3. O objectivo desta actividade laboratorial é conseguir extrair DNA presente no
núcleo das células, neste caso nas células das framboesas, de modo a que este possa
ser visto a olho nu.
Material:
Framboesas;
Sal de cozinha;
Água destilada;
Álcool comercial a 96º;
Pacote de 250 mL de
ananás (foi utilizada um
lata de sumol);
Detergente líquido para
loiça;
Gobelets de 250 mL;
Provetas de 10, 20, 50 e
100 mL;
Gaze;
Funil;
Caixa de Petri;
Banho-maria;
Espátulas;
Vidro de relógio;
Vareta de vidro;
Pipetas de 5 e 20 mL;
Frigorífico com
congelador;
Bisturi;
Tubo de ensaio grande;
Suporte de tubos de
ensaio.
Procedimento:
1. Coloque o álcool no frigorífico para que arrefeça;
2. Pese 50g de framboesas numa caixa de Petri;
3. Com uma espátula macere as framboesas;
4. Pese 3g de sal num vidro de relógio;
5. Num gobelé de 250mL, coloque 90mL de água destilada aquecida a 60ºC;
6. Dissolva o sal na água e adicione 10 mL de detergente, mexendo lentamente
durante alguns minutos;
7. Coloque a gaze num funil e filtre o preparado obtido para um gobelé;
8. Ao filtrado obtido adicione 25 mL de sumo de ananás;
9. Meça 20mL do preparado anterior para um tubo de ensaio;
10. À solução filtrada adicione, muito lentamente, 20 mL de álcool frio, com o tubo
de ensaio ligeiramente inclinado. Deve distinguir-se uma fase alcoólica
(sobrenadante) e uma fase aquosa (inferior);
11. Deixe repousar 5inutos;
12. Começará a ver um novelo branco (neste caso vermelho porque foram
utilizadas framboesas) a formar-se no sobrenadante alcoólico) - É o DNA.
4. A molécula do DNA (ácido desoxirribonucleico), contém toda a informação da
actividade celular e permite obter proteínas (síntese proteica).
Esta molécula é muito grande e encontra-se dentro do núcleo, que é relativamente
pequeno (por exemplo, estima-se que o DNA humano meça cerca de 2 metros,
enquanto o núcleo das respectivas células mede 0,5 μm de diâmetro).
O DNA das células eucarióticas encontra-se no núcleo mas também no interior das
mitocôndrias e dos cloroplastos, enquanto que nas células procarióticas encontra-se
espalhado pelo citoplasma.
7. Para que fosse possível visualizar o DNA foi necessário romper a membrana celular e
membrana nuclear das células das framboesas.
Para que tal acontecesse as framboesas foram maceradas (processo físico) e foi
adicionado o detergente de modo a destruir a bicamada fosfolipídica das membranas
celulares (processo químico).
A adição de sal (NaCl) serviu para neutralizar a carga negativa do DNA devido à carga
positiva do ião (Na+).
O DNA não se dissolve no álcool etílico, provocando a sua precipitação e consequente
visualização.
8. Na primeira tentativa, a experiência não correu bem e as frutas foram
desperdiçadas.
No entanto, na segunda tentativa tudo correu conforme o planeado e foi
possível extrair o DNA e visualiza-lo no tubo de ensaio.