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UNIVERSIDAD DE ORIENTE NÚCLEO BOLÍVAR ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA CATEDRA: PARASITOLOGÍA. ENFERMERIA. COCCIDIOS  LICENCIADA MÓNICA TAGLIOLA
Infección emergente: Una infección que ha aparecido recientemente en una población “ Su incidencia se ha incrementado en las últimas dos décadas”   Infección re-emergente: Una infección que ha existido en el pasado pero su incidencia o distribución geográfica se ha incrementado rapidamente. Factores específicos precipitantes pueden ser identificados
[object Object],[object Object],Las Enfermedades Infecciosas emergentes :
Coccidios Intestinales : Generalidades ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Coccidios Intestinales : Generalidades ,[object Object],[object Object]
Coccidios. Taxonomia Reino  Protista Filo  Apicomplexa (Sporozoa) Clase  Sporozoa (Sporozoasida) Orden  Eucoccidida (Eucoccidiorida) Suborden  Eimeriina (Eimeriorina)   Família   Sarcocystidae  Eimeridae  Cryptosporidae   Cryptosporidium C. parvum  (Mamiferos) C. muris   Eimeria Isospora Cyclospora Toxoplasma Sarcocystis Neospora Babesia, Theileria
Cryptosporidiosis.  ,[object Object],[object Object]
Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo  (Mosier & Oberst, 2000). Cryptosporidiosis .
Cryptosporidium parvum ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Tasa de infección por  C. parvum  entre personas inmunocompetentes e  infectadas con HIV en áreas industrializadas y en vías de desarrollo. Cryptosporidium parvum
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Cryptosporidium parvum
Variable  Cyclospora  Cryptosporidium  Isopora Tamaño Ooquiste   8-10   4-6   20-30 x 10-19 No. esporoquistes  2  Ninguno  2 No. esporozoitos  2  4  4 ZNm  Variable  Si  Si Autofluorescencia  Verde-Azul  Brillante  Variable
 
Transmisión 1) Directa:  persona a persona. Los ooquistes son infectantes al ser expulsados  2) A través del agua:   con 30 ooquistes puede ocurrir la infección (URBANA)  3) Zoonotica:  ambos genotipos están presentes en animales (RURAL)
Crytosporidium parvum A. Quiste. Soluc. Salina B. Quiste. ZNm A B
Diagnóstico A. Diagnostico parasitológico Demostración de ooquistes en heces Visualización de ooquistes/otros estadios en secreciones y biopsia intestinal 1. Métodos de concentración  2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes 3. Histología B. Detección de Antígenos en Heces Kit comerciales (IFI, IFD, ELISA) Métodos directos
C. Diagnostico Inmunológico IFI Ac monoclonales y policlonales ELISA Inmunoblot (Wester Blot) D. Electroforesis E. Biologia molecular: PCR Métodos indirectos
Al fresco. Gránulos negros en los ooquistes Contraste de fase. Flotacion de Sheather. Ooquistes refractiles. C. parvum El método de flotación de Sheather solo es usado con heces frescas
Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Diferciar de las levaduras. C. parvum Varias modificaciones de la coloración  ZN ( acid-fast)  pueden ser usadas.  La coloración de los ooquistes varia según la modificación usada  de rosado a rojo intenso.
Cyclospora cayetanensis ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Cylospora cayetanensis Taxonomía Reino  Protista SubFilo  Apicomplexa Subclase:  Cossidiasina Orden  Eucoccidiorida Familia  Eimeriidae Género   Cyclospora
Ciclo vital de  C. cayetanensis
Identificación de ooquistes en especimenes fecales por microscopia de luz Otros métodos bajo investigación A. Microscopia Guías básicas 1) Muestras de heces multiples (al menos 3) 2) Usar métodos de concentración (Formol eter) 3) Técnica diagnostica de elección: Disponibilidad de equipos y reactivos Experiencia Tiempo y costo PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE  Cyclospora
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA  Cyclospora 1) Montaje el fresco a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia) Esferas refractiles Otros objetos con aspecto similar No permanente b) Fluorescencia bajo LUV Autofluorescencia verde (330-335 nm) Otros objetos con aspecto similar No permanente Microscopio de fluorescencia Contraste de fase: fácil
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA  Cyclospora 2) Coloración Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun Color rojo sobre un fondo verde azulado Pueden tener tonos variables (algunos no coloreados) Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o distorcionados) Gránulos y/o tener una pared característica Permanente Artefactos (errores diagnósticos) 3) Coloración con Safranina Se colorean uniformemente de rojo a naranja Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e. microonda) 1997: Safranina modificada con calentamiento en microonda (Visvesvara et al.)
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA  Cyclospora 4) Otros Métodos:  Coloración tricromica Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este método Pueden aparecer no coloreados Cuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para confirmar Identificación histológica en biopsias intestinales No rutina  Varias observaciones B. Ensayo de Esporulación C. Métodos Moleculares
DIFERENCIACI ÓN ENTRE OOQUISTES DE  Cyclospora y Cryptosporidium
 
Yodo de D’antoni Lugol C. cayetanensis
Solución Salina Al fresco  (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior  dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa .
Contraste de fase. Glóbulos refractiles  dentro del ooquiste Contraste de fase. 2 esporoquistes. Esporozoitos no visibles C. cayetanensis
Kinyoun.  C. cayetanensis
Kinyoun + Hematoxilina. Rojos sobre fondo gris. Epifluorescencia ultravioleta C. cayetanensis
Kinyoun.  C. parvun  +  C. cayetanensis Kinyoun.  C. parvun  +  C. cayetanensis   C. cayetanensis
Isospora belli ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Al fresco. Heces recientes: Ooquiste con  1 esporoblasto Después de varias horas a temperatura ambiente. Ooquiste con 2 esporoquistes. Ooquistes esporulados no son  vistos en heces frescas
Kinyoun. Kinyoun. Post-tratamiento I. belli
Material preservado en formalina. Epifluorescencia I. belli
Variable  Cyclospora  Cryptosporidium  Isopora Tamaño Ooquiste   8-10   4-6   20-30 x 10-19 No. esporoquistes  2  Ninguno  2 No. esporozoitos  2  4  4 ZNm  Variable  Si  Si Autofluorescencia  Verde-Azul  Brillante  Variable
ACIDO-ALCOHOL  MODIFICADA (Kinyoun)  C. parvum C. cayetanensis I. belli SAFRANINA

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  • 1. UNIVERSIDAD DE ORIENTE NÚCLEO BOLÍVAR ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA CATEDRA: PARASITOLOGÍA. ENFERMERIA. COCCIDIOS LICENCIADA MÓNICA TAGLIOLA
  • 2. Infección emergente: Una infección que ha aparecido recientemente en una población “ Su incidencia se ha incrementado en las últimas dos décadas” Infección re-emergente: Una infección que ha existido en el pasado pero su incidencia o distribución geográfica se ha incrementado rapidamente. Factores específicos precipitantes pueden ser identificados
  • 3.
  • 4.
  • 5.
  • 6. Coccidios. Taxonomia Reino Protista Filo Apicomplexa (Sporozoa) Clase Sporozoa (Sporozoasida) Orden Eucoccidida (Eucoccidiorida) Suborden Eimeriina (Eimeriorina) Família Sarcocystidae Eimeridae Cryptosporidae Cryptosporidium C. parvum (Mamiferos) C. muris Eimeria Isospora Cyclospora Toxoplasma Sarcocystis Neospora Babesia, Theileria
  • 7.
  • 8. Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo (Mosier & Oberst, 2000). Cryptosporidiosis .
  • 9.
  • 10. Tasa de infección por C. parvum entre personas inmunocompetentes e infectadas con HIV en áreas industrializadas y en vías de desarrollo. Cryptosporidium parvum
  • 11.
  • 12. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
  • 13.  
  • 14. Transmisión 1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes al ser expulsados 2) A través del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la infección (URBANA) 3) Zoonotica: ambos genotipos están presentes en animales (RURAL)
  • 15. Crytosporidium parvum A. Quiste. Soluc. Salina B. Quiste. ZNm A B
  • 16. Diagnóstico A. Diagnostico parasitológico Demostración de ooquistes en heces Visualización de ooquistes/otros estadios en secreciones y biopsia intestinal 1. Métodos de concentración 2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes 3. Histología B. Detección de Antígenos en Heces Kit comerciales (IFI, IFD, ELISA) Métodos directos
  • 17. C. Diagnostico Inmunológico IFI Ac monoclonales y policlonales ELISA Inmunoblot (Wester Blot) D. Electroforesis E. Biologia molecular: PCR Métodos indirectos
  • 18. Al fresco. Gránulos negros en los ooquistes Contraste de fase. Flotacion de Sheather. Ooquistes refractiles. C. parvum El método de flotación de Sheather solo es usado con heces frescas
  • 19. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Diferciar de las levaduras. C. parvum Varias modificaciones de la coloración ZN ( acid-fast) pueden ser usadas. La coloración de los ooquistes varia según la modificación usada de rosado a rojo intenso.
  • 20.
  • 21. Cylospora cayetanensis Taxonomía Reino Protista SubFilo Apicomplexa Subclase: Cossidiasina Orden Eucoccidiorida Familia Eimeriidae Género Cyclospora
  • 22. Ciclo vital de C. cayetanensis
  • 23. Identificación de ooquistes en especimenes fecales por microscopia de luz Otros métodos bajo investigación A. Microscopia Guías básicas 1) Muestras de heces multiples (al menos 3) 2) Usar métodos de concentración (Formol eter) 3) Técnica diagnostica de elección: Disponibilidad de equipos y reactivos Experiencia Tiempo y costo PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE Cyclospora
  • 24. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 1) Montaje el fresco a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia) Esferas refractiles Otros objetos con aspecto similar No permanente b) Fluorescencia bajo LUV Autofluorescencia verde (330-335 nm) Otros objetos con aspecto similar No permanente Microscopio de fluorescencia Contraste de fase: fácil
  • 25. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 2) Coloración Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun Color rojo sobre un fondo verde azulado Pueden tener tonos variables (algunos no coloreados) Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o distorcionados) Gránulos y/o tener una pared característica Permanente Artefactos (errores diagnósticos) 3) Coloración con Safranina Se colorean uniformemente de rojo a naranja Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e. microonda) 1997: Safranina modificada con calentamiento en microonda (Visvesvara et al.)
  • 26. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 4) Otros Métodos: Coloración tricromica Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este método Pueden aparecer no coloreados Cuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para confirmar Identificación histológica en biopsias intestinales No rutina Varias observaciones B. Ensayo de Esporulación C. Métodos Moleculares
  • 27. DIFERENCIACI ÓN ENTRE OOQUISTES DE Cyclospora y Cryptosporidium
  • 28.  
  • 29. Yodo de D’antoni Lugol C. cayetanensis
  • 30. Solución Salina Al fresco (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa .
  • 31. Contraste de fase. Glóbulos refractiles dentro del ooquiste Contraste de fase. 2 esporoquistes. Esporozoitos no visibles C. cayetanensis
  • 32. Kinyoun. C. cayetanensis
  • 33. Kinyoun + Hematoxilina. Rojos sobre fondo gris. Epifluorescencia ultravioleta C. cayetanensis
  • 34. Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis C. cayetanensis
  • 35.
  • 36.
  • 38. Material preservado en formalina. Epifluorescencia I. belli
  • 39. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
  • 40. ACIDO-ALCOHOL MODIFICADA (Kinyoun) C. parvum C. cayetanensis I. belli SAFRANINA