Le Virus de l’Hépatite Delta:
    Virus et Marqueurs


          Dr. Elyanne Gault

     Laboratoire de Microbiologie
    ...
Le Virus de l’Hépatite Delta

Virus satellite du Virus de l’Hépatite B

Maladies graves du foie, aiguës ou chroniques

Dia...
Le virus de l’Hépatite Delta



                                      sHD                        LHD




                 ...
Le génome viral
                                                 sens génomique

               1-1679



                ...
ARN antigénomique

                                   sens antigénomique

1679-1




                      ORF

    1598  ...
Les protéines du VHD
                          DOMAINES


                     riche en aa riche en             site
     ...
Le cycle de réplication HDV
              AgHBs

                                 Hépatocyte

              R             ...
Le cycle de réplication HDV

Récepteur hépatocyte non identifié (idem HBV…)

Réplication via enzymes cellulaires (RNA pol)...
Diversité génétique
du virus de l’hépatite delta
Répartition géographique de l’infection chronique par HBV




                   Prévalence de l’AgHBs

                  ...
Prévalence de l’infection par HDV




       < 10%            10 à 20%          20 à 60%           > 60%
Très faible endém...
Variabilité génétique de HDV
                                      PERU
                                  VNZD8349
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Variabilité génétique de HDV
100% des isolats HDV-5, -6, -7 et -8 correspondent à des patients nés en Afrique
            ...
Variabilité génétique de HDV
                                         NORTH                                               ...
Epidémiologie de HDV en France (CNR)
            Janvier 2003 - Août 2006
                650 échantillons


             ...
Caractéristiques des patients suivis en France (2001-2006)
                                                          n=605...
Evolution de l’origine géographique des patients infectés par
                    HDV entre 2001 et 2006

Afrique :       ...
Evolution des génotypes HDV entre 2001 et 2006




        90%
        80%
        70%                                    ...
Epidémiologie de HDV en France

Circulation de virus d’origine africaine
      Emergence de nouveaux génotypes en France

...
Marqueurs diagnostics de l’infection
            par HDV
Diagnostic de l’Hépatite delta

             MARQUEURS DISPONIBLES



Sérologie
     Ag delta sérique (pas de valeur diagn...
Infection aiguë résolutive

      ARN Delta

                                   IgM anti-Delta
 Ag Delta
                 ...
Infection chronique

      ARN Delta



                                                    IgG Anti-HD
                  ...
Indications: dépistage
PORTEURS CHRONIQUES de l’ Ag HBs :
 PENSER AU DEPISTAGE DU DELTA
       (Ac anti-delta totaux)



 ...
Dépistage positif



ARN Delta



                                  IgG Anti-HD
                 IgM anti-Delta
Marqueurs du suivi thérapeutique
        Apport essentiel des techniques moléculaires
PCR Qualitative (à Avicenne) :
Techn...
Marqueurs du suivi thérapeutique

                Service d’Hépatologie
             Hôpital Général Hippokration
        ...
Protocoles thérapeutiques

             Service d’Hépatologie
                 Inserm U481
               Hôpital Beaujon
...
OBJECTIFS


- Evaluer l’efficacité et la tolérance d’un
traitement de 12 mois par Interferon-PEG α-2b
chez 14 patients por...
RESULTATS
                            n=14
                  12 mois PEG-Interferon α2b



             PCR HDV qualitativ...
Profils de réponse au traitement: REPONDEURS


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                                  Charge virale
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Profils de réponse au traitement:
                REPONDEURS - RECHUTEURS

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Profils de réponse au traitement: NON REPONDEURS

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Profils de réponse au traitement: REPONDEURS LENTS



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                                         HDV-RNA
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                                         HBV-DNA
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Protocoles thérapeutiques

        Etude multicentrique (Turquie)
               C. Yurdaydin

   Treatment of chronic del...
Protocoles thérapeutiques

                          Case report


      Resolution of chronic hepatitis delta after 1 yea...
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Gault Hdv Virus Et Marqueurs

  1. 1. Le Virus de l’Hépatite Delta: Virus et Marqueurs Dr. Elyanne Gault Laboratoire de Microbiologie Hôpital Ambroise Paré Boulogne-Billancourt elyanne.gault@apr.aphp.fr
  2. 2. Le Virus de l’Hépatite Delta Virus satellite du Virus de l’Hépatite B Maladies graves du foie, aiguës ou chroniques Diagnostic difficile Traitement par l’Interféron-α partiellement efficace
  3. 3. Le virus de l’Hépatite Delta sHD LHD Ag HBs HDV (Virus de l’hépatite B) Virus défectif Satellite d’HBV (Bonino, J Virol, 1986; Wang, Nature, 1986; Ryu, J Virol 1993)
  4. 4. Le génome viral sens génomique 1-1679 Homologie 70% ARN 1679 nt circulaire - polarité négative
  5. 5. ARN antigénomique sens antigénomique 1679-1 ORF 1598 1012 ARNm sHD ARNm LHD
  6. 6. Les protéines du VHD DOMAINES riche en aa riche en site torsadé basiques arginines d’isoprénylation LHD 30 51 66 88 97 146 195 214 aa sHD site de signal de site de signal polymérisation localisation fixation d’assemblage nucléaire à l’ARN FONCTIONS
  7. 7. Le cycle de réplication HDV AgHBs Hépatocyte R AgHBs GO LG I/R E Transcription CYTOPLASME NOYAU Réplication ADN ccc HBV
  8. 8. Le cycle de réplication HDV Récepteur hépatocyte non identifié (idem HBV…) Réplication via enzymes cellulaires (RNA pol) Pas d’action des inhibiteurs d’enzymes virales Inhibition de la réplication de HBV (LHD) Pas d’action des inhibiteurs du HBV (Lamivudine) Nécessité d’un niveau suffisant d’AgHBs Rôle potentiel des inhibiteurs de l’ADN ccc de HBV Etape finale clé (isoprénylation, interaction Ag HBs) Rôle potentiel des inhibiteurs de l’isoprénylation
  9. 9. Diversité génétique du virus de l’hépatite delta
  10. 10. Répartition géographique de l’infection chronique par HBV Prévalence de l’AgHBs < 2% - faible 2 à 7% - moyenne > 8% - forte
  11. 11. Prévalence de l’infection par HDV < 10% 10 à 20% 20 à 60% > 60% Très faible endémie Faible endémie Endémie Moyenne Forte endémie
  12. 12. Variabilité génétique de HDV PERU VNZD8349 VNZD8624 HDV-3 HDV-4 L215 VNZD8375 MIYAKO HDV-2 SOMALIA ETHIOPIA JAPAN TAIWLEE TW2476 LEBANON AF209859 PT26 NAURU TAIWU YAKOUSK6 dFr2139 TK6HDV 99 PT62 SOMALIA 100 100 100 TK5HDV US2 HDV-6 100 100 100 100 100 HDV-1 CAGLIARI ETHIOPIA LEBANON DFR48 100 HDViran NAURUTK6HDV 100 ITALY HDV-1 100 TK5HDV US2 W5 100 100 CAGLIARI W15 100 W15 W5 US1 DFR910 95 100 ITALY TK7HDV 100 100 HDViran 89 US1 TK3HDV HDV-5 69 100 99 90 TK7HDV TAIWCHAO TK3HDV DFR47 95 TAIWCHAO TWD2667 100 TWD2667 CHINA 100 100 CHINA DFR45 DFR73 100 100 dFr1986 100 dFr2158 dFr2005 100 dFR2072 DFR644 dFr2005 DFR73 DFR644 DFR47 dFR2072 DFR910 dFr2158 DFR48 HDV-8 dFr1986 DFR45 dFr2139 TAIWU HDV-7 AF209859 MIYAKO HDV-2b L215 JAPAN HDV-3 PERU TAIWLEE VNZD8349 TW2476 PT26 HDV-2a Maximum de parcimonie VNZD8375 VNZD8624 PT62 YAKOUSK6 Distance : Kimura-2 0.1
  13. 13. Variabilité génétique de HDV 100% des isolats HDV-5, -6, -7 et -8 correspondent à des patients nés en Afrique NORTH MEDI TERR ANEA IA ATLANTIC N SE A TUNIS OCEAN CO OC OR M A R A H SA ALGERIA N LIBYA R EGYPT TE ES W MALI dFr2072 MAURITANIA dFr910 dFr489 dFr1972 dFr2180 NIGER F OF GUL EN dFr69 SENEGAL AD GAMBIA SO A FA CHAD SUDAN dFr2005GUINEA- GUINEA BISSAU BU RK IN BENIN DJIBOUTI dFr2401 TOGO A dFr47SIERRA dFr48 AN IVORY NIGERIA H LEONE ETHIOPIA G COAST dFr2317 LIBERIA CENTRAL AFRICAN IA REPUBLIC dFr2020 dFr73 dFr48 CAMEROON L A dFr2502 dFr2055 dFr1953 M dFr45 EQU. É dFr2204 UGANDA M O TO O GUINEA dFr644 S dFr2301 dFr1986 GABON KENYA NG O SÃ dFr2154 O dFr2066 RWANDA C ZAIRE INDIAN dFr1843 BURUNDI dFr2458 OCEAN TANZANIA S RO MO TT E CO AO SOUTH M ANGOLA A BI MA ATLANTIC dFr1594 M L ZA AW OCEAN UE R I CA Q BI AS M ZIMBABWE ZA AG NAMIBIA O M AD BOTSWANA M CA HDV-5 RI SWAZILAND AF H HDV-6 UT LESOTHO SO HDV-7 MAURITIUS HDV-8 RÉUNION
  14. 14. Variabilité génétique de HDV NORTH MEDI TERR ANEA IA ATLANTIC N SE A TUNIS OCEAN O CC ORO M A R A H SA ALGERIA N LIBYA R EGYPT TE ES W MALI MAURITANIA NIGER F OF GUL EN SENEGAL AD GAMBIA SO FA CHAD SUDAN GUINEA- NA KI BISSAU GUINEA B UR BENIN DJIBOUTI TOGO A AN SIERRA IVORY NIGERIA H LEONE ETHIOPIA G COAST LIBERIA CENTRAL AFRICAN IA REPUBLIC CAMEROON L A M EQU. UGANDA O O GUINEA 16% femmes enceintes AgHBs+ S KENYA NG GABON O sont infectées par HDV RWANDA C ZAIRE INDIAN BURUNDI HDV-8 plus fréquent que HDV-1 OCEAN TANZANIA S RO MO TT E CO AO SOUTH M ANGOLA A BI MA ATLANTIC M L ZA AW OCEAN UE R I CA Q BI AS M ZIMBABWE ZA AG NAMIBIA O M AD BOTSWANA M CA RI SWAZILAND AF H UT LESOTHO SO MAURITIUS RÉUNION Makuwa et al, J Clin Microbiol 2008
  15. 15. Epidémiologie de HDV en France (CNR) Janvier 2003 - Août 2006 650 échantillons HDV-7 (3.5%) HDV-6 (2%) HDV-8 (0.5%) HDV-5 (15.5%) HDV-1 (78.5%)
  16. 16. Caractéristiques des patients suivis en France (2001-2006) n=605 - Homme (70,6%) - Age médian: 40 ans (14ans à 83ans) - Pays de naissance: Albanie (n=1) Bulgarie (n=1) Georgie (n=8) Grèce (n=1) Espagne (n=7) Kosovo (n=1) France (n=146) Moldavie (n=4) Italie (n=21) Roumanie (n=18) Portugal (n=6) Russie (n=7) Suisse (n=2) Serbie (n=2) Mongolie (n=3) Turquie (n=16) Vietnam (n=9) Afrique du Sud (n=1) Algérie (n=7) Angola (n=1) Bénin (n=1) Burkina Faso (n=3) 9,8% Europe de l’Est (n=59) Cameroun (n=74) 1,9% Asie (n=12) Cap Vert (n=1) Comores (n=1) 30,1% Europe de l’Ouest (n=182) Congo Brazzaville (n=10) Cote d’Ivoire (n=46) Égypte (n=8) Gabon (n=6) Gambie (n=1) Ghana (n=2) Guinée / Guinée Bissau (n=17) Madagascar (n=4) 54,2% Afrique (n=328) Mali (n=45) Maroc (n=9) Mauritanie (n=14) Mayotte (n=3) Niger (n=1) Nigeria (n=2) République de Centre Afrique (n=32) République Démocratique du Congo (n=4) Sénégal (n=18) Antilles (n=2) Sierra Léone (n=1) Colombie(n=1) Tchad (n=5) Australie (n=1) 4% Autres (n=24) Togo (n=4) Inconnue (n=20) Tunisie (n=7)
  17. 17. Evolution de l’origine géographique des patients infectés par HDV entre 2001 et 2006 Afrique : Europe de l’Ouest : Afrique du Sud France Algérie Italie Angola 80% Espagne Bénin Suisse Burkina Faso 70% Portugal Cameroun Cap Vert 60% Comores 50% Congo (Brazzaville) Europe de l’Est : Cote d’Ivoire 40% Roumanie Égypte Russie Gabon 30% Moldavie Gambie Turquie Ghana 20% Serbie Guinée Bulgarie Madagascar 10% Georgie Mali Kosovo Maroc 2001 2002 2003 2004 2005 2006 Mauritanie n=127 n=101 n=43 n=65 n=171 n=110 Mayotte Niger Asie : Nigeria Mongolie Répub.Centrafrique Vietnam Répub. D. Congo Sénégal Tchad Inconnu Tunisie
  18. 18. Evolution des génotypes HDV entre 2001 et 2006 90% 80% 70% HDV-1 60% 50% 40% 30% HDV-5 20% 10% HDV-6, -7, -8 2001 2002 2003 2004 2005 2006 n=127 n=101 n=43 n=65 n=171 n=110
  19. 19. Epidémiologie de HDV en France Circulation de virus d’origine africaine Emergence de nouveaux génotypes en France Pouvoir pathogène des variants par rapport aux virus HDV-1 Diagnostic moléculaire des variants Association des variants HDV avec certains génotypes HBV (co-spéciations?) Origine géographique de HDV?
  20. 20. Marqueurs diagnostics de l’infection par HDV
  21. 21. Diagnostic de l’Hépatite delta MARQUEURS DISPONIBLES Sérologie Ag delta sérique (pas de valeur diagnostique) Ac anti-delta totaux (dépistage) IgM anti-delta (infection aiguë, réplication) Marqueurs moléculaires (techniques « maison ») Recherche qualitative de l’ARN delta (sérum) Quantification de l’ARN delta (sérum)
  22. 22. Infection aiguë résolutive ARN Delta IgM anti-Delta Ag Delta IgG Anti-HD Primo-infection Hépatite aiguë
  23. 23. Infection chronique ARN Delta IgG Anti-HD IgM anti-Delta Primo-infection Hépatite aiguë Hépatite chronique
  24. 24. Indications: dépistage PORTEURS CHRONIQUES de l’ Ag HBs : PENSER AU DEPISTAGE DU DELTA (Ac anti-delta totaux) IgG Anti-HD Hépatite chronique
  25. 25. Dépistage positif ARN Delta IgG Anti-HD IgM anti-Delta
  26. 26. Marqueurs du suivi thérapeutique Apport essentiel des techniques moléculaires PCR Qualitative (à Avicenne) : Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connus Seuil de sensibilité 100 copies/mL PCR Quantitative: Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connus Seuil de sensibilité 100 copies/mL - Linéarité: 103 à 109 copies/mL Intérêt secondaire des IgM Moins sensible que la PCR (faux négatifs) et moins spécifique de la réplication virale (faux positifs) Kits ELISA commerciaux Recherche de l’ARN viral intra-hépatique Suivi quantitatif de l’Ag HBs Zachou et al, Liver Int, 2009; Manesis et al, Antiviral Therapy, 2007
  27. 27. Marqueurs du suivi thérapeutique Service d’Hépatologie Hôpital Général Hippokration Athènes E. Manesis Quantitative analysis of HDV-RNA and HBsAg serum levels in chronic delta hepatitis improves treatment monitoring E. Manesis, M. Schina, F. Le Gal, O. Agelopoulou,C. Papaioannou, C. Kalligeros, V. Arseniou, S.Manolakopoulos, E. Hadziyannis, E. Gault, J. Koskinas, G. Papatheodoridis and A. Archimandritis Antiviral Therapy, 2007, 12: 73-82
  28. 28. Protocoles thérapeutiques Service d’Hépatologie Inserm U481 Hôpital Beaujon P. Marcellin, C. Castelnau Efficacy of Peginterferon alpha-2b in Chronic Hepatitis delta: Relevance of Quantitative RT-PCR for Follow-Up C. Castelnau, F. Le Gal, M.P. Ripault, E. Gordien, M. Martinot, N. Boyer, B. Pham , P. Bedossa, P. Dény, P. Marcellin, E. Gault Hepatology, 2006, 4: 728-735
  29. 29. OBJECTIFS - Evaluer l’efficacité et la tolérance d’un traitement de 12 mois par Interferon-PEG α-2b chez 14 patients porteurs d’une hépatite chronique B-D. - Evaluer l’intérêt de la quantification de l’ARN- VHD dans le suivi et la réponse virologique
  30. 30. RESULTATS n=14 12 mois PEG-Interferon α2b PCR HDV qualitative et quantitative - Avant mise sous traitement -Au cours du traitement - Au cours du suivi post-thérapeutique 43% répondeurs 43% non répondeurs 14% répondeurs- rechuteurs
  31. 31. Profils de réponse au traitement: REPONDEURS 8 7 Charge virale 6 (log10 copies/mL sérum) Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL 5 4 3 2 5 ALT (xN) 4 3 2 1 T0 M6 M12 M18 M24 M41
  32. 32. Profils de réponse au traitement: REPONDEURS - RECHUTEURS 8 7 6 Charge virale 5 (log10 copies/mL sérum) Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL 4 3 2 ARN intra-hépatique? 22 ALT (xN) 4 3 2 1 T0 M6 M12 M18 M24 M30
  33. 33. Profils de réponse au traitement: NON REPONDEURS 8 7 6 5 Charge virale (log10 copies/mL sérum) 4 Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL 3 2 5 4 ALT (xN) 3 2 1 T0 M6 M12 M18 M24 M30
  34. 34. Profils de réponse au traitement: REPONDEURS LENTS 8 7 6 Charge virale 5 (log10 copies/mL sérum) Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL 4 3 2 ARN intra-hépatique? 8 ALT (xN) 4 3 2 1 T0 M6 M12 M18 M24 M30
  35. 35. 9 7 6 HDV-RNA 5 4 3 HBV-DNA 2 22 4 3 2 ALAT 1 PEG-IFN Lamivudine T0 M6 M12 M18 M24 M30
  36. 36. Protocoles thérapeutiques Etude multicentrique (Turquie) C. Yurdaydin Treatment of chronic delta hepatitis with lamivudine vs lamivudine+interferon vs interferon C. Yurdaydin, et al J Viral Hep, 2008, 15: 314-321 39 patients (17 LAM, 14 LAM-IFN, 8 IFN) Suivi par PCR semi-quantitative (seuil de détection 100000copies/mL) Aucun intérêt à utiliser la lamivudine, même en association avec IFN
  37. 37. Protocoles thérapeutiques Case report Resolution of chronic hepatitis delta after 1 year of combined therapy with PEG-IFN, tenofovir and emtricitabine Mansour W, Ducancelle A, Le Gal F, Le Guillou-Guillemette H, Abgueguen P, Pivert A, Calès P, Gordien E, Lunel F J Clin Virol 2009 Homme 47 ans Dagestan CV HBV >9 log UI/mL CV HDV 5.6 log copies/mL Association PEG-IFN + tenofovir + emcitrabine (Viread) Clairance virale + séroconversion HBs après 10 mois de traitement

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