizado el recuento.
Las imágenes siguientes seguro que te ayudaran a entender cómo se debe realizar el recuento de leucocitos con el
microscopio.

2. RESULTADOS.
Para obtener el resultado final se utiliza la siguiente fórmula:
Número de leucocitos por mm3
= L · D · CV
L es el número de leucocitos contados.
D es el factor de dilución.
CV es la corrección de volumen.
Para aplicar la fórmula anterior debes tener en cuenta las siguientes consideraciones:
 Como hemos mezclado 20 microlitros de sangre y 380 microlitros de líquido de Turck la dilución realizada es
1:20. Por tanto deberemos multiplicar por veinte. (D = 20).
 Como el recuento lo hemos hecho en los 16 cuadros de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la
cámara, el volumen total en el que hemos realizado el recuento será 0,1 mm3
· 4 = 0,4 mm3
. Como el resultado del
recuento lo tienes que expresar por mm3
la corrección de volumen (CV) será igual a 1/0,4 mm3
= 2,5
Si utilizas exactamente estas condiciones, es decir cuentas los leucocitos en 0,4 mm3
y realizas una dilución 1:20 la
fórmula se simplifica bastante, tal y como puedes ver.
Número de leucocitos por mm3
= Número de leucocitos contados · 2,5·20
Número de leucocitos por mm3
= Número de leucocitos contados · 50
EJERCICIO RESUELTO.
Calcula el número de leucocitos por mm3
, si tras realizar una dilución 1:20 de la sangre, realizamos el recuento en los
cuatro cuadrados grandes de las esquinas de una cámara de Neubauer y se obtienen los siguientes resultados.
Cuadrado A. 24 leucocitos contados.
Cuadrado B: 27 leucocitos contados.
Cuadrado C: 25 leucocitos contados.
Cuadrado D: 23 leucocitos contados.

3.  L = 24+27+25+23 = 99. Es decir, el número de leucocitos contados es 99
 CV = 2,5 La corrección de volumen es igual a 2,5 ya que hemos realizado el recuento en 0,4 mm3
correspondiente los cuatro cuadrados grandes de las esquinas.
 D = 20. Hemos realizado una dilución 1:20
Número de leucocitos por mm3
= 99 · 2,5 · 20 = 4.950 leucocitos por mm3