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1. Dr. Juan Carlos Munévar N. Odontólogo, MSc, D.E.A. Biología ósea. Biólogo Oral
Especialista en Bioética, Postgrado en Docencia Universitaria
Dr. Diego Fernando Gualtero. Biólogo, MSc Bioquímica Universidad Nacional
Dr. Sebastián Bernau. Biólogo Universidad El Bosque.

2. Aspectos biológicos del Plasma Rico en Plaquetas
relevantes para la práctica quirúrgica en odontología

3. • Antecedentes históricos.
• Regeneración Tisular y Odontología Regenerativa
• Plasma Rico en Plaquetas
• Síntesis in vitro de Biogel.
• Instructivo de Activación de Biogel
• Protocolo de activación pre -quirúrgica de Biogel
• Recomendaciones.

4. REGENERACION TISULAR & ODONTOLOGIA
REGENERATIVA
INGENIERIA TISULAR
Las raíces de la Ingeniería
Tisular existen antes que la
ciencia comenzara como tal.
El versículo de la Biblia Génesis
II:21-22 reporta el primer
registro de Ingeniería Tisular:
“Entonces Jehovah Dios hizo
que sobre el hombre cayera un
sueño profundo; y mientras
Dormía, Tomó una de sus
costillas y Cerró la carne en su
lugar. Y de la costilla que
Jehovah Dios Tomó del hombre,
hizo una mujer y la trajo al
hombre.”

5. Hércules y la Hidra de múltiples cabezas
Durante siglos el hombre ha tratado de comprender la capacidad del cuerpo para
reparar o reemplazar las células y tejidos del organismo.
Historia Animalium, Aristóteles.

6. INGENIERIA TISULAR
Inicialmente el término hizo referencia al uso de aparatos protéticos y la
manipulación quirúrgica de los tejidos involucrados
Tissue engineering Meeting, National Science Foundation. Colorado. USA. 1980.
No se enfocaron en 1980 en la síntesis in vitro de tejidos nuevos
(BIOMIMETICOS), utilizando solamente células o combinándolas con materiales
que sirvan de soporte y transporte (MATRICES)
Vacanti Charles. History of Tissue engineering and a glimpse into its future. Tissue engineering. Vol 12. 5. 1137 – 1143. 2006.
El empleo del concepto actual de Ingeniería Tisular se produjo en un artículo
titulado “Functional Organ Replacement; The New Technology of Tissue
Engineering” Surgical Technology International. USA. 1991.
LA INGENIERIA TISULAR fue concebida, nació y se gesto como disciplina
científica en los laboratorios de investigación en Boston y Cambridge,
Massachusetts.

7. Area interdisciplinaria del conocimiento que aplica los principios de la ingeniería y
las ciencias de la vida hacia el desarrollo de sustitutos biológicos que restauren,
mantengan o mejoren el funcionamiento de los tejidos o de un órgano.
El empleo de la biología de los sistemas orgánicos que permitirá el éxito
en el desarrollo de estrategias terapéuticas diseñadas para reemplazar,
regenerar, mantener y/o mejorar la función de los tejidos.
REGENERACION
TISULAR
El conocimiento de los principios del crecimiento de los
tejidos y su aplicación para producir tejidos de reemplazo
funcionales para uso en la práctica clínica
Joseph Vacanti Robert Langer
Society for Tissue Engineering.
Journal “Tissue Engineering”

8. GENERALIDADES
El propósito de la Ingeniería Tisular es la regeneración de tejidos mediante el uso
combinado de biomateriales y mediadores biológicos como estrategias para la medicina
regenerativa. (Plasma Rico en Plaquetas, Células Troncales, Factores solubles
recombinantes humanos)
El uso de células Stem/progenitoras
puede ser amplio, pues se pueden
recuperar de distintos tejidos:
 Tejido adiposo humano
 Medula ósea humana
 Ligamento Periodontal humano
 Pulpa dental humana.
 Periostio.
 Sangre Periférica
 Sangre de Cordón Umbilical
 Gelatina de Wharton
 Placenta y líquido amniótico.
 Cerebro
 Hígado.
D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Papaccio G. Human mandible bone defect repair by the grafting of dental pulp stem/progenitor cells and collagen sponge
biocomplexes. European Cells and Materials. 18. 2009.

9. La Ingeniería Tisular ha evolucionado desde una ciencia de los biomateriales hacia un
área del conocimiento multidisciplinario a través de la integración de la biología, la
medicina, la odontología, la bioinformática y la ingeniería.
• Las próximas estrategias terapéuticas
emplearan la creciente utilización de
trasplantes autólogos.
Lo que evitara inmunoterapias.
Estos trasplantes poseerán patrones predecibles
de vascularización e inervación, fundamentales
para recuperar la función óptima.
Thirumala S, Goebel W. S, Woods E. Clinical grade adult stem cell banking. Organogenesis. 5: 3. 143 – 54. 2009
Los productos de Ingeniería Tisular se basan en biomateriales novedosos que integran
células Stem/ progenitoras capaces de auto-renovarse o bien de diferenciarse en tipos
celulares específicos. (neuronas, osteoblastos, condrocitos, queratinocitos)

10. Moléculas & células de interés en
Odontología Regenerativa

13. REGENERACION TISULAR
&
ODONTOLOGIA REGENERATIVA

14. Aproximadamente 1’500.000 sujetos se someten a reconstrucción cráneo facial por año:
* Malformaciones congénitas.
* Resección de tumores.
* Deformaciones post-traumáticas.
De los cuales el 20% presentan pérdida de función pese a la reconstrucción.
30.000 de esos pacientes sufren problemas de morbilidad del sitio relacionados con
reconstrucción de injertos.
Las estructuras pérdidas con el defecto tienen funciones especificas y el
reemplazo es complicado.
Ej: El cierre de un defecto óseo se asocia con la transferencia de
tejido (un colgajo) que no restaura totalmente la función de la
parte pérdida.
La transferencia de tejido se relaciona con morbilidad del sitio
donante , acompañada de infección y pérdida de función.
García- Godoy F. Tissue engineering. DENTAL CLINICS OF NORTH AMERICA. Vol 50. 2. 2006
Baum B, Mooney D. The impact of tissue engineering on dentistry. JADA. 131. 309 – 18. 2009.

15.  En CIRUGIA MAXILOFACIAL es particularmente importante desarrollar
reemplazos de tejidos (biomiméticos) y estrategias de implementación.
El reemplazo y la regeneración tisular en
CIRUGIA MAXILOFACIAL es complejo
porque:
Se deben tener en cuenta funciones
basadas en estructuras tridimensionales
constituidas por tejidos duros (esqueleto
craniofacial, dientes) y blandos (piel,
mucosa, músculos):
- la expresión facial,
- la fonación,
- la masticación.
Se deben diseñar enfoques biotecnológicos novedosos que estimulen la regeneración
tisular evitando efectos colaterales por materiales biocompatibles y/o relacionados
con la remoción ósea

16. ESTRATEGIAS DE INGENIERIA TISULAR EN
ODONTOLOGIA REGENERATIVA
ENFOQUES CONDUCTIVOS ENFOQUES INDUCTIVOS TERAPIA GENICA
Baum B, Mooney D. The impact of tissue engineering on dentistry. JADA. 131. 309 – 18. 2009.
IMPLANTES DENTALES
REGENERACION TISULAR GUIADA
FACTORES SOLUBLES
SCAFFOLDS
Transferencia de genes por
medio de vectores a
células diferenciadas
Fibrosis quística, distrofia
muscular, neoplasias, etc.
Próximos 10 – 20 años

17. CELULAS MATRICESFACTORES SOLUBLES
• Factores de crecimiento
(BMP’s; TGF B; PDGF; IGF)
• Citocinas (TNF; IL-6; IL-4)
• Neuropéptidos (Sustancia P,
CGRP, VIP)
• Células Stem Adultas
Epidérmicas; MSC; HSC.
• Células diferenciadas
Osteoblastos, condrocitos,
neuronas
• Biológicos: PRP, colágeno,
chitosan, de cadáver.
•Biopolímeros: Acido poli –L-
glicólico
• Biocerámicas: TCP, HA.
• Inertes: Titanio, Zirconio.
• Semiconductores: biosensores
(BMP’s; TGF B; PDGF; IGF)
(TNF; IL-6; IL-4)
(Sustancia P, CGRP, VIP)

21. INJERTOS DE HUESO HUMANO DISEÑADOS ANATOMICAMENTE POR INGENIERIA
Las reconstrucciones óseas frecuentemente involucran injertos autólogos :
* Dificultades de obtención.
* Morbilidad del sitio donante.
* Habilidad de los clínicos para contornear la forma 3D.
La capacidad para ingeniar correctamente estructuras y órganos
anatómicos de hueso humano funcional y viable tiene un enorme
potencial para las reconstrucciones óseas en casos como:
 Defectos congénitos
 Resecciones quirúrgicas por Cáncer.
 Trauma.

22. Reportan el diseño in vitro por ingeniería
tisular de un injerto viable, funcional con
forma anatómica y clínicamente disponible
del cóndilo humano de la ATM
empleando:
1. Células Stem Mesenquimales humanas (hMSC)
2. Un sistema Biomimético (Bioreactor-matriz)
1. Relevancia clínica
2. Desafíos asociados con su forma 3D compleja
Se selecciono el cóndilo de la ATM por:
Las matrices anatómicamente configuradas en 3D se generaron a partir de hueso
trabécular descelularizado mediante:
1. Imágenes clínicas digitalizadas
2. Cultivadas con hMSC.
3. Sometidas a un flujo intersticial (BIOREACTOR)

23. Ingeniería tisular de injertos de hueso anatómicamente diseñados .
Preparación de la matriz descelularizada
A y B; Tomografía computarizada
para obtener imágenes de alta
resolución que permiten reconstruir
la geometría exacta del cóndilo
C . Incorporación de las imágenes en
el software MasterCAM para
maquinar las matrices con forma de
cóndilo de ATM.
D. Geometría compleja de las matrices
terminadas con diferencias notorias en
cada proyección.
E. Cultivo estático in vitro con 3
millones de hMSC /matriz a 1 semana
y posterior perfusión por 4 semanas.

24. Osteogénesis estimulada por perfusión en una manera dependiente del patrón de
flujo de fluido in vitro.
RESULTADOS
Constructo in vitro bajo condiciones estáticas
Constructo in vitro por perfusión de medio
Reconstrucción 3D de imágenes de µTC
Arquitectura de la matriz ósea mineralizada
(CAMBIOS EN LA ESTRUCTURA) desarrollada
en una manera dependiente del tiempo y de
las condiciones de cultivo.

25. Evaluación de los parámetros morfológicos por µTomografía Computarizada
Modelos computacionales que revelan la
morfología de la matriz ósea correlacionada
con los patrones de perfusión del flujo de
medio de cultivo a través de los constructos
de ATM.

27. Nakao K, Morita R, Saji Y, Ishida K, Tomita Y, Ogawa M, Saitoh M, Tomoka Y. The development of a bioengineered organ germ method.
Nature Methods. 4: 3. 227 - 30. 2007
Las estrategias actuales para
desarrollar tratamientos de
regeneración tisular están
influenciados por el conocimiento
del desarrollo embrionario, la
biología de las células Stem y la
ingeniería tisular

28. Esquema de la tecnología de trasplante del biomimético
Erupción & oclusión del Biodiente
Día 5 – cultivo órganotipico:
Microfotografía del germen del biodiente.
Fotografías durante la erupción y oclusión del Biodiente.
Análisis histológico durante la
erupción y oclusión del
Biodiente.

29. Microfotografía del constructo
mediante la combinación de
células epiteliales de un ratón
normal y células Stem
mesenquimales de un ratón
transgénico GFP.
Fotografía clínica de un diente normal y
el biodiente en Oclusión
µTomografía computarizada
de la oclusión de un diente
normal y el Biodiente

30. Respuesta al dolor por stress mecánico mediante evaluación
Inmunohistoquímica de NF (verde) y NPY (rojo)
Evaluación de la dureza del esmalte y la dentina del Biodiente.
Movimiento Ortodóntico del Constructo
A. Cortes histológicos ; tinción hematoxilina eosina.
B. Inmunohistoquímica TRAP e Hibridación in situ OCn al
6 día de movimiento Ortodóntico

31. PLASMA RICO EN PLAQUETAS
El Plasma Rico en Plaquetas (PRP), Es un
concentrado autólogo, no tóxico, no
alergénico de plaquetas que contiene y
libera mediante degranulación factores de
crecimiento y citocinas que estimulan la
regeneración ósea y de tejidos blandos.

32. RECUENTO DE PLAQUETAS EN SANGRE PERIFERICA
Valores normales:
130.000 a 400.000 plaquetas/mm cúbico
Valores disminuidos:
Por debajo de 50.000 se pueden producir sangrado
espontáneo, si baja a 5.000 puede ser fatal
por hemorragia en el sistema nervioso central o
hemorragia masiva del tracto gastrointestinal
Valores aumentados:
En algunas enfermedades hemoproliferativas

33.  Indometacina.
 Heparina
 Antidepresivos Tricíclicos
 Carbamazepina.
 Metildopa.
 Penicilina.
 Oxifenbutazona.
 Cloramfenicol.
 Furosemida.
 Isoniacida.
 Fentoína.
 Sulfonamidas.
 Sulfato De Quinina.
 Pirimetamina.
 Salicilatos.
 Estreptomicina.
 Diuréticos Tiazídicos
Medicamentos que pueden alterar los resultados

34. RECUENTO DE PLAQUETAS EN PRP
Regiones de aplicación facial de PRP
Aplicación en cirugía plástica
Aplicación en cirugía oral
Estimula la oseointegración

35.  Inducir mitogénesis (aumentando el número de células involucradas en la
reparación tisular).
 Inducir angiogénesis (generando nuevos capilares y vascularizando
tempranamente la zona a regenerar)
 Regular la liberación de factores de crecimiento de otras células que
promueven la síntesis de fibroblastos y osteoblastos
 Acelerar los efectos de los factores de crecimiento de otras células, ya que las
plaquetas desencadenan este proceso de regeneración, pero su vida no supera
los diez días, por lo tanto, su acción es continuada por otras células como los
macrófagos que también tienen la propiedad de liberar factores de crecimiento.
PROPIEDADES DE LOS FACTORES DE CRECIMIENTO
PRESENTES EN PRP

36.  Acelerar la reparación ósea al fortalecer la calidad/cantidad del
hueso formado (osteogénesis)
 Inducir la prematura cicatrización de las heridas, ya que aumenta
la revascularización (angiogénesis) y estimula la síntesis y
diferenciación de las células precursoras
 Acelerar la reparacion y cicatrización de las heridas, liberando
factores que estimulan la reproducción de las células (células
troncales, fibroblastos y células endoteliales).
VENTAJAS DEL PRP

37. APLICACIONES CLINICAS
 Regeneración ósea
 Oseointegración
 Implantes dentales
 Tratamientos periodontales
 Bioestimulación
 Cirugía periodontal y oral.
 Cirugía Maxilofacial
 Cicatrización de ulceras crónicas de piel.
 Reparación de heridas complicadas
 Cirugía Plástica

38. Classification of platelet concentrates:
from pure platelet-rich plasma (P-PRP)
to leucocyte- and platelet-rich fibrin
(L-PRF)
Trends in Biotechnology Vol.27 No.3
Síntesis in vitro: PRP

39. Según las características farmacológicas y
del material:
1) P-PRP (plasma rico en pura plaquetas)
2) L-PRP (Plasma rico en plaquetas y Leucocitos)
3) P-PRF (fibrina rica en pura plaquetas)
4) -PRF (fibrina rica en plaquetas y Leucocitos) L
Dohan DM ., 2009
Clasificación de métodos para obtención de PRP

40. • 1999 Anitua desarrolló PRGF (plasma
rico en factores de crecimiento)
1) La sangre es centrifugada en pequeños
tubos y se obtienen 3 fases
I RBC
II capa leucocitaria (BF) Y PRGF
III plasma pobre en factores de crecimiento
(PPGF)
2) De la fase III el PPGF es descartado
3) El remanente es llamado PRGF y es
colectado con una pipeta
4) Se adiciona CaCl2 en solución
5) Luego de 15 min se obtiene un inestable
gel que debe usarcé inmediatamente.
Dohan DM ., 2009
Protocolo para la obtención de PRP

41. • Desarrollado por Curasan y Friadent-
Shûtze
• Utiliza dos pasos de centrifugación
1. En la primera centrifugación se
obtienen las tres fases
2. El PPP y BC son recolectados
cuidadosamente, evitando
contaminación con RBC
3. Se realiza una segunda
centrifugación del material
recolectado (a alta velocidad)
4. Se forman de nuevo 3 fases y se
descarta PPP
5. El PRP concentrado contiene
plaquetas, leucocitos y fibrina
6. El PRP es aplicado con trombina
(bovina) y CaCl2
Protocolo para la obtención de L-PRP

42. Protocolo PRF de Choukroun
• Se obtienen L-PRF (fibrina rica en plaquetas y leucocitos)
• Considerado un concentrado de plaquetas de segunda
generación, debido a que es obtenido sin anticuagulantes
y gelificantes.
1. La sangre es recolectada en tubos de vidrio secos y
centrifugado a baja velocidad
2. Después de la centrifugación se obtienen tres fases
- RBC (fase inferior)
- Plasma acelular en la fase superior
- Gel PRF en el medio

43. Protocolo PRF de Choukroun
Dohan DM ., 2009

44. • Se forma una matriz fuerte de fibrina con arquitectura
tridimensional. En esta se concentran plaquetas y leucocitos.
• Al presionar entre dos gasas se obtiene una membrana fuerte
autóloga.
• A diferencia del PRP el PRF no se disuelve después de la aplicación
• Los leucocitos y plaquetas son preservados a través del proceso
• Las plaquetas son activadas durante el proceso lo que lleva a que la
matrix sea embebida de factores de crecimiento plaquetarios y
leucocitarios
• No requiere equipos especializados
• Facilidad y rapidez del procedimiento
• Procedimiento natural
Ventajas y desventajas

45. Dohan DM ., 2009

46. • Se excluyen pacientes con:
1. Diabetes
2. Quimioterapias inmunodepresoras
3. Artritis reumatoide
Criterios de exclusión

47. BIOGE
L• Es un producto biológico
basado en la aplicación de
factores de crecimiento
obtenidos de un concentrado
plaquetario, preparado
mediante el fraccionamiento
por gradiente de densidad de
sangre autóloga; al combinarse
con un activador, se
constituye un "gel" que al ser
aplicado localmente, en forma
tópica sobre una herida,
potencializa los mecanismos de
regeneración de manera rápida
y eficaz.
Los Factores de crecimiento son la clave para
el pasaje de la fase hemostática a la
regenerativa. Esta última la disparan
mediadores mitóticos de las células
mesenquimales y promotores de la
angiogénesis.
®

48. FACTORES DE CRECIMIENTO
PRESENTES EN BIOGEL.
• Factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF).
• Factor de crecimiento de transformante-beta (TGFβ).
• Factor de crecimiento fibroblástico (FGF).
• Factor de crecimiento tipo insulina (IGF).
• Factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).
• Factor de crecimiento epidérmico (EGF).
®

49. APLICACIONES
• Los campos de aplicación de
BIOGEL® son muy amplios,
actualmente la odontología y
Cirugía estética son los más
habituales.
• Odontología.
 Alvéolo post-extracción
 Colocación de implantes.
 Levantamiento de piso de seno.
 Relleno de defectos óseos.
 Tratamiento periodontal.
 Comunicaciones bucosinusales.
 Fístula buconasal.

50. Otros usos:
Cirugía Maxilofacial, Oral e Implantología.
Reconstrucciones mandibulares, injertos óseos, reparación de senos, implantes
dentales, fisuras alveolares y sellado de membranas.
Traumatología.
Artroplastias, prótesis e implantes, fusión espinal, tratamiento de fracturas,
rellenos, defectos óseos, injertos óseos, tratamientos de regeneración condro
articular, infiltraciones intra articulares y regeneración ósea guiada.
Cirugía Plástica y Reconstructiva.
Lifting de cara y cuello, peelings faciales, rinoplastias, mamoplastias, heridas no
cicatrizantes, injertos de piel donante y receptor, reconstrucción de nervios y
lipoescultura / auto injerto de grasa.
Medicina Estética.
Bio estimulación cutánea, auto transferencia de grasa, tratamiento anti
envejecimiento, rellenos, post-peelings.

51. V
E
N
T
A
J
A
S
Seguridad: por tratarse de un producto totalmente autólogo,
elimina cualquier riesgo de transmisión de enfermedades.
Rapidez: Preparación de forma inmediata 15-20 minutos.
Facilidad de uso: es una técnica sencilla que sólo requiere la
activación del plasma.
Fácil manipulación: debido a su consistencia, permite un buen
manejo del producto.
Eficacia: Propicia una cicatrización y maduración ósea del
transplante mas rápida y de buena calidad.
Costo accesible: considerando la seguridad y efectividad que
brinda.

52. REGENTECH 2010
Biotecnología al alcance de sus manos
Obtención y activación de L-PRP Autólogo

53. Centrifuga refrigerada Cabina de seguridad tipo II
Equipos

54. • Todos los materiales
utilizados en la obtención
de PRP son estériles
Materiales & Equipos

55. Tubo con anticoagulante Sangre periférica
Toma de muestra

56. Muestra centrifugada Se descarta el PPP

57. Se captura la “Buffy Coat” Alicuotar L-PRP
Obtención de L-PRP

58. Recolectar L-PRP inactivo y catalizador Mezclar sobre el recipiente de gelificación
Activación de L-PRP

59. Activación de L-PRP
Adicionar catalizador Mezclar

60. 45-60 min a T° ambiente Biogel
Sintesís de BIOGEL

61. Biogel PPP

62. Plasma Pobre en plaquetas

64. INSTRUCTIVO DE ACTIVACIÓN DE BIOGEL -PLASMA RICO EN
PLAQUETAS y LEUCOCITOS (L-PRP)
Antes de iniciar el procedimiento lea el siguiente instructivo y verifique que el kit
contenga los materiales que se listan a continuación. La aplicación de este
producto es EXCLUSIVA para personal médico y/o Profesionales de la salud.
Materiales y Reactivos:
Tubos con L-PRP inactivo (1 ml por tubo)
 1 Tubo con solución catalizadora (C)
2 jeringas con capacidad de 1ml
 1 Recipiente de gelificación
Todo el material suministrado viene esterilizado. El L-PRP ha sido obtenido en
condiciones de esterilidad. Manipule el material biológico con precaución tomando
las medidas de bioseguridad necesarias para este tipo de muestras.

65. 1. Abrir el recipiente de gelificación.
2. Con la ayuda de la jeringa deposite el volumen de PRP inactivo que necesite
sobre el recipiente de gelificación.
3. Con la ayuda de la otra jeringa, mida un volumen aproximado de 0,15 ml de
solución catalizadora por cada 1 ml de L-PRP.
4. Mezcle la solución activadora con el L-PRP, de manera que se homogenice el
activador en el L-PRP.
5. Permita que el L-PRP se active a temperatura ambiente por un tiempo mínimo
entre 20-30 MINUTOS. Una señal positiva de activación se observa por la
formación de un clot o gel sobre la superficie del recipiente de gelificación.
6. Posteriormente recoja cuidadosamente el gel L-PRP activo con ayuda de unas
pinzas.
7. Aplique el producto.
8. El certificado de la concentración de plaquetas en la muestra le será enviado vía
e-mail en el transcurso del mismo día de la preparación del L-PRP.
Protocolo de activación de L-PRP

66. Este kit debe ser utilizado el mismo día de su
preparación.
El L-PRP es un producto biotecnológico AUTOLOGO
POR NINGUN MOTIVO APLIQUE L-PRP SOBRE otros
PACIENTES.
Elimine el material contaminado con material
biológico según normas de bioseguridad.
El L-PRP inactivo o activo y la solución catalizadora
no pueden ser almacenados y reutilizados
posteriormente.
RECOMENDACIONES

67. REGENTECH S.A.S.
Biotecnología al alcance de sus manos
Te interesan nuestros productos?
Comunícate ya con nuestro asesor al 316 834 2670; 3153902704
O escríbenos a regen.technologies@gmail.com