SlideShare une entreprise Scribd logo
VIRUS DE L’HEPATITE C
& Marqueurs
Stéphane Chevaliez
Centre National de Référence
Des Hépatites B, C et delta
Laboratoire de Virologie & INSERM U955
Hôpital Henri Mondor
Université Paris XII
Créteil
Virus de l’Hépatite C
I. Aspects Virologiques
Virus de l’Hépatite C
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
Phylogénie de la région codant la protéine NS5B
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
• Hôte naturel : Homme
Virus de l’Hépatite C
Bartenschalger et al., 2004.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Structurale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Génomique
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Régions 5’ et 3’NC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Site d’Entrée Interne du Ribosome
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA
Site d’Entrée Interne du Ribosome
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Organisation Génomique
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
STÉATOSE
ROS
FIBROSE
Activation des cellules étoilées
Insulino-
Résistance
Cytokines (TNF, TGF, IL-8, FasL)
Produits de la peroxydation lipidique
Cytokines
NF-kB
TNF
Nécro
Inflammation
Cytokines
TGF
Cytokines
Réponse
immunitaire
TGF
Capside
TNF
Génotype 3
Capside
NS5A
Adapted from Asselah et al., 2006
Protéine de Capside & Pathogenèse
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
VHC génotype 1b
xy
z
Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
Glycoprotéines E1-E2
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Glycoprotéines d’Enveloppe
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Heijne et al., Nature Reviews Molecular cell Biology, 2006; 7: 909-918
Région HVR1 (27 amino-acides)
 80% de divergence nucléotidique entre génotypes
 Epitope majeur de neutralisation
Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808-4817.
Région HVR1
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Protéine Non-structurale 3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
1 631189
Sérine protéase Hélicase/NTPase
Protéine NS3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Sérine protéase
• Modulateur de la réponse interféron type I via les
Toll-Like receptor (TLR3)
Hélicase/NTPase
Protéine NS3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
1 631189
Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265
Production d’IFN- en Réponse à
une Infection Virale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265
1. Clivage de TRIF 2. Clivage de CARDIF
Inhibition de la Phosphorylation
d’IRF3 par NS3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Sérine protéase
• Modulateur de la réponse interféron type I via les
Toll-Like receptor (TLR3)
• Cible de molécules antivirales
 VX-950 (Telaprevir®, Vertex)
 SCH503034 (Boceprevir®, Schering-Plough)
 ITMN 191 (Intermune)
Hélicase/NTPase
Protéine NS3
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
1 631189
OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy.
Site actif
(His57, Asp81, Ser139)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN 191
Protéine NS4B
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Complexe de Réplication
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
ARN Polymérase ARN-dépendante
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et al., Srructure Fold
Des 1999, 7: 1417-1426.
Polymérase Virale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Réplication
– Modèle du poliovirus
. Virus à ARN monocaténaire
de polarité positive
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18
Réplication Virale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
A
NNI site A (Thumb/fingertips)
Indoles
Benzimidazoles
NNI site B (Thumb)
Phe derivatives
Thiophene-COOH
Dihydroxypirones
Pyranoindoles
B
NNI site C (Palm)
Benzothiadiazine
Acyl-pyrrolidine
Proline sulfonamide
Acrylic acid derivatives
Active Site
Allosteric GTP
C
2’-methyl nucleosides
4’ azido-cytidine
NNI site D (R200 hinge)
Benzofurans
A
B
C
D
Cibles des Molécules Antivirales
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Modèle d’Entrée Virale
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Maturation de la Polyprotéine
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Structure des Protéines NS
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Complexes de Réplication
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Cycle Viral
Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Virus de l’Hépatite C
II. Modèles d’Etude
Souris transgéniques
Souris SCID/uPA
Modèles Animaux
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Visualisation des cellules
Huh7 infectées
3 - Vecteur de transfert de la GFP
2 - Expression des glycoprotéines E1E2 du VHC
1 - Expression de Gag-Pol de MLV
Co-transfection
des cellules 293 T
Production de
ppVHC infectieuses
Infection in vitro
des cellules Huh7
Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
A
B
Adapted from Nature Review Drug Discovery, 2002; 1:911-916
Réplicons Subgénomiques
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Adapted from www.molecular-virology.uni-hd.de
Système Productif (HCVcc)
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Virus de l’Hépatite C
III. Variabilité Génétique
Virus de l’hépatite C
Production virale (/24 heures) 1012
T1/2 virus libre (heures) 2 - 3
T1/2 brin ARN (heures) ~10
Taux de mutation Très élevé
Mutants d’échappement au SI Fréquent
Cellules cibles
Taille du compartiment Probablement grande
Soriano et al., J Antimicro Chemother 2008, 62: 1-4
Dynamique Virale
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Erreurs au cours de la réplication
– Fréquentes
. 10-4
-10-4
mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC
– Spontanées
– Au hasard
• Absence d’activité exonucléasique 3’5’
("proofreading")
– Accumulation de mutations
• A l’origine de :
– La diversification des types et des sous-types
– La distribution en quasi-espèces
ARN Polymérase ARN-dépendante
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Simmonds et al. Hepatology 2005.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Diversification des Génotypes
7
Central
Africa
Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
Diversification des Génotypes
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Facteur prédictif de la réponse au
traitement
• Conditionne
– La dose de ribavirine (800 - 1400 mg)
– La durée de traitement (16 - 72 semaines)
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Génotypes
Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Distribution en Quasi-espèce
• Dérive génétique
– Accumulation de mutations ponctuelles
• Glissement génétique
– Suite à la modification brutale de l’environnement
réplicatif
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Mécanismes d’Evolution de la
Quasi-espèce
• Joue un rôle dans le maintien de
l’infection chronique
• Joue un rôle dans l’échec des
traitements antiviraux
• Joue un rôle dans la sévérité de la
maladie
Farci P, 2000; Science, 288: 339-344; Lavillette D, 2005; Journal of Virology, 79(10): 6023-6034; Farci P, 2002; PNAS, 99: 3081-3086;
Chambers TJ et al., 2005; 79: 3071-3083; Sullivan et al., JID 2007, 196: 239-248.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Distribution en Quasi-espèce
Virus de l’Hépatite C
IV. Exemples d’Application
de la Variabilité Génétique
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
7
Central
Africa
Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
Diversification des Génotypes
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Génotype & Mode de Transmission
52% 54%
63%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
UDVI Transfusion Autres
3
1b
1a
Autres
Pawlotsky et al., J Infect Dis, 1995; 171(6): 1607-10.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
27%
39%
36%
0%
20%
40%
60%
80%
100%
UDVI Transfusion Autres
4
3
2
1b
1a
1nt
Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13.
Génotype & Mode de Transmission
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Génotype 3a
Chez les UDVI
0.1 substitution per site
JK049
TrKj
NE125
NE048
HCV-3a
HCV-3f
HCV-3c
HCV-3b
HCV-3k
Australie
USA, Côte Ouest
Argentine
Brézil
France
USA, Côte Est
75
72
83
79
100
92
60
62
81
63
98
98
99
62
52
71
95
56
Morice et al., J Med Virol 2006;78:1296-1303.
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du
dépistage et du suivi des patients hémodialysés en
juillet 2005, à l’hôpital Henri Mondor
• L’ensemble des patients hémodialysés ont été testés
(anticorps anti-VHC et ARN viral)
– Mise en évidence d’un 2nd cas au cours de la même période
• Analyses génétique et phylogénique
• Recherche du VHC dans l’environnement
– Supports et surfaces inertes
Transmission Nosocomiale
"Mondorienne"
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
 Identification de deux cas de
séroconversion en 2004 au sein de l’unité
d’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor :
– Patient "1" infecté par un génotype 3a
– Patient "2" infecté par un génotype 1
Transmission Nosocomiale
"Mondorienne"
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
1h_FrSSD98
1h_98CM1521
1h_98CM1357
1f_FR2
1i_FR16
1i_QC77
1iQC181
1m_GUI17
1m_GUI11
1m_GUI24
1d_HC1N16
1d_BA107
1d_FR17
Patient 8
1b_HCJ4
Patient 7
Patient 6
Patient 5
Patient 4
1b_HCP01
1b_HCVBK
1c_HCG9
1c_SR031
1c_Khaja1
1l_M5186N
1l_98CM1427
1l_98CM1457
1e_M4541N
1e_CAM1078
1e_QC172
1g_1382
1g_2152
1g_EG024
1a_HCV1
1a_HCVH
1a_HCJ1
1j_QC2
1j_QC89
1k_QC68
1k_QC82
Patient 3
Patient 2*
Patient 2**
2a_HCJ6
5a_SA13
6a_EUHK2
Patient 1
3a_NLZ1
4a_ED43
0.05
Genotype 4
Genotype 3
Genotype 6
Genotype 5
Genotype 2
Genotype 1
100
100
100
Patients VHC chronique
Séroconversion VHC
Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633.
G1
Analyse
Phylogénique
Région NS5B (329 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
Bootstraping : 1000 replicates
NJPlot
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
6a_33
2b_JFH1
Patient 1 (7/04)
5a_SA13
1b_HVR3812
S5 (7/05)
Patient 3 (7/05)
Patient 3 (9/05)
Patient 2 (7/04)
Patient 2 (9/04)
Patient 3 (7/04)
S4 (6/05)
S3 (6/05)
S2 (6/05)
Patient 3 (01/05)
S1 (6/05)
1a_HCT27X5
2a_Q2B
3a_CB
1a_HCT18X5
Patient 6
1b_AWV2C33
Patient 8
Patient 4
Patient 7
4a_ED43
0.2
100
Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633.
Patients VHC chronique
Séroconversion VHC
Analyse Phylogénique
Région HVR1 (81 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
Bootstraping : 1000 replicates
NJPlot
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
6a_33
2b_JFH1
Patient 1 (7/04)
5a_SA13
1b_HVR3812
S5 (7/05)
Patient 3 (7/05)
Patient 3 (9/05)
Patient 2 (7/04)
Patient 2 (9/04)
Patient 3 (7/04)
S4 (6/05)
S3 (6/05)
S2 (6/05)
Patient 3 (01/05)
S1 (6/05)
1a_HCT27X5
2a_Q2B
3a_CB
1a_HCT18X5
Patient 6
1b_AWV2C33
Patient 8
Patient 4
Patient 7
4a_ED43
0.2
100
Surfaces inertes
Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633.
Patients VHC chronique
Séroconversion VHC
Région HVR1 (81 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
Bootstraping : 1000 replicates
NJPlot
Analyse Phylogénique
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital
Hubert Kutuku Maga, Cotonou, Bénin (Afrique)
– Détection anticorps anti-VHC
– Détection ARN VHC (limite détection <50UI/mL)
• Etude génétique et phylogénique de deux régions
distinctes du génome viral
– NS5B
– Core-E1
Transmission Nosocomiale au
Bénin
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Analyse Phylogénique
5aSA13
2aHCJ6
Patient 49
6aEUHK2 3aNLZ1
Patient 62
4aED43
1hFrSSD98
1h98CM1357
1h98CM1521
1cHCG9
1cSR031
1cKhaja1
1aHCV1
1aHCVH
1aHCJ1
1jQC2
1jQC89
1kQC68
1kQC82
1eM4541N
1eCAM1078
1eQC172
1g1382
1g2152
1gEG024
1lM5186N
1l98CM1427
1l98CM1457
1fFR2
Patient 59
Patient 46
Patient 54
Patient 2
Patient 28
Patient 64
Patient 16
Patient 36
Patient 18
Patient 17
Patient 8
Patient 7
1bHCJ4
1bHCVBK
1bHCP01
Patient 40
1iFR16
1iQC77
1iQC181
Patient 48
Patient 60
Patient 52
Patient 26
1dFR17
1dHC1N16
1dBA107
1mGUI17
1mGUI11
1mGUI24
0.05
59
99
96
34
100
72
100
98
43
Région NS5B (286 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-
parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
Bootstraping : 1000 replicates
NJPlot
Génotype 2
Génotype 4
Génotype 3
Génotype 1
Génotype 6
Génotype 2
Génotype 5
Génotype 1, sous-type b
Génotype 3, sous-type a
Génotype 1, sous-type i
Génotype 1, sous-type ?
100
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Transmissions Nosocomiales
Région HVR1 (81 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-
parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
NJPlot
2aQ2B
3aCB
2bJFH1
1aHCT18X5
6a33
4aED43
1aHCT27X5
Patient 7
Patient 8
Patient 16
Patient 18
Patient 17
Patient 2
Patient 28
Patient 64
Patient 54
Patient 46
5aSA13
Patient 59
Patient 52
Patient 48
Patient 60
1bAWV2C33
1bHVR3812
0.2
Patient 26
Patient 40
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE
Assignation Provisoire d’un Nouveau
Sous-type : Etude de la région NS5B
Patient 16
Patient 18
Patient 17
Patient 8
Patient 7
Patient 64
Patient 46
1f_L38350
1e_AY894555
1g_AF271822
1g_AF271820
1d_L39302
1d_L39299
1b_M58335
1b_D90208
1i_AY434119
1h_AY434131
1j_AY434158
1j_AY434128
1k_AY434122
1k_AY434112
1a_M67463
1a_M62321
1c_D14853
1c_AY051292
0.05
PARCIMONIE
Patient 16
Patient 18
Patient 17
Patient 7
Patient 8
Patient 64
Patient 46
1f_L38350
1h_AY434131
1i_AY434119
1d_L39302
1d_L39299
1b_M58335
1b_D90208
1e_AY894555
1g_AF271822
1g_AF271820
1j_AY434158
1j_AY434128
1k_AY434122
1k_AY434112
1a_M67463
1a_M62321
1c_D14853
1c_AY051292
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE
Assignation Provisoire d’un Nouveau
Sous-type : Etude de la région Core-E1
PARCIMONIE
Patient 7
Patient 64
Patient 46
Patient 18
Patient 16
Patient 17
Patient 8
1h_AY434132
1h_AY257087
1d_L38377
1i_AY434120
1i_L48495
1b_M58335
1b_L38372
1b_D90208
1f_L38371
1l_AY257091
1l_AY257083
1c_AY051292
1c_D14853
1g_AF271797
1g_AF271798
1e_AY894553
1e_L38361
1k_AY434123
1k_AY434113
1j_AY434129
1j_AY434106
1a_M67463
1a_M62321
0.02 Patient 64
Patient 46
Patient 18
Patient 16
Patient 17
Patient 7
Patient 8
1d_L38377
1i_AY434120
1i_L48495
1b_D90208
1b_L38372
1b_M58335
1l_AY257091
1l_AY257083
1c_AY051292
1c_D14853
1g_AF271797
1g_AF271798
1e_AY894553
1e_L38361
1k_AY434123
1k_AY434113
1j_AY434129
1j_AY434106
1a_M67463
1a_M62321
1f_L38371
1h_AY434132
1h_AY257087
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en
Grèce ("Papageorgiou General Hospital", Thessaloniki)
• 17 patients hémodialysés contaminés en quelques
mois
• Analyses génétique et phylogénique
• Etude de la réponse neutralisante
– Système HCVpp
Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34
Transmission Nosocomiale en Grèce
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
0,1 substitution per site
HCV-1
HCV-H
SR052
HC-G9
SR037
HC-J4
HCV-BK
BE90
Pt-11
Pt-10
Pt-9
Pt-5
Pt-12
Pt-13
Pt-15
Pt-16
Pt-2
Pt-4
Pt-3
Pt-1
Pt-17
Pt-7
Pt-6
Pt-8
1b
HCV-1
1a
1c
Souche B
Souche A
Analyse Phylogénique
Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34
Région HVR1 (81 nt)
CLUSTALX
DNADist (PHYLIP 3.5)
Matrice de distance: Kimura 2-
parameter (Ts/Tv=2)
Neighbor-Joining
NJPlot
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Incubation HCVpp avec
des dilutions de sérum
Détermination de
l’infectivité (bruit de fond)
Détermination de l’activité
neutralisante du sérum
Infection de
cellules Huh7
Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp)
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Patient-10 (souche B)
ARN VHC
(UI/mL)
Semaines
% neutralisation
infection
Huh7
ARN VHC
Réponse Neutralisante
ALAT
Contrôle Neutralisation
• Absence de réponse neutralisante et absence de
contrôle de l’infection
Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34
Réponse Neutralisante - Groupe 1
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Réponse neutralisante forte et spécifique
• Réponse neutralisante inversement proportionnelle
à la cinétique de la charge virale
Patient-1 (souche A)
% neutralisation
infection
Huh7
Réponse Neutralisante - Groupe 2
ARN VHC
(UI/mL)
Semaines
ARN VHC
Réponse Neutralisante
ALAT
Contrôle Neutralisation
Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Histoire Naturelle
Hépatite Aiguë
Hépatite Chronique
50 - 85%
Cirrhose 20 - 30%
Décompensation
6 - 10%
HCC
4 - 5% par an
Mortalité
10-30ans
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Histoire Naturelle
Hépatite Aiguë
Hépatite Chronique
50 - 85%
Cirrhose 20 - 30%
Décompensation
6 - 10%
HCC
4 - 5% par an
Mortalité
10-30ans
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Persistance Virale
• Persistance virale
– Echec de la réponse immune, pourtant
présente et adaptée, à éliminer le virus ou les
cellules qui l’abritent
• Interface complexe
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Processus Multi-étape
Hépatite Aiguë
Infection Chronique
Hépatite Chronique
50 - 85%
1. Mise en place de l’infection aiguë
2. Etablissement de la persistance virale
3. Maintient de l’infection au cours du temps
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Hépatite Aiguë
Infection Chronique
Hépatite Chronique
50 - 85%
1. Mise en place de l’infection aiguë
2. Etablissement de la persistance virale ?
3. Maintient de l’infection au cours du temps
Processus Multi-étape
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805
Persistance du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57)
Région 5’NC Région E1-E2
Compartimentation Plasma-PBMC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
• Diversification et diffusion du VHC
• Transmission du VHC
• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC
• Compartimentation tissulaire du VHC
• Mécanisme d’échec thérapeutique et de
résistance
Impacts de la Variabilité Génétique
du VHC
Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
HEPATITE C : Stratégie
Diagnostique & Suivi
Virologique
Virus de l’Hépatite C
I. Cinétique des Marqueurs
Virologiques
Marqueurs Virologiques
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Marqueurs indirects
Anticorps anti-VHC totaux
Marqueurs directs
ARN VHC
Génotype VHC
Cinétique des Marqueurs
ARN VHC
Symptômes +/-
Temps après contage (mois)
Titre
Anti-VHC
ALAT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48
Infection Aiguë
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Cinétique des Marqueurs
ARN VHC
Symptômes +/-
Temps après contage (mois)
Titre
Anti-VHC
ALAT
0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48
Infection Chronique
Normal
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Virus de l’Hépatite C
II. Tests Virologiques
Tests Virologiques Moléculaires
Tests quantitatifs
Seuil de détection ≥ qualitatifs
Quelle quantité est présente ?
Tests qualitatifs
Très sensibles
( 50 IU/mL)
Est-ce que le VHC est présent ?
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination
du Génotype
Quel type de VHC est présent ?
Tests Virologiques Moléculaires
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?
Détermination
du Génotype
Quel type de VHC est présent ?
Tests Quanti-Qualitatifs
Détection-Quantification de
l’ARN VHC
Intérêts de la Détection -
Quantification de l’ARN VHC
• Evaluation de la réplication virale chez des
patients anticorps anti-VHC positifs
• Evaluation de la réponse virologique au
cours du traitement pegIFN - RBV
– Réponse virologique rapide (semaine 4)
– Réponse virologique précoce (semaine 12)
– Réponse fin de traitement (EOT)
– Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Techniques Disponibles
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible
Quantitative Quantitative
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Principe des Techniques
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible
Quantitative Quantitative
Stratégie diagnostique & suivi virologique
bDNA : Principe
ARN VHC
Capture Probe
Capture Extender
Label extender
Preamplifier
Amplifier with hybridized
label probe
Adapted from Siemens
Stratégie diagnostique & suivi virologique
bDNA : Forces & Faiblesses
• Forces
– Quantification indépendante du génotype
– Tolérance de polymorphismes nucléotidiques
– Faible volume de prise d’essai
– Large intervalle de quantification linéaire
. ≥ 6.90 Log10 UI/mL
• Faiblesses
– Faible sensibilité
. LLOD: 2.80 Log10 UI/mL
– Faux positifs dans les faibles valeurs
– Méthode semi-automatisée (Siemens system 340 analyzer)
– 12 contrôles par run
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Principe des Techniques
b-DNA PCR
Branched DNA Polymerase chain reaction
Amplification du signal Amplification de la cible
Quantitative Quantitative
Stratégie diagnostique & suivi virologique
PCR : Principe
VHC ARN ADNc Amplicons
(ADNdb)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Techniques de la PCR
en temps réel
• Diminution du risque de contamination
• Amélioration de la sensibilité
• Augmentation de l’intervalle de
quantification linéaire
• Amélioration précision et reproductibilité
• Augmentation de débit à travers
l’automatisation
• Diminution des coûts
Stratégie diagnostique & suivi virologique
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0
SuperQuant
LCx HCV RNA
Assay
Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)
Intervalle de Quantification
Stratégie diagnostique & suivi virologique
10 102 103 104 105 106 107 108
Cobas Amplicor
HCV Monitor v2.0
SuperQuant
LCx HCV RNA
Assay
Versant HCV RNA
3.0 (bDNA)
TaqMan 48 HCV
(Roche)
HCV Quant ASR
(Abbott)
Versant HCV RNA
1.0 (kPCR, Siemens)*
*en développement
Intervalle de Quantification
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Diminution du risque de contamination
• Amélioration de la sensibilité
• Augmentation de l’intervalle de
quantification linéaire
• Amélioration précision et reproductibilité
• Augmentation de débit à travers
l’automatisation
• Diminution des coûts
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Techniques de la PCR
en temps réel
Plates-formes
CAP-CTM96 (ROCHE)
kPCR (SIEMENS)
m2000SP-m2000RT (ABBOTT)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Remplace les techniques qualitatives de
détection de l’ARN VHC
• Quantifie l’ensemble des charges virales
observées en pratique clinique
– Faibles charges virales au cours du traitement
• Surveille efficacement les cinétiques
virales (évaluation précoce des réponses
virologiques au traitement)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Cliniques de la PCR
en temps réel
Quantification de l’ARN du VHC
CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)
DifferencebetweenHBVDNAlevelsmeasuredin
CAP/CTMandinbDNA(inLog10IU/mL)
3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0
-1.5
1.0
-1.0
1.5
0.0
0.5
-0.5
Mean of HCV RNA levels measured in CAP/CTM and bDNA
(in Log10 UI/mL)
Genotype 1 (n=29)
Genotype 2 (n=27)
Genotype 3 (n=29)
Genotype 4 (n=30)
Genotype 5 (n=9)
Genotype 6 (n=2)
Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.
Mean
difference
+ 1.96 mean
difference
- 1.96 mean
difference
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Différences de Quantification
Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.
Genotype 1 (n=29)
Genotype 2 (n=27)
Genotype 3 (n=29)
Genotype 4 (n=30)
Genotype 5 (n=9)
Genotype 6 (n=2)
-1.5
1.0
-1.0
1.5
0.0
0.5
-0.5
15%
30%
DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin
CAP/CTMandinbDNA(inLog10UI/mL)
CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Chevaliez et al., manuscript in preparation.
m2000SP-m2000RT (Abbott) versus bDNA 3.0 (Siemens)
Mean of HCV RNA levels measured in m2000SP/m2000RT and
bDNA (in Log10IU/mL)
3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0
-1.5
1.0
-1.0
1.5
0.0
0.5
-0.5
DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin
m2000SP/m2000RTandinbDNA(inLog10IUI/mL)
Mean
difference
+ 1.96 mean
difference
- 1.96 mean
difference
Genotype 1 (n=55)
Genotype 2 (n=21)
Genotype 3 (n=29)
Genotype 4 (n=24)
Genotype 5 (n=9)
Genotype 6 (n=3)
Quantification de l’ARN du VHC
Stratégie diagnostique & suivi virologique
David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).
kPCR HCV 1.0 (Siemens) versus bDNA 3.0 (Siemens)
132 clinical samples
Quantification de l’ARN du VHC
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Génotype
Génotypes du VHC
Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.
7
Central
Africa
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêts de la Détermination du
Génotype
• Détermination systématique du
génotype
– Facteur prédictif de la réponse au
traitement
– Conditionne
• La dose de ribavirine
• La durée du traitement (24 vs 48 semaines)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Génotype
• Détermination moléculaire du génotype
VHC (génotypage)
• Détermination sérologique du génotype
VHC (“sérotypage”)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Génotype
• Détermination moléculaire du génotype
VHC (génotypage)
• Détermination sérologique du génotype
VHC (“sérotypage”)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Cibles pour le Génotypage
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Cibles pour le Génotypage
NS4A
NS4B
p7
Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Méthodes de Génotypage
• Séquençage direct des produits d’amplification1
• Restriction fragment length polymorphism analysis
(RFLP)2
• Hybridation inverse des produits d’amplification sur
support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV,
Innogenetics)3
• Autres méthodes :
– Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4
– Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5
1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin
Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Méthodes de Génotypage
• Séquençage direct des produits d’amplification1
• Restriction fragment length polymorphism analysis
(RFLP)2
• Hybridation inverse des produits d’amplification sur
support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV,
Innogenetics)3
• Autres méthodes :
– Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4
– Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5
1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin
Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Versant® HCV Genotype 2.0 Assay
3
17
15
20
21
23. AC
Marker
CC
AC
4
5
10
12
24. 6 c-l
16
2b 3a 4b 6a1b 6c-l1a
6
7
8
9
11
13
14
18
19
25. 1a
25. 1b
5’UTR
Same bands
as the 1.0 version
Core region
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Importance de la Région Virale pour la
Détermination du Sous-type
Analyse
phylogénique
de la région
5’NC
1ère
génération
de Line
probe assay
(LiPA1.0)
2ème
génération
de Line
probe assay
(LiPA2.0)
PCR en
temps réel
1a (n=233) 80,3%
(n=187)
73,0%
(n=170)
98,3%
(n=229)
94,4%
(n=220)
1b (n=253) 94,1%
(n=238)
91,7%
(n=232)
98,0%
(n=248)
93,3%
(n=236)
Chevaliez et al., EASL 2009.
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Virus de l’Hépatite C
III. Diagnostic Virologique
Diagnostic de l’Infection Aiguë
Ac anti-HCV
-
-
+
+
ARN VHC*
-
+
-
+
* Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml
Diagnostic
Absence d’infection aiguë
Infection aiguë C
Probablement pas d’infection
aiguë
Difficile de conclure
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Diagnostic de l’Infection Chronique
• Détection des anticorps anti-VHC totaux
par ELISA
• Recherche d’ARN du VHC par un test
sensible*
• Détection d’ARN du VHC* si le test ELISA (-
) chez des patients hémodialysés ou
immunodéprimés
* Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Virus de l’Hépatite C
III. Prise en Charge
Thérapeutique
Intérêts des Tests Virologiques
en Thérapeutique
Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20
• Décision de traiter
• Optimisation du schéma
thérapeutique
• Etude de la réponse virologique au
traitement
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Classification des Patients
Type
1
Types
2, 3
Types
4, 5, 6
Génotypes VHC
Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Indications Actuelles du Traitement
• Patients infectés par un VHC de génotype 1
– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)
– Durée : 48 semaines
• Patients infectés par un VHC de génotype 2/3
– Interferon pégylé plus ribavirine (800 mg/j)
– Durée : 24 semaines
• Patients infectés par une VHC de génotype 4, 5 et 6
– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)
– Durée : 48 semaines
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Génotype VHC
VHC-1 (4,5,6)
Quantification ARN
VHC-2,3
Bithérapie
24 semaines
Ribavirine 800 mg
Bithérapie
48 semaines
Ribavirine 1000-1400 mg
Quantification ARN à S12
Diminution < 2 Log Diminution  2 Log
ARN VHC +
Arrêt traitement
poursuite avec
IFN pégylé pour
ralentir la
progression de la
maladie
hépatique
Poursuite jusqu’à
S24
Si ARN VHC -
Poursuite jusqu’à
S48
diminution  2 Log
ARN VHC -
Poursuite jusqu’à
S48
Optimisation du Traitement en
Fonction de la Réponse Virologique
• Outils virologiques sensibles
– Sensibilité : 10-15 UI/mL
– Evaluation de la réponse au traitement
• Répondeurs virologiques rapides
– Raccourcissement de la durée de traitement
• Répondeurs virologiques précoces partiels
– Allongement de la durée de traitement
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Raccourcissement de la
Durée de Traitement
RVR facteur prédictif de la RVS
Fried et al., EASL 2008, Journal of Hepatology, 48(Suppl.2): S5
N= 1383 (Analyse rétrospective)
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Importance de la RVR
• Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1
traités pendant 48 semaines par pegIFN alfa-2a + RBV (N = 453)
ARN VHC
Positif
À S24
4 12 24
Semaine ARN négatif
91
66
45
2
Ferenci P, et al. J Hepatol. 2005;43:425-433.
20
40
60
80
100
RVS(%)
0
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Traitement Court : Génotype 1
• Patients par un VHC de génotype 1
– ARN VHC < 600,000 IU/ml
– PegIFN-2b + ribavirine
– 24 semaines de traitement
– Comparaison des données obtenus avec les
résultats de l’étude pivot (Mann et al., Lancet
2001)
Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Traitement Court : Génotype 1
Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Week 4 Week 12 Week 24
24 weeks
48 weeks
(Mann et al.,
2001)
Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml)
%SVR
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960
Traitement court : Génotype 1
0
20
40
60
80
100
%deRVS
Peg-IFN alpha 2a 180 µg/semaine + RBV 800 ou 1000-1200 mg/j
ARN VHC > 50 UI/mL à S4
24-DF
24-DS
48-DF
48-DS
73%
89% 88% 91%
ARN VHC < 50 UI/mL à S4
44%
23%
35%
16%
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Shiffman et al., EASL 2006.
Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
%RVS
p=<0.0001 p=0.1565
65%
82%
65%
71%
Rapid virological response
HCV RNA < 50 IU/ml at week 4
No rapid virological response
HCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4
Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Shiffman et al., EASL 2006.
82%
90%
27%
49%
SVR rate SVR rate
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
14 weeks
24 weeks
%Sustainedvirologicalresponse
Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42
RVR (HCV RNA < 50 IU/ml at week 4)
93%
84%
Genotype 2 Genotype 3
92%
97%
Traitement court : Génotypes 2/3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
PegIFN-2b
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
12 weeks
24 weeks
%Sustainedvirologicalresponse
(Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-45)
71%
91%
RVR
62%
41%
n = 120n = 111 n = 68n = 71
No RVR
PegIFN-2a
Traitement court : Génotypes 2/3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Durée de traitement de 6 mois chez tous les
patients avec une RVR indépendamment du
génotype
• Raccourcissement de la durée de traitement
à 12 ou 16 semaines chez les patients
infectés par une génotype 2/3 avec un ARN
indétectable à S1 ou S2 (?)
Résumé
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Allongement de la Durée de
Traitement
Traitement Long : Génotypes 2/3
• Older age
• Male gender
• High BMI
• Fibrosis ≥ F3
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Génotype 1 : Traitement Long
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
48 weeks
(n=230)
72 weeks
(n=225)
53% 54%
%SVR
Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97
Stratégie diagnostique & suivi virologique
0
20
40
60
80
100
%deRVP
NS NS
NS
p=0.04
S 4 S 12 S 4 S 12
ARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ≥ 50 UI/ml
Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97
48 semaines
72 semaines
Génotype 1 : Traitement Long
Stratégie diagnostique & suivi virologique
Résumé
Stratégie diagnostique & suivi virologique
• Allongement de la durée de traitement à
72 semaines améliore la RVS :
– Chez les patients avec une RVP partielle
– Chez les non-répondeurs à un premier
traitement par une bi-thétrapie standard qui
sont retraités
HEPATITE C : Résistance
aux Traitements
• Définition
– Propriétés intrinsèques des souches
virales qui s’opposent à l’action antivirale
des effecteurs ou à des médicaments
antiviraux
Résistance aux traitements
Résistance Virale
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs
spécifiques
Résistance aux traitements
Résistance du VHC
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs
spécifiques
Résistance aux traitements
Résistance du VHC
PEG-IFN- 2a + ribavirine
(Fried et al., 2002)
PEG-IFN- 2b + ribavirine
(Manns et al., 2001)
Manns et al., Lancet 2001;358:958-65 ; Fried et al., N Engl J Med 2002;347:975-82; Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140:346-55.
PEG-IFN- 2a + ribavirine
(Hadziyannis et al., 2004)
54%
24%
58%
48%
18%16%
Résistance aux traitements
Taux d’Echecs
Facteurs
Viraux
Caractéristiques
de la maladie
Facteurs
d’Hôte
Traitement
ECHECS DU TRAITEMENT
Cinétique Virale sous Traitement
2nde phase
7 14 T(n)
Cutoff
1ère phase
1
0 1 2 3
2
3
4
5
6
7
Jours
Neumann et al., Science 1998;282:103-7.
Résistance aux traitements
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype 3
ARNduVHC(Log10UI/mL)
Jours
7
Résistance Intrinsèque
Résistance aux traitements
Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype 3
ARNduVHC(Log10UI/mL)
Jours
7
Résistance Intrinsèque
Résistance aux traitements
Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
0
1
2
3
4
5
6
7
0 4 7 8 15 22 291-7-28
Cut-off tests qualitatifs
Cut-off tests quantitatifs
Génotype 4
Génotype 1
Génotype 3
ARNduVHC(Log10UI/mL)
Jours
7
Résistance Intrinsèque
Résistance aux traitements
Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
Viral Factors
Antiviral
resistance
Delayed
clearance
Longer
half-life of
infected cells
– Motif nucléotidique responsable de
cette différence de sensibilité ?
– Pas de sélection de mutations de
résistance, même si modification de
la composition de la quasi-espèce
virale
Résumé
Résistance aux traitements
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs
spécifiques
Résistance aux traitements
Résistance du VHC
Mécanismes d’Action
Hypothétiques de la RBV
Adapted from Lau et al., Hepatology 2002; 35: 1002-9.
Ribavirine
Ribavirine
Transporteur
RMP RDP RTP
GMP
GTP
IMPDH
IMP
RdRp
Réplication
HCV RNA
Hépatocyte
(2) Inhibition de la RdRp VHC(1) Inhibition de l’IMPDH
HCV RNA "Catastrophe
(3) Effet mutagène
erreur”
CTL
Th1 IFN-, TNF-
(4) Effets immunomodulateurs
Résistance aux traitements
Pawlotsky et al., Gastroenterology 2004;126:703-14
-1.0
-0.5
0.0
0.5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28
Mean HCV RNA decrease (log IU/ml)
Time (days)
Controls
Ribavirin
monotherapy
Résistance aux traitements
Effet Antiviral de la RBV
Semaines
*
*
*
*
*
* p<0.05
24 7260524830 36
RBV jusqu’à S52
Arrêt RBV à S24
Bronowicki et al., Gastroenterology 2006
PourcentagedeRechutes(HCVRNA+)
Suivi post-thérapeutique
Prévention de la Rechute
Résistance aux traitements
Prévention de la Rechute
(PROVE-2)
Résistance aux traitements
Hézode et al., en révision favorable.
T12/PR12
n/N=
T12/P12
(Sans RBV)
48
22/46
0
10
20
40
50
Tauxderechutes(%)
30
T12/PR24
14
8/5719/63
30
PR48
(Contrôle)
22
10/45
• Ribavirin mechanisms of action in chronic
hepatitis C remain unknown
• Ribavirin direct antiviral effect is modest
and transient
• Long-term ribavirin administration does
not select for specific resistance
substitutions
Résumé
Résistance aux traitements
• Résistance du VHC à la thérapie par
l’interféron
• Résistance du VHC à la ribavirine
• Résistance du VHC aux inhibiteurs
spécifiques
Résistance aux traitements
Résistance du VHC
Cibles Potentielles
des Inhibiteurs
Spécifiques
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18
1. Attachement viral, fusion, décapsidation
2. Traduction de l’ARN viral
3. Maturation de la polyprotéine
4. Réplication du génome viral
5. Maturation de la particule virale
Résistance aux traitements
Viral entry inhibitors
Hepatitis C immunoglobulin HCIg)
HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab)
HCV RNA translation inhibitors
ISIS 14803 (antisense)
AVI – 4065 (antisense)
Heptazyme (ribozyme)
VGX-410C (small molecule IRES inhibitor)
TT 033 (siRNA)
Posttranslational processing inhibitors
NS3-4A serine proteinase inhibitors
BILN 2061
ITMN 191
VX-950
SCH 503034
ACH-806/GS-9132
HCV replication inhibitors
NS5B polymerase inhibitors
MK-0608
HCV-796
R1626
JTK-003
NM-283
XTL 2125
Cyclophilin B inhibitors
DEBIO-025
NIM 811
NS5A inhibitors
A-831, A-689
Helicase inhibitors
QU663
Recombinant Ab fragments
Virus assembly and release inhibitors
UT-231B (iminosugar-glucosidase inhibitor)
Celgosivir (glucosidase inhibitor)
Phase of Development
*
*
*
*
Preclinical I II III IV
*
*
*
Pawlotsky JM, Chevaliez S, McHutchison JG, Gastroenterology 2007;132:1979-98.
Résistance aux traitements
Molécules en Développement
sensible
résistant
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance
Arrêt
inhibiteur
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance
sensible
résistant + fit
Arrêt
inhibiteur
sensible
résistant
Inhibiteur
résistant
sensible
Résistance aux traitements
Mécanismes de la Résistance
résistant trés fit
sensible
Arrêt
inhibiteur
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18
Inhibiteurs en
Développement
Résistance aux traitements
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITMN-191
• Inhibiteurs de la réplication Virale
– Analogues nucléosidiques : R1626, R7128
– Analogues non nucléosidiques : GS9190
Résistance aux traitements
Inhibiteurs en Développement
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITMN-191
• Inhibiteurs de la réplication Virale
– Analogues nucléosidiques : R1626, R7128
– Analogues non nucléosidiques : GS9190
Résistance aux traitements
Inhibiteurs en Développement
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN 191
NS4B
p7
NS4A
Résistance aux traitements
Inhibiteurs de la Maturation
de la Polyprotéine
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN-191
TMC435350
In vitro
A156V/T, D168V/A/Y, R155Q
A156V/T
A156S/T, V170A, T54A
A156V/T, D168V/A, R155K/Q
?
In vivo
No data
A156S/V/T, R155K/T,
T54A, V36A/M
T54A
No data
No data
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN-191
TMC435350
In vitro
A156V/T, D168V/A/Y, R155Q
A156V/T
A156S/T, V170A, T54A
A156V/T, D168V/A, R155K/Q
?
In vivo
No data
A156S/V/T, R155K/T,
T54A, V36A/M
T54A
No data
No data
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN-191
TMC435350
In vitro
A156V/T, D168V/A/Y, R155Q
A156V/T
A156S/T, V170A, T54A
A156V/T, D168V/A, R155K/Q
?
In vivo
No data
A156S/V/T, R155K/T,
T54A, V36A/M
T54A
No data
No data
Résistance aux traitements
Mutations de Résistance aux
Inhibiteurs de NS3/4A
Compounds
Ciluprevir (BILN 2061)
Telaprevir (VX-950)
Boceprevir (SCH 503034)
ITMN-191
TMC435350
In vitro
A156V/T, D168V/A/Y, R155Q
A156V/T
A156S/T, V170A, T54A
A156V/T, D168V/A, R155K/Q
?
In vivo
No data
A156S/V/T, R155K/T,
T54A, V36A/M
T54A
No data
No data
• A highly selective, reversible
peptidomimetic inhibitor of the HCV NS3-
4A serine protease
• IC50 of the order of 0.5 µM in vitro
• HCV RNA level reduction of 3-4 Log10 in
vivo
Lin et al., AAC 2006, 50(5): 1813-1822; Zhou et al., Antimicrob Agents and Chemother 2008, 52(1): 110-120.
Résistance aux traitements
Telaprevir (VX-950)
Welsch et al., Genome Biology 2008, 9(1): R16.1-R16.18.
Telaprevir
Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.
HCVRNAchangefrom
baseline(Log10IU/mL)
Days
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Baseline
Placebo (n=6)
VX-950 750mg q8h
(n=8)
-4.41
-0.21
Résistance aux traitements
Antiviral Effect of TVR Monotherapy
(Phase Ib)
Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Baseline
Placebo (n=6)
VX-950 450mg q8h
(n=10)
VX-950 1250mg q12h
(n=10)
VX-950 750mg q8h
(n=8)
-4.41
-0.21
-2.21
-2.37
HCVRNAchangefrom
baseline(Log10IU/mL)
Days
Résistance aux traitements
Antiviral Effect of TVR Monotherapy
(Phase Ib)
T54
R155
A156
V36
Amino Acid Substitutions Associated
with Telaprevir Resistance
Sarrazin et al., Gastroenterlogy 2007, 132: 1767-1777.
466 7811 3.5 9 12 71
36/156A156V/T36/155T54AR155K/TV36M/AWT
Résistance aux traitements
PROVE-2 Trial
Weeks
480 2412
Placebo + Peg-IFN2a + Ribavirin (RBV)
VX-950 750 mg q8h
+ Peg-IFN2a
+ RBV
VX-950 750 mg q8h
+ Peg-IFN2a
VX-950 750 mg q8h
+ Peg-IFN2a
+ RBV
Peg-IFN2a + RBV Follow-up
Follow-up
Follow-up
PR48
T12/PR24
T12/PR12
T12/P12
Follow-up
72
Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.
Résistance aux traitements
Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.
80
T12/PR12
69
T12/PR24
Wk4
T12/P12
(No RBV)
13
PR48
(Control)
50
0
20
40
60
80
100
PatientsWithUndetectable
HCVRNA(%)
Wk4 Wk4 Wk4Wk12
43
62
Wk12
80
Wk12
73
Wk12
46
SVR
36
SVR
60
SVR
69
SVR
11/82 39/7835/82 38/82 66/8248/78 28/78 66/82 49/82 56/81 59/81 56/81
PROVE-2: RVR, EVR, SVR
Résistance aux traitements
Relapse Rate
Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243.
T12/PR12 and
T12/PR24 Combined
3
0
10
20
30
5/163
PatientsWithVirologic
BreakthroughbyWeek12(%)
0
10
20
30
19/78
T12/P12
(No RBV)
24
19/78PatientsWithVirologic
BreakthroughbyWeek12(%)
Résistance aux traitements
Patients Receiving Telaprevir
and Peg-IFN 2a without RBV
• Among the 6 patients who received the
combination of telaprevir and Peg-IFN2a
without RBV
– 3 subtype 1a patients remained HCV RNA positive on
treatment
– 3 patients became HCV RNA undetectable upon
therapy and relapsed after treatment
• 2 infected with subtype 1b
• 1 infected with subtype 1a
Résistance aux traitements
Chevaliez et al., IASL 2008.
Patient 1: subtype 1a Patient 2: subtype 1a Patient 3: subtype 1a
Patient 4: subtype 1b Patient 5: subtype 1a Patient 6: subtype 1b
NON-RESPONDERS
RELAPSERS
Weeks
WeeksTVR + Peg-IFN2a for 12 weeks
SOC
SOC
Viral Kinetics
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B C D
E F
R155K/N
V36L/M
WT
A40T
V36L/M + A40T
R155K/N + A40T
V36L/M + R155K/N
V36L/M + R155K/N + A40T
Patient 2
TVR-Peg-IFN
Quasispecies Analysis
Chevaliez et al., IASL 2008.
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B C D
E F
A
R155K/N
V36L/M
WT
A40T
V36L/M + A40T
R155K/N + A40T
V36L/M + R155K/N
V36L/M + R155K/N + A40T
Patient 2
TVR-Peg-IFN
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B C D
E F
A B
R155K/N
V36L/M
WT
A40T
V36L/M + A40T
R155K/N + A40T
V36L/M + R155K/N
V36L/M + R155K/N + A40T
Patient 2
TVR-Peg-IFN
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B C D
E F
A B C
D E
R155K/N
V36L/M
WT
A40T
V36L/M + A40T
R155K/N + A40T
V36L/M + R155K/N
V36L/M + R155K/N + A40T
Patient 2
TVR-Peg-IFN
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B
C
D
E
R155K/E + T42S
WT
A BWT
C E
Patient 3
TVR-Peg-IFN
SOC
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B
C
D
E
R155K/E + T42S
WT
A BWT
C E
Patient 3
TVR-Peg-IFN
SOC
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Weeks
WT
A
B
C
D
E
R155K/E + T42S
WT
A BWT
C D E
Patient 3
TVR-Peg-IFN
SOC
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Pt 1 Pt 2 Pt 3 Pt 4 Pt 5 Pt 6
R26K
V36L/M V36A
T42S
A40T A40T
T54S T54S T54A
Y56F
T91A
R155K R155K R155K/E R155T/A
G174S
Observed Amino Acid Changes
Résistance aux traitements
Location of the Amino Acid Changes
Résistance aux traitements
Location of the Amino Acid Changes
Résistance aux traitements
• Among the 9 patients who received the
triple combination of telaprevir, Peg-IFN2a
and RBV
– 7 patients achieved an SVR
– 1 patient relapsed
– 1 subtype 1b patient stopped antiviral treatment at 6
weeks when HCV RNA was undetectable and
relapsed thereafter
Patients Receiving the Triple
Combination
Résistance aux traitements
Weeks
Patient 8
WT
L14F
WT
L14F + V36C
A
B C
A B
CV36C
*
*TVR + Peg-IFN + RBV for 6 weeks
Quasispecies Analysis
Résistance aux traitements
Cys36
D81
S139
H57
F43 C36
Val36
D81
S139
H57
F43 V36
3D Structure of the V36 Mutations
Résistance aux traitements
V36
Variants
N (%)
Fold-
change in
IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12
V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26
V36L 3 (1.2%) 2.5 ND
V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8
V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9
V36 Variant Resistance
Résistance aux traitements
V36
Variants
N (%)
Fold-
change in
IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12
V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26
V36L 3 (1.2%) 2.5 ND
V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8
V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9
V36 Variant Resistance
Résistance aux traitements
V36
Variants
N (%)
Fold-
change in
IC50
Relative replication capacity in
Huh7.5 cells (%)
WT 1.0 100
V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12
V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26
V36L 3 (1.2%) 2.5 ND
V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8
V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9
V36 Variant Resistance
Résistance aux traitements
100
5 10
50
100
FRET Technology
Telaprevir (µM)
WT
V36C
V36M
V36L V36
Variants
IC50 VX-950
(S.E.)
(µM) Fold-change
WT 0.6 (0,2) 1
V36L 1.3 (0.1) 2
V36C 2.4 (1.3) 4
V36M 3.05 (3.85) 5
V36 Variant Resistance
Résistance aux traitements
• Inhibiteurs de la maturation de la
polyprotéine
– Anti-protéase NS3
• Telaprevir (VX-950)
• Boceprevir (SCH503039)
• ITMN-191
• Inhibiteurs de la réplication Virale
– Analogues nucléosidiques : R1626, R7128
– Analogues non nucléosidiques : GS9190
Résistance aux traitements
Inhibiteurs en Développement
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
A
NNI site A (Thumb/fingertips)
Indoles
Benzimidazoles
NNI site B (Thumb)
Phe derivatives
Thiophene-COOH
Dihydroxypirones
Pyranoindoles (HCV371)
B
NNI site C (Palm)
Benzothiadiazine (A-848837)
Acyl-pyrrolidine
Proline sulfonamide
Acrylic acid derivatives
Active Site
Allosteric GTP
C
2’-methyl nucleosides (NM283, MK608)
4’ azido-cytidine (R1626)
NNI site D (R200 hinge)
Benzofurans (HCV086, HCV796)
A
B
C
D
Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA
A
NNI site A (Thumb/fingertips)
Indoles
Benzimidazoles
Pro 495, Pro 496, Val 499
NNI site B (Thumb)
Phe derivatives
Thiophene-COOH
Dihydroxypirones
Pyranoindoles (HCV371)
Met 423
B
NNI site C (Palm)
Benzothiadiazine (A-848837)
Acyl-pyrrolidine
Proline sulfonamide
Acrylic acid derivatives
Asn 411, Met 414, Tyr 448
Active Site
Allosteric GTP
C
2’-methyl nucleosides (NM283, MK608)
4’ azido-cytidine (R1626)
NNI site D (R200 hinge)
Benzofurans (HCV086, HCV796)
Cys 316, Val 201
A
B
C
D
Placebo
500 mg bid
1500 mg bid
3000 mg bid
4500 mg bid
Traitement Suivi
Jours
0 5 10 15 20 25 30
-5
-4
-3
-2
-1
0
1
-2.6 log10
-3.7 log10
-1.2 log10
Réductiondel’ARNduVHC
(LogUI/mL)
R1626 : Phase Ib
Résistance aux traitements
R7128 : Phase II
Jours
0 5 10 15 20 25 30
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0 PegIFN + RBV + placebo
PegIFN + RBV + R7128 500 mg bid
PegIFN + RBV + R7128 1500 mg bid
RéductionARNVHC(Log10)
Lalezari et al., EASL 2008.
Résistance aux traitements
MK 7009
monotherapy
0
1
2
3
4
5
6
0 50 90 130 170 210 250
Day
logIU/mL
LOQ
MK 7009
+ MK-608 Chimp A
Chimp B
Chimp C
SVR
Olsen et al., APASL 2008
Combinaison de MK-7009 et
MK-608
Résistance aux traitements
Prévention de la Résistance
• Réduire au maximum la réplication virale
• Augmenter la barrière pharmacologique
• Utiliser des molécules avec une barrière
génétique élevée
• Compliance
Résistance aux traitements

Contenu connexe

Tendances

Mathurin ph coinfection du 2015
Mathurin ph  coinfection du 2015Mathurin ph  coinfection du 2015
Mathurin ph coinfection du 2015
odeckmyn
 
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)odeckmyn
 
Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16
odeckmyn
 
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 courtRosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 courtodeckmyn
 
Mathurin Coinfection2009
Mathurin Coinfection2009Mathurin Coinfection2009
Mathurin Coinfection2009odeckmyn
 
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendusProjet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
Institut Pasteur de Madagascar
 
Mathurin coinfection du2012
Mathurin coinfection du2012Mathurin coinfection du2012
Mathurin coinfection du2012odeckmyn
 
Co-Infection virale.ppt
Co-Infection virale.pptCo-Infection virale.ppt
Co-Infection virale.ppt
odeckmyn
 
L’hépatite virale c chronique 2012
L’hépatite virale c chronique 2012L’hépatite virale c chronique 2012
L’hépatite virale c chronique 2012Fatimazohra Elamrani
 
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Vih.org
 
Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16  Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16
odeckmyn
 
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...pmasson02
 
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.pptHépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
odeckmyn
 
Chevalier du 2012.ppt
Chevalier  du 2012.pptChevalier  du 2012.ppt
Chevalier du 2012.pptodeckmyn
 
Lerat hép virologie du16
Lerat  hép virologie du16Lerat  hép virologie du16
Lerat hép virologie du16
odeckmyn
 
Parasitémie et charge parasitaire totale
Parasitémie et charge parasitaire totaleParasitémie et charge parasitaire totale
Parasitémie et charge parasitaire totale
Institut Pasteur de Madagascar
 
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludismeGénétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Institut Pasteur de Madagascar
 
Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16
odeckmyn
 
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med Tlemcen
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med TlemcenHépatite virale delta Pr arbaoui fac med Tlemcen
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med TlemcenArbaoui Bouzid
 

Tendances (20)

Mathurin ph coinfection du 2015
Mathurin ph  coinfection du 2015Mathurin ph  coinfection du 2015
Mathurin ph coinfection du 2015
 
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)Thibault Vha Vhe  Virus Et Marqueurs (1)
Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)
 
Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16Roulo tbis vhd-du16
Roulo tbis vhd-du16
 
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 courtRosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
Rosmorduc cours diu pitie chc 2012 court
 
Mathurin Coinfection2009
Mathurin Coinfection2009Mathurin Coinfection2009
Mathurin Coinfection2009
 
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendusProjet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
Projet génome de Plasmodium: Approches utilisées et résultats attendus
 
Mathurin coinfection du2012
Mathurin coinfection du2012Mathurin coinfection du2012
Mathurin coinfection du2012
 
Co-Infection virale.ppt
Co-Infection virale.pptCo-Infection virale.ppt
Co-Infection virale.ppt
 
L’hépatite virale c chronique 2012
L’hépatite virale c chronique 2012L’hépatite virale c chronique 2012
L’hépatite virale c chronique 2012
 
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
Le traitement en primo-infection à VIH - Christine Rouzioux - Rencontre du Cr...
 
Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16  Lerat bis hép virologie du16
Lerat bis hép virologie du16
 
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...
Appréciation moléculaire du risque lié à la présence d’E. coli O26:H11 dans l...
 
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.pptHépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
Hépatite Delta_Virus et Marqueurs.ppt
 
Ph D Public Lesson
Ph D Public LessonPh D Public Lesson
Ph D Public Lesson
 
Chevalier du 2012.ppt
Chevalier  du 2012.pptChevalier  du 2012.ppt
Chevalier du 2012.ppt
 
Lerat hép virologie du16
Lerat  hép virologie du16Lerat  hép virologie du16
Lerat hép virologie du16
 
Parasitémie et charge parasitaire totale
Parasitémie et charge parasitaire totaleParasitémie et charge parasitaire totale
Parasitémie et charge parasitaire totale
 
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludismeGénétique humaine et susceptibilité au paludisme
Génétique humaine et susceptibilité au paludisme
 
Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16Thibault vha vhe- du16
Thibault vha vhe- du16
 
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med Tlemcen
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med TlemcenHépatite virale delta Pr arbaoui fac med Tlemcen
Hépatite virale delta Pr arbaoui fac med Tlemcen
 

Similaire à Chevaliez Du 2009

Prévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérusPrévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérusharlicot
 
Chevaliez s hcv strat diag+suiv virol2014
Chevaliez s  hcv strat diag+suiv virol2014Chevaliez s  hcv strat diag+suiv virol2014
Chevaliez s hcv strat diag+suiv virol2014odeckmyn
 
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.pptCarcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
odeckmyn
 
Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16
odeckmyn
 
Mathurin p coinfection 2014
Mathurin p  coinfection 2014Mathurin p  coinfection 2014
Mathurin p coinfection 2014odeckmyn
 
1591354193.pdf
1591354193.pdf1591354193.pdf
1591354193.pdf
MaNoLo440315
 
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
Abdelatif KAHLOULA
 
Co-infection VIH-VHC
Co-infection VIH-VHCCo-infection VIH-VHC
Co-infection VIH-VHC
Vih.org
 
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtesCycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
Institut Pasteur de Madagascar
 
human immunodeficiency virus
human immunodeficiency virushuman immunodeficiency virus
human immunodeficiency virus
Dr Taoufik Djerboua
 
Rendement parasitaire chez l'anophèle
Rendement parasitaire chez l'anophèleRendement parasitaire chez l'anophèle
Rendement parasitaire chez l'anophèle
Institut Pasteur de Madagascar
 
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez PlasmodiumPolymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
Institut Pasteur de Madagascar
 
Poster 65 microbiologie
Poster 65 microbiologiePoster 65 microbiologie
Poster 65 microbiologie
JIB Congress
 
Lerat du2012
Lerat du2012Lerat du2012
Lerat du2012odeckmyn
 
Poster 64 microbiologie
Poster 64 microbiologiePoster 64 microbiologie
Poster 64 microbiologieJIB Congress
 
Moussalli du-2012-vhcud
Moussalli du-2012-vhcudMoussalli du-2012-vhcud
Moussalli du-2012-vhcudodeckmyn
 
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS : une nouvelle PCR digitale multiplex pour...
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS :  une nouvelle PCR digitale multiplex  pour...AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS :  une nouvelle PCR digitale multiplex  pour...
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS : une nouvelle PCR digitale multiplex pour...
Institut de l'Elevage - Idele
 
cours-biologie-moleculaire-neh.pdf
cours-biologie-moleculaire-neh.pdfcours-biologie-moleculaire-neh.pdf
cours-biologie-moleculaire-neh.pdf
FatimaZohra85
 
Investigation d'un épisode épidémique
Investigation d'un épisode épidémiqueInvestigation d'un épisode épidémique
Investigation d'un épisode épidémique
Institut Pasteur de Madagascar
 
Thibault vha vhe- 2015
Thibault vha vhe- 2015Thibault vha vhe- 2015
Thibault vha vhe- 2015
odeckmyn
 

Similaire à Chevaliez Du 2009 (20)

Prévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérusPrévention du cancer du col de l’utérus
Prévention du cancer du col de l’utérus
 
Chevaliez s hcv strat diag+suiv virol2014
Chevaliez s  hcv strat diag+suiv virol2014Chevaliez s  hcv strat diag+suiv virol2014
Chevaliez s hcv strat diag+suiv virol2014
 
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.pptCarcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
Carcinogenèse hépatique d'origine virale.ppt
 
Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16Zoulim vhb du16
Zoulim vhb du16
 
Mathurin p coinfection 2014
Mathurin p  coinfection 2014Mathurin p  coinfection 2014
Mathurin p coinfection 2014
 
1591354193.pdf
1591354193.pdf1591354193.pdf
1591354193.pdf
 
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
Le S.I.D.A - Des Sciences fondamentales à la clinique
 
Co-infection VIH-VHC
Co-infection VIH-VHCCo-infection VIH-VHC
Co-infection VIH-VHC
 
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtesCycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
Cycle de developpement du Plasmodium: devenir des sporozoïtes
 
human immunodeficiency virus
human immunodeficiency virushuman immunodeficiency virus
human immunodeficiency virus
 
Rendement parasitaire chez l'anophèle
Rendement parasitaire chez l'anophèleRendement parasitaire chez l'anophèle
Rendement parasitaire chez l'anophèle
 
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez PlasmodiumPolymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
Polymorphisme des gènes hrpII et pldh chez Plasmodium
 
Poster 65 microbiologie
Poster 65 microbiologiePoster 65 microbiologie
Poster 65 microbiologie
 
Lerat du2012
Lerat du2012Lerat du2012
Lerat du2012
 
Poster 64 microbiologie
Poster 64 microbiologiePoster 64 microbiologie
Poster 64 microbiologie
 
Moussalli du-2012-vhcud
Moussalli du-2012-vhcudMoussalli du-2012-vhcud
Moussalli du-2012-vhcud
 
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS : une nouvelle PCR digitale multiplex pour...
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS :  une nouvelle PCR digitale multiplex  pour...AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS :  une nouvelle PCR digitale multiplex  pour...
AVORTEMENTS des PETITS RUMINANTS : une nouvelle PCR digitale multiplex pour...
 
cours-biologie-moleculaire-neh.pdf
cours-biologie-moleculaire-neh.pdfcours-biologie-moleculaire-neh.pdf
cours-biologie-moleculaire-neh.pdf
 
Investigation d'un épisode épidémique
Investigation d'un épisode épidémiqueInvestigation d'un épisode épidémique
Investigation d'un épisode épidémique
 
Thibault vha vhe- 2015
Thibault vha vhe- 2015Thibault vha vhe- 2015
Thibault vha vhe- 2015
 

Plus de odeckmyn

VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfantVHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
odeckmyn
 
Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015
odeckmyn
 
Examen DU - 2014
Examen DU - 2014 Examen DU - 2014
Examen DU - 2014
odeckmyn
 
Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16
odeckmyn
 
Thabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhvThabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhv
odeckmyn
 
Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4
odeckmyn
 
Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016
odeckmyn
 
Du 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkersDu 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkers
odeckmyn
 
Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16 Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16
odeckmyn
 
Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16
odeckmyn
 
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
odeckmyn
 
Zarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpzZarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpz
odeckmyn
 
Thabut2 vhc vhb du16
Thabut2 vhc  vhb du16Thabut2 vhc  vhb du16
Thabut2 vhc vhb du16
odeckmyn
 
Sos hepatites du16
Sos hepatites du16Sos hepatites du16
Sos hepatites du16
odeckmyn
 
Rosmorduc carninogenese du16
Rosmorduc  carninogenese du16Rosmorduc  carninogenese du16
Rosmorduc carninogenese du16
odeckmyn
 
Samuel2 hcv lt du16
Samuel2 hcv  lt du16Samuel2 hcv  lt du16
Samuel2 hcv lt du16
odeckmyn
 
Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16
odeckmyn
 
Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16
odeckmyn
 
Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16
odeckmyn
 
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
odeckmyn
 

Plus de odeckmyn (20)

VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfantVHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
VHC,VHB : femme enceinte et transmission mère-enfant
 
Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015Sujets examen DU - 2015
Sujets examen DU - 2015
 
Examen DU - 2014
Examen DU - 2014 Examen DU - 2014
Examen DU - 2014
 
Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16Thabut beneferadic16
Thabut beneferadic16
 
Thabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhvThabut vhc2016duhv
Thabut vhc2016duhv
 
Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4Du 2016 programme v2 a4
Du 2016 programme v2 a4
 
Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016Histoire hcv du 2016
Histoire hcv du 2016
 
Du 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkersDu 2016 tp biomarkers
Du 2016 tp biomarkers
 
Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16 Zoulim fz traitement vhb du16
Zoulim fz traitement vhb du16
 
Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16Thabut1 vhc tt du16
Thabut1 vhc tt du16
 
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2Zoulim2  traitement hépatite b 2016 d uv2
Zoulim2 traitement hépatite b 2016 d uv2
 
Zarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpzZarski hépatites virales du16 jpz
Zarski hépatites virales du16 jpz
 
Thabut2 vhc vhb du16
Thabut2 vhc  vhb du16Thabut2 vhc  vhb du16
Thabut2 vhc vhb du16
 
Sos hepatites du16
Sos hepatites du16Sos hepatites du16
Sos hepatites du16
 
Rosmorduc carninogenese du16
Rosmorduc  carninogenese du16Rosmorduc  carninogenese du16
Rosmorduc carninogenese du16
 
Samuel2 hcv lt du16
Samuel2 hcv  lt du16Samuel2 hcv  lt du16
Samuel2 hcv lt du16
 
Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16Samuel1 hbv lt du16
Samuel1 hbv lt du16
 
Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16Rudler hépatites ir du16
Rudler hépatites ir du16
 
Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16Rudler réinfection vhb du16
Rudler réinfection vhb du16
 
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
Pawlotzky hcv resistances.pptx du16
 

Chevaliez Du 2009

  • 1. VIRUS DE L’HEPATITE C & Marqueurs Stéphane Chevaliez Centre National de Référence Des Hépatites B, C et delta Laboratoire de Virologie & INSERM U955 Hôpital Henri Mondor Université Paris XII Créteil
  • 2. Virus de l’Hépatite C I. Aspects Virologiques
  • 3. Virus de l’Hépatite C • Famille : Flaviviridae • Genre : Hepacivirus Phylogénie de la région codant la protéine NS5B Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.
  • 4. • Famille : Flaviviridae • Genre : Hepacivirus • Hôte naturel : Homme Virus de l’Hépatite C Bartenschalger et al., 2004. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 5. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 6. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 7. Organisation Structurale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 8. Organisation Génomique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 9. Régions 5’ et 3’NC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 10. Site d’Entrée Interne du Ribosome Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 11. From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA Site d’Entrée Interne du Ribosome Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 12. Organisation Génomique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 13. STÉATOSE ROS FIBROSE Activation des cellules étoilées Insulino- Résistance Cytokines (TNF, TGF, IL-8, FasL) Produits de la peroxydation lipidique Cytokines NF-kB TNF Nécro Inflammation Cytokines TGF Cytokines Réponse immunitaire TGF Capside TNF Génotype 3 Capside NS5A Adapted from Asselah et al., 2006 Protéine de Capside & Pathogenèse Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 14. Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27. VHC génotype 1b
  • 15. xy z Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.
  • 16. Glycoprotéines E1-E2 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 17. Glycoprotéines d’Enveloppe Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Heijne et al., Nature Reviews Molecular cell Biology, 2006; 7: 909-918
  • 18. Région HVR1 (27 amino-acides)  80% de divergence nucléotidique entre génotypes  Epitope majeur de neutralisation Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808-4817. Région HVR1 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 19. Protéine Non-structurale 3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 20. 1 631189 Sérine protéase Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 21. Sérine protéase • Modulateur de la réponse interféron type I via les Toll-Like receptor (TLR3) Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs 1 631189
  • 22. Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265 Production d’IFN- en Réponse à une Infection Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 23. Bode et al., 2007; Archives of Biochemistry and Biophysics, 462: 6254-265 1. Clivage de TRIF 2. Clivage de CARDIF Inhibition de la Phosphorylation d’IRF3 par NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 24. Sérine protéase • Modulateur de la réponse interféron type I via les Toll-Like receptor (TLR3) • Cible de molécules antivirales  VX-950 (Telaprevir®, Vertex)  SCH503034 (Boceprevir®, Schering-Plough)  ITMN 191 (Intermune) Hélicase/NTPase Protéine NS3 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs 1 631189
  • 25. OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy. Site actif (His57, Asp81, Ser139)
  • 27. Protéine NS4B Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 28. Complexe de Réplication Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.
  • 29. ARN Polymérase ARN-dépendante Virus de l’Hépatite C et Marqueurs NS4A NS4B p7 Adapted from Tan et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881
  • 30. Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7: 1417-1426. Polymérase Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 31. Réplication – Modèle du poliovirus . Virus à ARN monocaténaire de polarité positive De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 Réplication Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 32. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides 4’ azido-cytidine NNI site D (R200 hinge) Benzofurans A B C D Cibles des Molécules Antivirales Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 33. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 34. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 35. Modèle d’Entrée Virale Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 36. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 37. Maturation de la Polyprotéine Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 38. Structure des Protéines NS Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 39. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 40. Complexes de Réplication Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 41. Cycle Viral Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 42. Virus de l’Hépatite C II. Modèles d’Etude
  • 43. Souris transgéniques Souris SCID/uPA Modèles Animaux Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 44. Visualisation des cellules Huh7 infectées 3 - Vecteur de transfert de la GFP 2 - Expression des glycoprotéines E1E2 du VHC 1 - Expression de Gag-Pol de MLV Co-transfection des cellules 293 T Production de ppVHC infectieuses Infection in vitro des cellules Huh7 Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 45. A B Adapted from Nature Review Drug Discovery, 2002; 1:911-916 Réplicons Subgénomiques Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 46. Adapted from www.molecular-virology.uni-hd.de Système Productif (HCVcc) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 47. Virus de l’Hépatite C III. Variabilité Génétique
  • 48. Virus de l’hépatite C Production virale (/24 heures) 1012 T1/2 virus libre (heures) 2 - 3 T1/2 brin ARN (heures) ~10 Taux de mutation Très élevé Mutants d’échappement au SI Fréquent Cellules cibles Taille du compartiment Probablement grande Soriano et al., J Antimicro Chemother 2008, 62: 1-4 Dynamique Virale Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 49. • Erreurs au cours de la réplication – Fréquentes . 10-4 -10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC – Spontanées – Au hasard • Absence d’activité exonucléasique 3’5’ ("proofreading") – Accumulation de mutations • A l’origine de : – La diversification des types et des sous-types – La distribution en quasi-espèces ARN Polymérase ARN-dépendante Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 50. Simmonds et al. Hepatology 2005. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Diversification des Génotypes
  • 51. 7 Central Africa Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. Diversification des Génotypes Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 52. • Facteur prédictif de la réponse au traitement • Conditionne – La dose de ribavirine (800 - 1400 mg) – La durée de traitement (16 - 72 semaines) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Génotypes
  • 53. Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Distribution en Quasi-espèce
  • 54. • Dérive génétique – Accumulation de mutations ponctuelles • Glissement génétique – Suite à la modification brutale de l’environnement réplicatif Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Mécanismes d’Evolution de la Quasi-espèce
  • 55. • Joue un rôle dans le maintien de l’infection chronique • Joue un rôle dans l’échec des traitements antiviraux • Joue un rôle dans la sévérité de la maladie Farci P, 2000; Science, 288: 339-344; Lavillette D, 2005; Journal of Virology, 79(10): 6023-6034; Farci P, 2002; PNAS, 99: 3081-3086; Chambers TJ et al., 2005; 79: 3071-3083; Sullivan et al., JID 2007, 196: 239-248. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs Distribution en Quasi-espèce
  • 56. Virus de l’Hépatite C IV. Exemples d’Application de la Variabilité Génétique
  • 57. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 58. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 59. 7 Central Africa Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. Diversification des Génotypes Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 60. Génotype & Mode de Transmission 52% 54% 63% 0% 20% 40% 60% 80% 100% UDVI Transfusion Autres 3 1b 1a Autres Pawlotsky et al., J Infect Dis, 1995; 171(6): 1607-10. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 61. 27% 39% 36% 0% 20% 40% 60% 80% 100% UDVI Transfusion Autres 4 3 2 1b 1a 1nt Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13. Génotype & Mode de Transmission Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 62. Génotype 3a Chez les UDVI 0.1 substitution per site JK049 TrKj NE125 NE048 HCV-3a HCV-3f HCV-3c HCV-3b HCV-3k Australie USA, Côte Ouest Argentine Brézil France USA, Côte Est 75 72 83 79 100 92 60 62 81 63 98 98 99 62 52 71 95 56 Morice et al., J Med Virol 2006;78:1296-1303. Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 63. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 64. • Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du dépistage et du suivi des patients hémodialysés en juillet 2005, à l’hôpital Henri Mondor • L’ensemble des patients hémodialysés ont été testés (anticorps anti-VHC et ARN viral) – Mise en évidence d’un 2nd cas au cours de la même période • Analyses génétique et phylogénique • Recherche du VHC dans l’environnement – Supports et surfaces inertes Transmission Nosocomiale "Mondorienne" Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 65.  Identification de deux cas de séroconversion en 2004 au sein de l’unité d’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor : – Patient "1" infecté par un génotype 3a – Patient "2" infecté par un génotype 1 Transmission Nosocomiale "Mondorienne" Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 66. 1h_FrSSD98 1h_98CM1521 1h_98CM1357 1f_FR2 1i_FR16 1i_QC77 1iQC181 1m_GUI17 1m_GUI11 1m_GUI24 1d_HC1N16 1d_BA107 1d_FR17 Patient 8 1b_HCJ4 Patient 7 Patient 6 Patient 5 Patient 4 1b_HCP01 1b_HCVBK 1c_HCG9 1c_SR031 1c_Khaja1 1l_M5186N 1l_98CM1427 1l_98CM1457 1e_M4541N 1e_CAM1078 1e_QC172 1g_1382 1g_2152 1g_EG024 1a_HCV1 1a_HCVH 1a_HCJ1 1j_QC2 1j_QC89 1k_QC68 1k_QC82 Patient 3 Patient 2* Patient 2** 2a_HCJ6 5a_SA13 6a_EUHK2 Patient 1 3a_NLZ1 4a_ED43 0.05 Genotype 4 Genotype 3 Genotype 6 Genotype 5 Genotype 2 Genotype 1 100 100 100 Patients VHC chronique Séroconversion VHC Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. G1 Analyse Phylogénique Région NS5B (329 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 67. 6a_33 2b_JFH1 Patient 1 (7/04) 5a_SA13 1b_HVR3812 S5 (7/05) Patient 3 (7/05) Patient 3 (9/05) Patient 2 (7/04) Patient 2 (9/04) Patient 3 (7/04) S4 (6/05) S3 (6/05) S2 (6/05) Patient 3 (01/05) S1 (6/05) 1a_HCT27X5 2a_Q2B 3a_CB 1a_HCT18X5 Patient 6 1b_AWV2C33 Patient 8 Patient 4 Patient 7 4a_ED43 0.2 100 Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. Patients VHC chronique Séroconversion VHC Analyse Phylogénique Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 68. 6a_33 2b_JFH1 Patient 1 (7/04) 5a_SA13 1b_HVR3812 S5 (7/05) Patient 3 (7/05) Patient 3 (9/05) Patient 2 (7/04) Patient 2 (9/04) Patient 3 (7/04) S4 (6/05) S3 (6/05) S2 (6/05) Patient 3 (01/05) S1 (6/05) 1a_HCT27X5 2a_Q2B 3a_CB 1a_HCT18X5 Patient 6 1b_AWV2C33 Patient 8 Patient 4 Patient 7 4a_ED43 0.2 100 Surfaces inertes Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633. Patients VHC chronique Séroconversion VHC Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Analyse Phylogénique Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 69. • Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital Hubert Kutuku Maga, Cotonou, Bénin (Afrique) – Détection anticorps anti-VHC – Détection ARN VHC (limite détection <50UI/mL) • Etude génétique et phylogénique de deux régions distinctes du génome viral – NS5B – Core-E1 Transmission Nosocomiale au Bénin Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 70. Analyse Phylogénique 5aSA13 2aHCJ6 Patient 49 6aEUHK2 3aNLZ1 Patient 62 4aED43 1hFrSSD98 1h98CM1357 1h98CM1521 1cHCG9 1cSR031 1cKhaja1 1aHCV1 1aHCVH 1aHCJ1 1jQC2 1jQC89 1kQC68 1kQC82 1eM4541N 1eCAM1078 1eQC172 1g1382 1g2152 1gEG024 1lM5186N 1l98CM1427 1l98CM1457 1fFR2 Patient 59 Patient 46 Patient 54 Patient 2 Patient 28 Patient 64 Patient 16 Patient 36 Patient 18 Patient 17 Patient 8 Patient 7 1bHCJ4 1bHCVBK 1bHCP01 Patient 40 1iFR16 1iQC77 1iQC181 Patient 48 Patient 60 Patient 52 Patient 26 1dFR17 1dHC1N16 1dBA107 1mGUI17 1mGUI11 1mGUI24 0.05 59 99 96 34 100 72 100 98 43 Région NS5B (286 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining Bootstraping : 1000 replicates NJPlot Génotype 2 Génotype 4 Génotype 3 Génotype 1 Génotype 6 Génotype 2 Génotype 5 Génotype 1, sous-type b Génotype 3, sous-type a Génotype 1, sous-type i Génotype 1, sous-type ? 100 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 71. Transmissions Nosocomiales Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining NJPlot 2aQ2B 3aCB 2bJFH1 1aHCT18X5 6a33 4aED43 1aHCT27X5 Patient 7 Patient 8 Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 2 Patient 28 Patient 64 Patient 54 Patient 46 5aSA13 Patient 59 Patient 52 Patient 48 Patient 60 1bAWV2C33 1bHVR3812 0.2 Patient 26 Patient 40 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 72. MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Etude de la région NS5B Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 8 Patient 7 Patient 64 Patient 46 1f_L38350 1e_AY894555 1g_AF271822 1g_AF271820 1d_L39302 1d_L39299 1b_M58335 1b_D90208 1i_AY434119 1h_AY434131 1j_AY434158 1j_AY434128 1k_AY434122 1k_AY434112 1a_M67463 1a_M62321 1c_D14853 1c_AY051292 0.05 PARCIMONIE Patient 16 Patient 18 Patient 17 Patient 7 Patient 8 Patient 64 Patient 46 1f_L38350 1h_AY434131 1i_AY434119 1d_L39302 1d_L39299 1b_M58335 1b_D90208 1e_AY894555 1g_AF271822 1g_AF271820 1j_AY434158 1j_AY434128 1k_AY434122 1k_AY434112 1a_M67463 1a_M62321 1c_D14853 1c_AY051292 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 73. MAXIMUM DE VRAISEMBLANCE Assignation Provisoire d’un Nouveau Sous-type : Etude de la région Core-E1 PARCIMONIE Patient 7 Patient 64 Patient 46 Patient 18 Patient 16 Patient 17 Patient 8 1h_AY434132 1h_AY257087 1d_L38377 1i_AY434120 1i_L48495 1b_M58335 1b_L38372 1b_D90208 1f_L38371 1l_AY257091 1l_AY257083 1c_AY051292 1c_D14853 1g_AF271797 1g_AF271798 1e_AY894553 1e_L38361 1k_AY434123 1k_AY434113 1j_AY434129 1j_AY434106 1a_M67463 1a_M62321 0.02 Patient 64 Patient 46 Patient 18 Patient 16 Patient 17 Patient 7 Patient 8 1d_L38377 1i_AY434120 1i_L48495 1b_D90208 1b_L38372 1b_M58335 1l_AY257091 1l_AY257083 1c_AY051292 1c_D14853 1g_AF271797 1g_AF271798 1e_AY894553 1e_L38361 1k_AY434123 1k_AY434113 1j_AY434129 1j_AY434106 1a_M67463 1a_M62321 1f_L38371 1h_AY434132 1h_AY257087 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 74. • Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en Grèce ("Papageorgiou General Hospital", Thessaloniki) • 17 patients hémodialysés contaminés en quelques mois • Analyses génétique et phylogénique • Etude de la réponse neutralisante – Système HCVpp Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Transmission Nosocomiale en Grèce Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 75. 0,1 substitution per site HCV-1 HCV-H SR052 HC-G9 SR037 HC-J4 HCV-BK BE90 Pt-11 Pt-10 Pt-9 Pt-5 Pt-12 Pt-13 Pt-15 Pt-16 Pt-2 Pt-4 Pt-3 Pt-1 Pt-17 Pt-7 Pt-6 Pt-8 1b HCV-1 1a 1c Souche B Souche A Analyse Phylogénique Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Région HVR1 (81 nt) CLUSTALX DNADist (PHYLIP 3.5) Matrice de distance: Kimura 2- parameter (Ts/Tv=2) Neighbor-Joining NJPlot Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 76. Incubation HCVpp avec des dilutions de sérum Détermination de l’infectivité (bruit de fond) Détermination de l’activité neutralisante du sérum Infection de cellules Huh7 Pseudoparticules Rétrovirales (HCVpp) Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 77. Patient-10 (souche B) ARN VHC (UI/mL) Semaines % neutralisation infection Huh7 ARN VHC Réponse Neutralisante ALAT Contrôle Neutralisation • Absence de réponse neutralisante et absence de contrôle de l’infection Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Réponse Neutralisante - Groupe 1 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 78. • Réponse neutralisante forte et spécifique • Réponse neutralisante inversement proportionnelle à la cinétique de la charge virale Patient-1 (souche A) % neutralisation infection Huh7 Réponse Neutralisante - Groupe 2 ARN VHC (UI/mL) Semaines ARN VHC Réponse Neutralisante ALAT Contrôle Neutralisation Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34 Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 79. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 80. Histoire Naturelle Hépatite Aiguë Hépatite Chronique 50 - 85% Cirrhose 20 - 30% Décompensation 6 - 10% HCC 4 - 5% par an Mortalité 10-30ans Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 81. Histoire Naturelle Hépatite Aiguë Hépatite Chronique 50 - 85% Cirrhose 20 - 30% Décompensation 6 - 10% HCC 4 - 5% par an Mortalité 10-30ans Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 82. Persistance Virale • Persistance virale – Echec de la réponse immune, pourtant présente et adaptée, à éliminer le virus ou les cellules qui l’abritent • Interface complexe Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 83. Processus Multi-étape Hépatite Aiguë Infection Chronique Hépatite Chronique 50 - 85% 1. Mise en place de l’infection aiguë 2. Etablissement de la persistance virale 3. Maintient de l’infection au cours du temps Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 84. Hépatite Aiguë Infection Chronique Hépatite Chronique 50 - 85% 1. Mise en place de l’infection aiguë 2. Etablissement de la persistance virale ? 3. Maintient de l’infection au cours du temps Processus Multi-étape Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 85. Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805 Persistance du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 86. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 87. Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57) Région 5’NC Région E1-E2 Compartimentation Plasma-PBMC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 88. • Diversification et diffusion du VHC • Transmission du VHC • Mécanismes de persistance et d’infection du VHC • Compartimentation tissulaire du VHC • Mécanisme d’échec thérapeutique et de résistance Impacts de la Variabilité Génétique du VHC Virus de l’Hépatite C et Marqueurs
  • 89.
  • 90. HEPATITE C : Stratégie Diagnostique & Suivi Virologique
  • 91. Virus de l’Hépatite C I. Cinétique des Marqueurs Virologiques
  • 92. Marqueurs Virologiques Stratégie diagnostique & suivi virologique Marqueurs indirects Anticorps anti-VHC totaux Marqueurs directs ARN VHC Génotype VHC
  • 93. Cinétique des Marqueurs ARN VHC Symptômes +/- Temps après contage (mois) Titre Anti-VHC ALAT Normal 0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48 Infection Aiguë Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 94. Cinétique des Marqueurs ARN VHC Symptômes +/- Temps après contage (mois) Titre Anti-VHC ALAT 0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48 Infection Chronique Normal Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 95. Virus de l’Hépatite C II. Tests Virologiques
  • 96. Tests Virologiques Moléculaires Tests quantitatifs Seuil de détection ≥ qualitatifs Quelle quantité est présente ? Tests qualitatifs Très sensibles ( 50 IU/mL) Est-ce que le VHC est présent ? Stratégie diagnostique & suivi virologique Détermination du Génotype Quel type de VHC est présent ?
  • 97. Tests Virologiques Moléculaires Stratégie diagnostique & suivi virologique Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ? Détermination du Génotype Quel type de VHC est présent ? Tests Quanti-Qualitatifs
  • 99. Intérêts de la Détection - Quantification de l’ARN VHC • Evaluation de la réplication virale chez des patients anticorps anti-VHC positifs • Evaluation de la réponse virologique au cours du traitement pegIFN - RBV – Réponse virologique rapide (semaine 4) – Réponse virologique précoce (semaine 12) – Réponse fin de traitement (EOT) – Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 100. Techniques Disponibles b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 101. Principe des Techniques b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 102. bDNA : Principe ARN VHC Capture Probe Capture Extender Label extender Preamplifier Amplifier with hybridized label probe Adapted from Siemens Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 103. bDNA : Forces & Faiblesses • Forces – Quantification indépendante du génotype – Tolérance de polymorphismes nucléotidiques – Faible volume de prise d’essai – Large intervalle de quantification linéaire . ≥ 6.90 Log10 UI/mL • Faiblesses – Faible sensibilité . LLOD: 2.80 Log10 UI/mL – Faux positifs dans les faibles valeurs – Méthode semi-automatisée (Siemens system 340 analyzer) – 12 contrôles par run Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 104. Principe des Techniques b-DNA PCR Branched DNA Polymerase chain reaction Amplification du signal Amplification de la cible Quantitative Quantitative Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 105. PCR : Principe VHC ARN ADNc Amplicons (ADNdb) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 106. Avantages Techniques de la PCR en temps réel • Diminution du risque de contamination • Amélioration de la sensibilité • Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire • Amélioration précision et reproductibilité • Augmentation de débit à travers l’automatisation • Diminution des coûts Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 107. 10 102 103 104 105 106 107 108 Cobas Amplicor HCV Monitor v2.0 SuperQuant LCx HCV RNA Assay Versant HCV RNA 3.0 (bDNA) Intervalle de Quantification Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 108. 10 102 103 104 105 106 107 108 Cobas Amplicor HCV Monitor v2.0 SuperQuant LCx HCV RNA Assay Versant HCV RNA 3.0 (bDNA) TaqMan 48 HCV (Roche) HCV Quant ASR (Abbott) Versant HCV RNA 1.0 (kPCR, Siemens)* *en développement Intervalle de Quantification Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 109. • Diminution du risque de contamination • Amélioration de la sensibilité • Augmentation de l’intervalle de quantification linéaire • Amélioration précision et reproductibilité • Augmentation de débit à travers l’automatisation • Diminution des coûts Stratégie diagnostique & suivi virologique Avantages Techniques de la PCR en temps réel
  • 110. Plates-formes CAP-CTM96 (ROCHE) kPCR (SIEMENS) m2000SP-m2000RT (ABBOTT) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 111. • Remplace les techniques qualitatives de détection de l’ARN VHC • Quantifie l’ensemble des charges virales observées en pratique clinique – Faibles charges virales au cours du traitement • Surveille efficacement les cinétiques virales (évaluation précoce des réponses virologiques au traitement) Stratégie diagnostique & suivi virologique Avantages Cliniques de la PCR en temps réel
  • 112. Quantification de l’ARN du VHC CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens) DifferencebetweenHBVDNAlevelsmeasuredin CAP/CTMandinbDNA(inLog10IU/mL) 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 Mean of HCV RNA levels measured in CAP/CTM and bDNA (in Log10 UI/mL) Genotype 1 (n=29) Genotype 2 (n=27) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=30) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=2) Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31. Mean difference + 1.96 mean difference - 1.96 mean difference Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 113. Différences de Quantification Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31. Genotype 1 (n=29) Genotype 2 (n=27) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=30) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=2) -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 15% 30% DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin CAP/CTMandinbDNA(inLog10UI/mL) CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 114. Chevaliez et al., manuscript in preparation. m2000SP-m2000RT (Abbott) versus bDNA 3.0 (Siemens) Mean of HCV RNA levels measured in m2000SP/m2000RT and bDNA (in Log10IU/mL) 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 -1.5 1.0 -1.0 1.5 0.0 0.5 -0.5 DifferencebetweenHCVRNAlevelsmeasuredin m2000SP/m2000RTandinbDNA(inLog10IUI/mL) Mean difference + 1.96 mean difference - 1.96 mean difference Genotype 1 (n=55) Genotype 2 (n=21) Genotype 3 (n=29) Genotype 4 (n=24) Genotype 5 (n=9) Genotype 6 (n=3) Quantification de l’ARN du VHC Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 115. David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics). kPCR HCV 1.0 (Siemens) versus bDNA 3.0 (Siemens) 132 clinical samples Quantification de l’ARN du VHC Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 117. Génotypes du VHC Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007. 7 Central Africa Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 118. Intérêts de la Détermination du Génotype • Détermination systématique du génotype – Facteur prédictif de la réponse au traitement – Conditionne • La dose de ribavirine • La durée du traitement (24 vs 48 semaines) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 119. Détermination du Génotype • Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage) • Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 120. Détermination du Génotype • Détermination moléculaire du génotype VHC (génotypage) • Détermination sérologique du génotype VHC (“sérotypage”) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 121. Cibles pour le Génotypage NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 122. Cibles pour le Génotypage NS4A NS4B p7 Adapted from Tail et al., Nature Reviews Drug Discovery, 2002; 1(6): 867-881 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 123. Méthodes de Génotypage • Séquençage direct des produits d’amplification1 • Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2 • Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3 • Autres méthodes : – Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4 – Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5 1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 124. Méthodes de Génotypage • Séquençage direct des produits d’amplification1 • Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)2 • Hybridation inverse des produits d’amplification sur support solide : Line Probe Assay (INNO-LiPA HCV, Innogenetics)3 • Autres méthodes : – Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)4 – Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage5 1Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29.; 2Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; 4Lareu et al., 1997; 3Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 125. Versant® HCV Genotype 2.0 Assay 3 17 15 20 21 23. AC Marker CC AC 4 5 10 12 24. 6 c-l 16 2b 3a 4b 6a1b 6c-l1a 6 7 8 9 11 13 14 18 19 25. 1a 25. 1b 5’UTR Same bands as the 1.0 version Core region Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 126. Importance de la Région Virale pour la Détermination du Sous-type Analyse phylogénique de la région 5’NC 1ère génération de Line probe assay (LiPA1.0) 2ème génération de Line probe assay (LiPA2.0) PCR en temps réel 1a (n=233) 80,3% (n=187) 73,0% (n=170) 98,3% (n=229) 94,4% (n=220) 1b (n=253) 94,1% (n=238) 91,7% (n=232) 98,0% (n=248) 93,3% (n=236) Chevaliez et al., EASL 2009. Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 127. Virus de l’Hépatite C III. Diagnostic Virologique
  • 128. Diagnostic de l’Infection Aiguë Ac anti-HCV - - + + ARN VHC* - + - + * Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml Diagnostic Absence d’infection aiguë Infection aiguë C Probablement pas d’infection aiguë Difficile de conclure Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 129. Diagnostic de l’Infection Chronique • Détection des anticorps anti-VHC totaux par ELISA • Recherche d’ARN du VHC par un test sensible* • Détection d’ARN du VHC* si le test ELISA (- ) chez des patients hémodialysés ou immunodéprimés * Technique sensible seuil de détection ≤ 50 IU/ml Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 130. Virus de l’Hépatite C III. Prise en Charge Thérapeutique
  • 131. Intérêts des Tests Virologiques en Thérapeutique Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20 • Décision de traiter • Optimisation du schéma thérapeutique • Etude de la réponse virologique au traitement Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 132. Classification des Patients Type 1 Types 2, 3 Types 4, 5, 6 Génotypes VHC Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 133. Indications Actuelles du Traitement • Patients infectés par un VHC de génotype 1 – Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j) – Durée : 48 semaines • Patients infectés par un VHC de génotype 2/3 – Interferon pégylé plus ribavirine (800 mg/j) – Durée : 24 semaines • Patients infectés par une VHC de génotype 4, 5 et 6 – Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j) – Durée : 48 semaines Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 134. Génotype VHC VHC-1 (4,5,6) Quantification ARN VHC-2,3 Bithérapie 24 semaines Ribavirine 800 mg Bithérapie 48 semaines Ribavirine 1000-1400 mg Quantification ARN à S12 Diminution < 2 Log Diminution  2 Log ARN VHC + Arrêt traitement poursuite avec IFN pégylé pour ralentir la progression de la maladie hépatique Poursuite jusqu’à S24 Si ARN VHC - Poursuite jusqu’à S48 diminution  2 Log ARN VHC - Poursuite jusqu’à S48
  • 135. Optimisation du Traitement en Fonction de la Réponse Virologique • Outils virologiques sensibles – Sensibilité : 10-15 UI/mL – Evaluation de la réponse au traitement • Répondeurs virologiques rapides – Raccourcissement de la durée de traitement • Répondeurs virologiques précoces partiels – Allongement de la durée de traitement Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 137. RVR facteur prédictif de la RVS Fried et al., EASL 2008, Journal of Hepatology, 48(Suppl.2): S5 N= 1383 (Analyse rétrospective) Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 138. Importance de la RVR • Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1 traités pendant 48 semaines par pegIFN alfa-2a + RBV (N = 453) ARN VHC Positif À S24 4 12 24 Semaine ARN négatif 91 66 45 2 Ferenci P, et al. J Hepatol. 2005;43:425-433. 20 40 60 80 100 RVS(%) 0 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 139. Traitement Court : Génotype 1 • Patients par un VHC de génotype 1 – ARN VHC < 600,000 IU/ml – PegIFN-2b + ribavirine – 24 semaines de traitement – Comparaison des données obtenus avec les résultats de l’étude pivot (Mann et al., Lancet 2001) Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103. Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 140. Traitement Court : Génotype 1 Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Week 4 Week 12 Week 24 24 weeks 48 weeks (Mann et al., 2001) Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml) %SVR Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 141. Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960 Traitement court : Génotype 1 0 20 40 60 80 100 %deRVS Peg-IFN alpha 2a 180 µg/semaine + RBV 800 ou 1000-1200 mg/j ARN VHC > 50 UI/mL à S4 24-DF 24-DS 48-DF 48-DS 73% 89% 88% 91% ARN VHC < 50 UI/mL à S4 44% 23% 35% 16% Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 142. Shiffman et al., EASL 2006. Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique %RVS p=<0.0001 p=0.1565 65% 82% 65% 71%
  • 143. Rapid virological response HCV RNA < 50 IU/ml at week 4 No rapid virological response HCV RNA ≥ 50 IU/ml at week 4 Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique Shiffman et al., EASL 2006. 82% 90% 27% 49% SVR rate SVR rate
  • 144. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 14 weeks 24 weeks %Sustainedvirologicalresponse Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42 RVR (HCV RNA < 50 IU/ml at week 4) 93% 84% Genotype 2 Genotype 3 92% 97% Traitement court : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique PegIFN-2b
  • 145. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 12 weeks 24 weeks %Sustainedvirologicalresponse (Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-45) 71% 91% RVR 62% 41% n = 120n = 111 n = 68n = 71 No RVR PegIFN-2a Traitement court : Génotypes 2/3 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 146. • Durée de traitement de 6 mois chez tous les patients avec une RVR indépendamment du génotype • Raccourcissement de la durée de traitement à 12 ou 16 semaines chez les patients infectés par une génotype 2/3 avec un ARN indétectable à S1 ou S2 (?) Résumé Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 147. Allongement de la Durée de Traitement
  • 148. Traitement Long : Génotypes 2/3 • Older age • Male gender • High BMI • Fibrosis ≥ F3 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 149. Génotype 1 : Traitement Long 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 48 weeks (n=230) 72 weeks (n=225) 53% 54% %SVR Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97 Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 150. 0 20 40 60 80 100 %deRVP NS NS NS p=0.04 S 4 S 12 S 4 S 12 ARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ≥ 50 UI/ml Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97 48 semaines 72 semaines Génotype 1 : Traitement Long Stratégie diagnostique & suivi virologique
  • 151. Résumé Stratégie diagnostique & suivi virologique • Allongement de la durée de traitement à 72 semaines améliore la RVS : – Chez les patients avec une RVP partielle – Chez les non-répondeurs à un premier traitement par une bi-thétrapie standard qui sont retraités
  • 152.
  • 153. HEPATITE C : Résistance aux Traitements
  • 154. • Définition – Propriétés intrinsèques des souches virales qui s’opposent à l’action antivirale des effecteurs ou à des médicaments antiviraux Résistance aux traitements Résistance Virale
  • 155. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
  • 156. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
  • 157. PEG-IFN- 2a + ribavirine (Fried et al., 2002) PEG-IFN- 2b + ribavirine (Manns et al., 2001) Manns et al., Lancet 2001;358:958-65 ; Fried et al., N Engl J Med 2002;347:975-82; Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140:346-55. PEG-IFN- 2a + ribavirine (Hadziyannis et al., 2004) 54% 24% 58% 48% 18%16% Résistance aux traitements Taux d’Echecs
  • 159. Cinétique Virale sous Traitement 2nde phase 7 14 T(n) Cutoff 1ère phase 1 0 1 2 3 2 3 4 5 6 7 Jours Neumann et al., Science 1998;282:103-7. Résistance aux traitements
  • 160. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
  • 161. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
  • 162. 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 7 8 15 22 291-7-28 Cut-off tests qualitatifs Cut-off tests quantitatifs Génotype 4 Génotype 1 Génotype 3 ARNduVHC(Log10UI/mL) Jours 7 Résistance Intrinsèque Résistance aux traitements Pawlotsky et al., manuscript en preparation.
  • 164. – Motif nucléotidique responsable de cette différence de sensibilité ? – Pas de sélection de mutations de résistance, même si modification de la composition de la quasi-espèce virale Résumé Résistance aux traitements
  • 165. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
  • 166. Mécanismes d’Action Hypothétiques de la RBV Adapted from Lau et al., Hepatology 2002; 35: 1002-9. Ribavirine Ribavirine Transporteur RMP RDP RTP GMP GTP IMPDH IMP RdRp Réplication HCV RNA Hépatocyte (2) Inhibition de la RdRp VHC(1) Inhibition de l’IMPDH HCV RNA "Catastrophe (3) Effet mutagène erreur” CTL Th1 IFN-, TNF- (4) Effets immunomodulateurs Résistance aux traitements
  • 167. Pawlotsky et al., Gastroenterology 2004;126:703-14 -1.0 -0.5 0.0 0.5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 Mean HCV RNA decrease (log IU/ml) Time (days) Controls Ribavirin monotherapy Résistance aux traitements Effet Antiviral de la RBV
  • 168. Semaines * * * * * * p<0.05 24 7260524830 36 RBV jusqu’à S52 Arrêt RBV à S24 Bronowicki et al., Gastroenterology 2006 PourcentagedeRechutes(HCVRNA+) Suivi post-thérapeutique Prévention de la Rechute Résistance aux traitements
  • 169. Prévention de la Rechute (PROVE-2) Résistance aux traitements Hézode et al., en révision favorable. T12/PR12 n/N= T12/P12 (Sans RBV) 48 22/46 0 10 20 40 50 Tauxderechutes(%) 30 T12/PR24 14 8/5719/63 30 PR48 (Contrôle) 22 10/45
  • 170. • Ribavirin mechanisms of action in chronic hepatitis C remain unknown • Ribavirin direct antiviral effect is modest and transient • Long-term ribavirin administration does not select for specific resistance substitutions Résumé Résistance aux traitements
  • 171. • Résistance du VHC à la thérapie par l’interféron • Résistance du VHC à la ribavirine • Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques Résistance aux traitements Résistance du VHC
  • 172. Cibles Potentielles des Inhibiteurs Spécifiques De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 1. Attachement viral, fusion, décapsidation 2. Traduction de l’ARN viral 3. Maturation de la polyprotéine 4. Réplication du génome viral 5. Maturation de la particule virale Résistance aux traitements
  • 173. Viral entry inhibitors Hepatitis C immunoglobulin HCIg) HCV-Ab 68 and Ab 65 (monoclonal Ab) HCV RNA translation inhibitors ISIS 14803 (antisense) AVI – 4065 (antisense) Heptazyme (ribozyme) VGX-410C (small molecule IRES inhibitor) TT 033 (siRNA) Posttranslational processing inhibitors NS3-4A serine proteinase inhibitors BILN 2061 ITMN 191 VX-950 SCH 503034 ACH-806/GS-9132 HCV replication inhibitors NS5B polymerase inhibitors MK-0608 HCV-796 R1626 JTK-003 NM-283 XTL 2125 Cyclophilin B inhibitors DEBIO-025 NIM 811 NS5A inhibitors A-831, A-689 Helicase inhibitors QU663 Recombinant Ab fragments Virus assembly and release inhibitors UT-231B (iminosugar-glucosidase inhibitor) Celgosivir (glucosidase inhibitor) Phase of Development * * * * Preclinical I II III IV * * * Pawlotsky JM, Chevaliez S, McHutchison JG, Gastroenterology 2007;132:1979-98. Résistance aux traitements Molécules en Développement
  • 175. sensible résistant Inhibiteur résistant sensible Résistance aux traitements Mécanismes de la Résistance sensible résistant + fit Arrêt inhibiteur
  • 176. sensible résistant Inhibiteur résistant sensible Résistance aux traitements Mécanismes de la Résistance résistant trés fit sensible Arrêt inhibiteur
  • 177. De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18 Inhibiteurs en Développement Résistance aux traitements
  • 178. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
  • 179. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
  • 181. NS4B p7 NS4A Résistance aux traitements Inhibiteurs de la Maturation de la Polyprotéine
  • 182. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
  • 183. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
  • 184. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
  • 185. Résistance aux traitements Mutations de Résistance aux Inhibiteurs de NS3/4A Compounds Ciluprevir (BILN 2061) Telaprevir (VX-950) Boceprevir (SCH 503034) ITMN-191 TMC435350 In vitro A156V/T, D168V/A/Y, R155Q A156V/T A156S/T, V170A, T54A A156V/T, D168V/A, R155K/Q ? In vivo No data A156S/V/T, R155K/T, T54A, V36A/M T54A No data No data
  • 186. • A highly selective, reversible peptidomimetic inhibitor of the HCV NS3- 4A serine protease • IC50 of the order of 0.5 µM in vitro • HCV RNA level reduction of 3-4 Log10 in vivo Lin et al., AAC 2006, 50(5): 1813-1822; Zhou et al., Antimicrob Agents and Chemother 2008, 52(1): 110-120. Résistance aux traitements Telaprevir (VX-950)
  • 187. Welsch et al., Genome Biology 2008, 9(1): R16.1-R16.18. Telaprevir
  • 188. Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002. HCVRNAchangefrom baseline(Log10IU/mL) Days -5 -4 -3 -2 -1 0 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Baseline Placebo (n=6) VX-950 750mg q8h (n=8) -4.41 -0.21 Résistance aux traitements Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)
  • 189. Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002. -5 -4 -3 -2 -1 0 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Baseline Placebo (n=6) VX-950 450mg q8h (n=10) VX-950 1250mg q12h (n=10) VX-950 750mg q8h (n=8) -4.41 -0.21 -2.21 -2.37 HCVRNAchangefrom baseline(Log10IU/mL) Days Résistance aux traitements Antiviral Effect of TVR Monotherapy (Phase Ib)
  • 190. T54 R155 A156 V36 Amino Acid Substitutions Associated with Telaprevir Resistance Sarrazin et al., Gastroenterlogy 2007, 132: 1767-1777. 466 7811 3.5 9 12 71 36/156A156V/T36/155T54AR155K/TV36M/AWT Résistance aux traitements
  • 191. PROVE-2 Trial Weeks 480 2412 Placebo + Peg-IFN2a + Ribavirin (RBV) VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a + RBV VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a VX-950 750 mg q8h + Peg-IFN2a + RBV Peg-IFN2a + RBV Follow-up Follow-up Follow-up PR48 T12/PR24 T12/PR12 T12/P12 Follow-up 72 Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. Résistance aux traitements
  • 192. Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. 80 T12/PR12 69 T12/PR24 Wk4 T12/P12 (No RBV) 13 PR48 (Control) 50 0 20 40 60 80 100 PatientsWithUndetectable HCVRNA(%) Wk4 Wk4 Wk4Wk12 43 62 Wk12 80 Wk12 73 Wk12 46 SVR 36 SVR 60 SVR 69 SVR 11/82 39/7835/82 38/82 66/8248/78 28/78 66/82 49/82 56/81 59/81 56/81 PROVE-2: RVR, EVR, SVR Résistance aux traitements
  • 193. Relapse Rate Zeuzem et al., AASLD 2008, Abstract 243. T12/PR12 and T12/PR24 Combined 3 0 10 20 30 5/163 PatientsWithVirologic BreakthroughbyWeek12(%) 0 10 20 30 19/78 T12/P12 (No RBV) 24 19/78PatientsWithVirologic BreakthroughbyWeek12(%) Résistance aux traitements
  • 194. Patients Receiving Telaprevir and Peg-IFN 2a without RBV • Among the 6 patients who received the combination of telaprevir and Peg-IFN2a without RBV – 3 subtype 1a patients remained HCV RNA positive on treatment – 3 patients became HCV RNA undetectable upon therapy and relapsed after treatment • 2 infected with subtype 1b • 1 infected with subtype 1a Résistance aux traitements Chevaliez et al., IASL 2008.
  • 195. Patient 1: subtype 1a Patient 2: subtype 1a Patient 3: subtype 1a Patient 4: subtype 1b Patient 5: subtype 1a Patient 6: subtype 1b NON-RESPONDERS RELAPSERS Weeks WeeksTVR + Peg-IFN2a for 12 weeks SOC SOC Viral Kinetics Résistance aux traitements
  • 196. Weeks WT A B C D E F R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Chevaliez et al., IASL 2008. Résistance aux traitements
  • 197. Weeks WT A B C D E F A R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 198. Weeks WT A B C D E F A B R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 199. Weeks WT A B C D E F A B C D E R155K/N V36L/M WT A40T V36L/M + A40T R155K/N + A40T V36L/M + R155K/N V36L/M + R155K/N + A40T Patient 2 TVR-Peg-IFN Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 200. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 201. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 202. Weeks WT A B C D E R155K/E + T42S WT A BWT C D E Patient 3 TVR-Peg-IFN SOC Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 203. Pt 1 Pt 2 Pt 3 Pt 4 Pt 5 Pt 6 R26K V36L/M V36A T42S A40T A40T T54S T54S T54A Y56F T91A R155K R155K R155K/E R155T/A G174S Observed Amino Acid Changes Résistance aux traitements
  • 204. Location of the Amino Acid Changes Résistance aux traitements
  • 205. Location of the Amino Acid Changes Résistance aux traitements
  • 206. • Among the 9 patients who received the triple combination of telaprevir, Peg-IFN2a and RBV – 7 patients achieved an SVR – 1 patient relapsed – 1 subtype 1b patient stopped antiviral treatment at 6 weeks when HCV RNA was undetectable and relapsed thereafter Patients Receiving the Triple Combination Résistance aux traitements
  • 207. Weeks Patient 8 WT L14F WT L14F + V36C A B C A B CV36C * *TVR + Peg-IFN + RBV for 6 weeks Quasispecies Analysis Résistance aux traitements
  • 208. Cys36 D81 S139 H57 F43 C36 Val36 D81 S139 H57 F43 V36 3D Structure of the V36 Mutations Résistance aux traitements
  • 209. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
  • 210. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
  • 211. V36 Variants N (%) Fold- change in IC50 Relative replication capacity in Huh7.5 cells (%) WT 1.0 100 V36M 24 (10%) 7.7 77 ± 12 V36A 10 (4.1%) 8.2 104 ± 26 V36L 3 (1.2%) 2.5 ND V36G 1 (0.4%) 12.3 59 ± 8 V36C 1 (0.4%) 8.6 98 ± 9 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
  • 212. 100 5 10 50 100 FRET Technology Telaprevir (µM) WT V36C V36M V36L V36 Variants IC50 VX-950 (S.E.) (µM) Fold-change WT 0.6 (0,2) 1 V36L 1.3 (0.1) 2 V36C 2.4 (1.3) 4 V36M 3.05 (3.85) 5 V36 Variant Resistance Résistance aux traitements
  • 213. • Inhibiteurs de la maturation de la polyprotéine – Anti-protéase NS3 • Telaprevir (VX-950) • Boceprevir (SCH503039) • ITMN-191 • Inhibiteurs de la réplication Virale – Analogues nucléosidiques : R1626, R7128 – Analogues non nucléosidiques : GS9190 Résistance aux traitements Inhibiteurs en Développement
  • 214. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles (HCV371) B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine (A-848837) Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides (NM283, MK608) 4’ azido-cytidine (R1626) NNI site D (R200 hinge) Benzofurans (HCV086, HCV796) A B C D
  • 215. Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA A NNI site A (Thumb/fingertips) Indoles Benzimidazoles Pro 495, Pro 496, Val 499 NNI site B (Thumb) Phe derivatives Thiophene-COOH Dihydroxypirones Pyranoindoles (HCV371) Met 423 B NNI site C (Palm) Benzothiadiazine (A-848837) Acyl-pyrrolidine Proline sulfonamide Acrylic acid derivatives Asn 411, Met 414, Tyr 448 Active Site Allosteric GTP C 2’-methyl nucleosides (NM283, MK608) 4’ azido-cytidine (R1626) NNI site D (R200 hinge) Benzofurans (HCV086, HCV796) Cys 316, Val 201 A B C D
  • 216. Placebo 500 mg bid 1500 mg bid 3000 mg bid 4500 mg bid Traitement Suivi Jours 0 5 10 15 20 25 30 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 -2.6 log10 -3.7 log10 -1.2 log10 Réductiondel’ARNduVHC (LogUI/mL) R1626 : Phase Ib Résistance aux traitements
  • 217. R7128 : Phase II Jours 0 5 10 15 20 25 30 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 PegIFN + RBV + placebo PegIFN + RBV + R7128 500 mg bid PegIFN + RBV + R7128 1500 mg bid RéductionARNVHC(Log10) Lalezari et al., EASL 2008. Résistance aux traitements
  • 218. MK 7009 monotherapy 0 1 2 3 4 5 6 0 50 90 130 170 210 250 Day logIU/mL LOQ MK 7009 + MK-608 Chimp A Chimp B Chimp C SVR Olsen et al., APASL 2008 Combinaison de MK-7009 et MK-608 Résistance aux traitements
  • 219. Prévention de la Résistance • Réduire au maximum la réplication virale • Augmenter la barrière pharmacologique • Utiliser des molécules avec une barrière génétique élevée • Compliance Résistance aux traitements