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MICROBIOLOGIA
a



              AGROINDUSTRIAL II




                      Practica 3:
    Preparacion y Diluciones de las Muestras de Alimentos
                           Solidos
    Presentado Por:      Ricardo Valenzuela Antezana
                        COD: 093336




                                          Docente: M.Sc. Victor
                                          Choquehuanca Caceres
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO                          E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL


I) INTRODUCCION:

  La presencia de microorganismos en los alimentos no significa necesariamente un peligro para el
  consumidor o una calidad inferior de estos productos. En realidad, si se exceptúa el reducido número de
  productos esterilizados, cada bocado de alimento contiene levaduras inocuas, mohos, bacterias y todos
  microorganismos. La mayor parte de los alimentos se convierten en potencialmente peligrosos para el
  consumidor sólo después de que han sido violados los principios de higiene, limpieza y desinfección. Silos
  alimentos han estado sometidos a condiciones que pudieran haber permitido la llegada a los mismos y/o
  la multiplicación de agentes infecciosos o toxigénicos, pueden constituirse en vehículo de transmisión de
  enfermedades., tales como la salmonelosis ola intoxicación estafilocócica. La puesta en evidencia de
  estos riesgos se basa en el examen de muestras de alimentos en busca de los propios agentes causales o
  de indicadores de una contaminación no admisible.

             El examen microbiológico rutinario de los alimentos para detectar en ellos toda una serie
  numerosa de microorganismos patógenos y de sus toxinas no es practicable en la mayoría de los
  laboratorios. Sin embargo, es imperativo realizar los análisis microbiológicos de rutina correspondientes
  siempre que la información epidemiológica o de otro tipo de que se disponga sugiera o haga pensar en la
  presencia de un agente patógeno específico en un determinado alimento. El microbiólogo de los
  alimentos no dispone aún de técnicas fiables que le permitan poner de manifiesto la presencia en los
  alimentos de ciertos agentes de enfermedades transmitidas por esta vía, como ocurre con el virus de la
  hepatitis infecciosa. Para otras infecciones contraídas por el consumo de alimentos o por el agua de
  bebida, tales como la shigelosis, los métodos de laboratorio no ofrecen suficiente confianza,
  especialmente cuando los agentes patógenos están en número escaso o se encuentran distribuidos de
  modo desigual en alimentos que, por otra parte, contienen gran número de microorganismos saprofitos.
  Aun en los casos en los que se cuenta con métodos sensibles, algunos laboratorios pueden no disponer
  de las facilidades y capacidades técnicas precisas para llevar a cabo estas pruebas. Tales dificultades han
  determinado la amplia utilización de grupos (o especies) de microorganismos, cuya enumeración o
  recuento se realiza con mayor facilidad y cuya presencia en los alimentos (en determinado número)
  indica que estos productos estuvieron expuestos a condiciones que pudieran haber introducido
  organismos peligrosos y/o permitido la multiplicación de especies infecciosas o toxigénicos.

   Los grupos o especies utilizadas con estos fines se denominan microorganismos indicadores , y sirven
  para evaluar tanto la seguridad que ofrecen los alimentos en cuanto a microorganismos y sus toxinas,
  como su calidad microbiológica.
             Los microorganismos indicadores se han utilizado con varios fines. Nos ocuparemos
  brevemente de las bases en las que se fundamenta su uso y de la interpretación de su significado en los
  diversos alimentos. En primer lugar, se discuten los indicadores de uso más universal, pero el orden en
  que son presentados no refleja necesariamente su valor relativo.
  El principal objetivo de la utilización de bacterias como indicadores de prácticas no sanitarias es revelar
  defectos de tratamiento que llevan consigo un peligro potencial, peligro que no está necesariamente
  presente en la muestra particular examinada, pero que es probable pueda encontrarse en muestras
  paralelas.

  BACTERIAS ENTÉRICAS INDICADORAS.
  Escherichia coli, los coliformes (grupo coliaerogenes) y las Enterobacteriaceae Escherichia coli es un
  germen cuyo hábitat natural es el tracto entérico del hombre y de los animales. Por ello, la presencia de
  este microorganismo en un alimento indica generalmente una contaminación directa o indirecta de
  origen fecal. E. coli es el indicador clásico de la posible presencia de patógenos entéricos en el agua, en
  los moluscos, en los productos lácteos y en otros alimentos. La enumeración de E. coli en el agua
  constituye una medida de la cuantía de la polución, mientras que los niveles detectados en los alimentos
  pueden estar influenciados por otros factores, tales como la multiplicación del microorganismo, su
  muerte o inactivación o su adherencia a las partículas del alimento. Con todo, cifras sustanciales de E.




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  coli en un alimento sugieren una falta general de limpieza en el manejo del mismo y un almacenamiento
  inadecuado.
            La presencia de E. coli en un alimento no constituye una connotación directa de la presencia de
  un patógeno, sino que implica únicamente un cierto riesgo de que pudiera estar presente. En otras
  palabras, la presencia de E. coli en los alimentos no guarda siempre una estrecha correlación con la
  presencia de salmonellas o de otros microorganismos patógenos.

             El término coliformes fecales ha surgido como un intento de encontrar métodos rápidos y
  fiables para establecer la presencia de E. coli y variantes estrechamente relacionados sin necesidad de
  purificar los cultivos obtenidos en las pruebas para coliformes o de aplicar las relativamente costosas
  pruebas confirmatorias. Los “coliformes fecales” comprenden un grupo de microorganismos
  seleccionados por incubación de los inóculos procedentes de un caldo de enriquecimiento de coliformes
  a temperaturas superiores a las normales (44-45,5ºC, dependiendo del método). Tales cultivos de
  enriquecimiento contienen por lo general un alto porcentaje de E.coli tipos I y II y son, por ello, muy
  indicativos de una probable contaminación de origen fecal del alimento.

             En los alimentos que han recibido un tratamiento para garantizar su sanidad, la presencia de
  niveles considerables de Enterobacteriaceae o de coliformes indica:
             (1)tratamiento inadecuado y/o contaminación posterior al tratamiento; más frecuentemente
  partir de materias primas, equipos sucios o manejo no higiénico, (2) multiplicación microbiana que
  pudiera haber permitido el crecimiento de toda la serie de microorganismos patógenos y toxigénicos.
  Con todo lo valiosa que esta información pueda ser, nunca deberá interpretarse como indicación cierta
  de que ha tenido lugar una contaminación de origen fecal de tales alimentos.
             Una pregunta siempre apremiante es la de si un resultado negativo en cualquiera de las
  pruebas mencionadas asegura la ausencia de patógenos entéricos. Ello depende naturalmente de
  parámetros tales como: (1) el número y la magnitud de las alícuotas examinadas, (2) la sensibilidad del
  método y (3) el número de Enterobacteriaceae, coliformes o E. coli y de microorganismos patógenos. Se
  han publicado varios trabajos sobre la relación entre la presencia de Enterobacteriaceae en alimentos y
  el riesgo de la existencia simultánea de salmonellas.

            Esta elevada resistencia es, al mismo tiempo, la razón de la falta de validez de estos cocos
  como indicadores generales de contaminación fecal. Los enterococos pueden resistir de tal modo
  condiciones adversas que su presencia guarda escasa relación con el peligro de la existencia simultánea
  de microorganismos patógenos, tales como Salmonella y Shigella, mucho menos resistentes, gérmenes
  estos últimos que aunque hubieran llegado a los alimentos o a las superficies juntamente con los
  enterococos, probablemente no habrían sobrevivido.
            Pequeñas números de estreptococos fecales en los alimentos carecen de significado, excepto
  cuando se trata de productos industrializados que han sido sometidos a un riguroso tratamiento
  bactericida (por ejemplo, alimentos precocinados congelados).

  Otros microorganismos indicadores
            Entre otros microorganismos que se usan a veces como indicadores podemos mencionar: (1)
  Staphylococcus aureus, para la contaminación procedente de vías orales, nasales, piel y otros orígenes,
  (2) bacterias mesófilas esporuladas como indicadores de un tratamientos térmico insuficiente de los
  alimentos enlatados o de un almacenamientos prolongando sin refrigeración de los alimentos cocinados,
  tales como la carne y el arroz, y (3) los enterovirus formadores de placas en cultivo de tejidos como
  indicadores de otros virus cuya detección en los alimentos es más difícil si no imposible. Los indicadores
  mencionados no se utilizan de modo general, posiblemente porque cada uno de ellos tiene
  determinados inconvenientes

           1. Estafilococos. La presencia de Staphylococcus aureus en un alimento se interpreta, por lo
  genera, como indicativo de contaminación a partir de la piel, la boca y las fosas nasales de los
  manipuladores de alimentos, si bien el material y equipo sucios y las materias primas de origen animal



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  pueden ser asimismo la fuente de la contaminación . Cuando se encuentra un gran número de
  estafilococos en un alimento, ello significa, por lo general, que las prácticas de limpieza y desinfección y
  el control de la temperatura no han sido, en algún lugar, adecuados. Ingran (1960) concedía significado a
  la presencia de gran número de Staphylcoccus, por ejemplo en carnes curadas, debido a que, cuando los
  recuentos de este grupo de gérmenes son altos, se han dado circunstancias determinantes de que las
  cepas de S. aureus enterotoxigénicas pudieran encontrarse en número peligroso.

            2. Bacterias mesófilas esporuladas. La presencia de bacilos mesófilos en alimentos enlatados
  indica que o bien el envase no se cerró herméticamente o que el tratamientos térmico fue insuficiente
  para destruir los esporos. Existe la posibilidad de que en tales circunstancias pudiera estar presente
  también Clostridium botulinum. Si fuera así, pudiera haber tenido lugar el crecimientos del germen y la
  producción de toxina en los alimentos enlatados de acidez escasa (pH 4,6 o más elevado), tales como
  sopa de pollo y champiñones.
            Cuando se encuentran bacterias esporuladas en los alimentos refrigerados y en los
  deshidratados en número anormalmente elevado, o en proporción excesivamente grande de la
  población total, existe el riesgo de que entre ellas puedan encontrarse C. perfringens, C. botulinum o
  Bacillus cereus. Estos microorganismos representan un peligro ya en el alimento tal como ha sido
  fabricado o en sus usos futuros.

            3. Virus. La utilidad de los virus como indicadores de la contaminación de los alimentos es
  problemática, debido a las dificultades técnicas en la demostración de su presencia. El diagnóstico de las
  enfermedades víricas transmitidas por los alimentos, tales como la hepatitis infecciosa y la poliomielitis
  se basa, por lo general en las investigaciones epidemiológicas “a posteriori” y no en el análisis de
  laboratorio del alimentos implicado. No obstante, Kostenbader y Cliver (1973) han propuesto pruebas
  para enterovirus formadores de placas. Parecería que tales pruebas son especialmente útiles en
  situaciones en las que persisten los virus contaminantes aún cuando las pruebas para los indicadores
  bacterianos comunes den resultados negativos.

            LEVADURAS Y MOHOS
            Las levaduras y los mohos crecen más lentamente que las bacterias en los alimentos no ácidos
  que conservan humedad y por ello pocas veces determinan problemas en tales alimentos. Sin embargo,
  en los alimentos ácidos y en los de baja actividad de agua, crecen con mayor rapidez que las bacterias,
  determinando por ello importantes pérdidas por alteración de frutas frescas y jugos, vegetales, quesos,
  productos derivados de los cereales, alimentos salazonados y encurtidos, así como en los alimentos
  congelados y en los deshidratados, cuyo almacenamiento se realiza en condiciones inadecuadas.
  Además, existe el peligro potencial de producción de micotoxinas por parte delos mohos. Para eliminar o
  reducir tales problemas, los manipuladores de alimentos susceptibles de enmohecimiento deberán: (1)
  reducir la carga de esporas, observando unas buenas prácticas higiénicas, (2) reducir los tiempos de
  almacenamiento y vender los alimentos lo antes posible, (3) almacenar los alimentos congelados a
  temperaturas inferiores a los 5 ºC, (4) eliminar o reducir el contacto con el aire (mediante envasado o
  por otros procedimientos), (5) calentar el alimento en su envase final para destruir las células vegetativas
  y las esporas, (6) añadir ácidos para retardar el crecimiento o (7) añadir conservadores químicos, tales
  como los sorbatos y benzoatos.

  Ni el hombre ni los animales deben consumir alimentos visiblemente enmohecidos, excepto, por
  supuesto, los quesos tales como Roquefort o Camembert y ciertos salamis que deben sus sabores
  especiales a algunos mohos.
  Las levaduras crecen más rápidamente que los mohos, pero con frecuencia juntos a ellos. Mientras que
  los mohos son casi siempre aerobios estrictos, las levaduras generalmente crecen tanto en presencia
  como en ausencia de oxígeno, aunque con mayor rapidez y hasta poblaciones más elevadas en presencia
  de este gas. La fermentación es completamente un proceso anaeróbico.




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   En los alimentos frescos y en los congelados, pueden encontrarse números reducidos de esporas y
   células vegetativas de levaduras, pero su presencia en estos alimentos es de escaso significado. Sólo
   cuando el alimento contiene cifras elevadas de levaduras o mohos visibles el consumidor se dará cuenta
   de la alteración. La alteración por levaduras no constituye un peligro para la salud.

    II)       OBJETIVOS:

    ·      Conocer la presencia de aerobios mesofilos, coliformes, S. aureus, E. coli y
           Salmonella sp. en una muestra solida (arroz con pollo).

    ·      Comparar con la norma del MINSA y determinar así, si el alimento es apto o no
           para el consumo humano.


    III)      FUNDAMENTO
              El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente
              actúa como vehículo de transmisión de microorganismos entéricos. La materia fecal
              puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma más
              común el ingreso a través de los sistemas de pozo ciego a napas profundas.


El Código Alimentario Argentino (CAA), la Organización Mundial de la Salud
(OMS) en sus Guías para la calidad del agua potable, la Directiva 98/83/CE1 y otras
normas internacionales, establecen o recomiendan requisitos de calidad para el agua
de consumo humano. En general, la normativa establece que el agua es apta
bacteriológicamente para consumo si se encuentra exenta de microorganismos
patógenos de origen entérico y parasitario intestinal. Ellos transmiten enfermedades
tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis (Shigella), colera (Vibrio Cholerae),
amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones gastrointestinales (Aeromonas
mesófilas, Helicobacter pylori, Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia),
cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis (Schistosoma), desórdenes
hepáticos (virus de hepatitis), etc.
La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida es un riesgo
que se incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas
sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser
causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la
calidad microbiológica de muestras de diversos orígenes.
Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hídricos, potencialmente
riesgosos para la salud, resultan difíciles de llevar a cabo debido a la gran variedad
de bacterias patógenas cultivables, a la complejidad de los ensayos de aislamientos
y a la presencia en baja concentración de varias especies altamente agresivas, sin que el
orden detallado indique prioridad. Por esta razón, los análisis bacteriológicos apuntan a la
búsqueda de microorganismos indicadores de contaminación fecal y se centralizan en la
cuantificación de coliformes. Este grupo está integrado por enterobacterias, siendo
             Escherichia coli el indicador universal de contaminación fecal.


3. Microorganismos Presentes en Aguas Naturales
La variabilidad microbiológica de las aguas naturales abarca numerosos
organismos e incluye células eucariotas (algas, protozoarios y hongos), células



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procariotas (bacterias) y virus (microorganismos con capacidad de síntesis nula).
Algas
Estos microorganismos contienen necesariamente clorofila para la actividad
fotosintética, sin embargo el color verde puede estar enmascarado por otros pigmentos
(carotenoides) presentes. Son aerobias, y en ambientes con poco oxígeno, mueren,
flotan y se descomponen produciendo mal olor. Podemos encontrar las siguientes
familias de algas:
 Chlorophyta o algas verdes que huelen a pescado o hierba.
 Cyanophyta o algas verdes azuladas con olores desagradables que pueden
producir sustancias tóxicas.
 Chrysophita son de color amarillo verdoso y a menudo generan olores
             aromáticos (geranios) o huelen a pescado, por ej. Aulococeira y Cyclotella.

Protozoarios
Frecuentemente en el agua contaminada con heces se encuentran dos
protozoarios parásitos con incidencia en salud humana, responsables de epidemias:
 Giardia lamblia: es flagelado con un tamaño de 15 ìm y se transmite al
hombre a través de agua contaminada con materia fecal. Las células del protozoario
producen un estado de reposo denominado quiste. Los quistes al ser ingeridos germinan
y causan giardiasis, enfermedad caracterizada por diarreas, calambres intestinales,
flatulencia, nauseas, síntomas que pueden ser agudos o crónicos. La giardisis es una
de las enfermedades parasitarias de origen hídrico más comunes.
 Cryptosporidium parvum: es un parásito del hombre y animales de tamaño
muy pequeño (2-5ìm), redondeado que crece en el interior de las células del epitelio
mucoso de intestino y estómago. Los quistes infecciosos producidos por este protozoario
poseen una pared muy gruesa. Los quistes de Cryptosporidium son mucho más
resistentes a la cloración que los de Giardia. La criptoposiosis es una infección que
se caracteriza por dolores estomacales, nauseas, diarrea y deshidratación.
Virus
El 87% de las enfermedades virales transmitidas por el agua son causadas por
el virus de la hepatitis (adenovirus y rotavirus).
Bacterias
Más del 80% de las bacterias descriptas en el Manual de Bergey pueden aislarse
del agua. Teniendo en cuenta la respuesta a la tinción de Gram, a continuación se
mencionan y describen algunas de las más importantes.
Bacterias Gram negativas
Entre las especies que se han aislado de aguas, podemos mencionar a las
pertenecientes a los géneros Pseudomonas, Flavobacterium, Gallionella,
Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Achromobacter, Alcaligenes, Bordetella,
Neisseria, Moraxella y Acinetobacter.
Las pseudomonas son las más comunes en napas freáticas debido a su versatilidad
respecto a fuentes de carbono, y a sus bajos requerimientos nutricionales. Ellas son
bacilos psicrófilos, presentan flagelos perítricos, producen pigmentos (verde, azul verdoso,
rojo, marrón) y no forman esporas. La morfología y el hábitat de muchas pseudomonas
coincide con el de bacterias entéricas como Escherichia coli pero se diferencian en
que no fermentan azúcares. Según el Manual de Bergey este grupo admite 7 especies,
siendo Pseudomonas aeruginosa la de mayor relevancia sanitaria, es un patógeno
oportunista por excelencia y el agente etiológico principal de infecciones en vías urinaria,
intestino, oído y heridas. Por su relativa resistencia al cloro es considerada un indicador
de eficiencia de la cloración. Su presencia en sistemas de almacenamiento, tanque, y
cisternas, responde a un estado deficiente de dichas instalaciones. El control de



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pseudomonas, al igual que el de bacterias aeróbicas, debe intensificarse en redes
expuestas a contaminación o cuando se comprueba cloración deficiente.
Flavobacterium es un género ampliamente distribuido en aguas y suelos. No ha
sido encontrado en sedimentos de acuíferos profundos pero si en las aguas que se
extraen de ellos. Por esta razón, se duda si las flavobacterias se encuentran naturalmente
en un acuífero o simplemente colonizan el pozo luego de su perforación. Son bacilos
            que se caracterizan por falta de movilidad y producción de pigmentos de color amarillo.

Los bacilos del género Gallionella se caracterizan por ser quimiolitótrofas,
obtienen energía por oxidación de Fe2+ a Fe3+ y la precipitación usualmente de hidróxidos
de (III), en o sobre las colonias, les otorga una coloración marrón característica.
Ellas crecen en lugares donde existen mezclas de aguas aerobias y anaerobias, y
donde abunda el ion Fe2+. Así, en pozos donde existe una interfaz aero-anaeróbica, su
desarrollo causa obstrucción por la precipitación de oxihidróxidos de hierro (III).
Las enterobacterias o Enterobacteriaceae son las más importantes dentro de
los anaeróbicos facultativos y su presencia en agua está asociada a contaminación
fecal. Este grupo de bacterias habita naturalmente el intestino de los animales. Son
bacilos no esporulados, no móviles y si lo son es por flagelos de inserción perítrica,
con requerimientos nutricionales relativamente simples. Generalmente se identifican
por su capacidad para fermentar glucosa por vía glucolítica dando ácidos como
producto final. Escherichia coli, habitante normal del intestino humano, es utilizada
como indicador de contaminación fecal de aguas. Las cepas patógenas de E. coli
causan infecciones del tracto intestinal (generalmente agudas y no presentan mayores
complicaciones, excepto en niños y adultos con deficiencias nutricionales). Otros
ejemplos de patógenos humanos de este grupo son Shigella, Salmonella y Klebsiella.
Shigella dysenteriae es causante de la disentería bacilar, Salmonella typhimurium
y typhi producen gastroenteritis y fiebre tifoidea respectivamente.
El grupo Vibrio está integrado por bacilos curvados, anaerobios facultativos, poseen
flagelos polares aunque algunos son perítricos. Se diferencian de las Pseudomonas en
su metabolismo no fermentativo. Están presentes en aguas dulces o marinas. Vibrio
cholerae, especie más representativa de este género, es patógeno para humanos y
responsable del cólera. Su transmisión es casi exclusivamente por vía hídrica.
Otras especies patógenas importantes para el hombre que se pueden encontrar
en muestras de agua pertenecen a los géneros Neisseria, Moraxella y Acinetobacter.
Los cocos del género Neisseria, aislados de sedimentos de acuíferos aeróbicos, son
causantes de gonorrea (Neisseria gonorrhoeae) y meningitis (Neisseria
meningitidis). Las especies de Moraxella y Acinetobacter son bacilos y se
transforman en cocos solamente en la senectud, y por ello se las propone como
cocobacilos. Algunas especies de Moraxella han sido aisladas de aguas profundas
originadas de acuíferos aeróbicos y representantes del género Acinetobacter se
encuentran frecuentemente también en aguas subterráneas aeróbicas.
Bacterias Gram positivas
No representan un grupo muy difundido en agua, sin embargo incluye algunos
patógenos humanos aislados especialmente de aguas subterráneas.
Los cocos más comunes pertenecen a los géneros Micrococcus,
Staphylococcus y Streptococcus. Los micrococos y estafilococos son aerobios
y tolerantes a altas concentraciones salinas que permite diferenciarlos de los
estreptococos. Varias especies de los dos primeros son importantes patógenos
humanos; aunque no existe certeza acerca de su habitat original, la bibliografía
las considera procedentes de aguas subterráneas. El género Streptococcus incluye
a Enterococcus faecalis, patógeno humano que habita normalmente en el intestino



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de hombres y animales por lo que es un indicador de contaminación fecal de
           aguas.


Las bacterias esporulantes, pertenecientes a los géneros Bacillus y Clostridium
presentan metabolismo aeróbico y anaeróbico respectivamente. A partir de suelos y
acuíferos aeróbicos se aíslan especies incluidas en el género Bacillus; y a partir de
suelos, sedimentos, aguas subterráneas anaerobias y última porción del tracto intestinal
de animales se pueden encontrar especies de Clostridium. Algunas especies son
patógenos para animales, generalmente debido a la producción de poderosas exotoxinas:
la del Bacillus anthracis, conduce al desarrollo de antrax, enfermedad de animales
que puede transmitirse a humanos (zoonosis) y la del Clostridium tetani que ocasiona
una enfermedad en humanos caracterizada por tetanización de músculos, razón por
             la cual recibe el nombre de tétano.

    IV)     MATERIALES Y EQUIPOS
            - Muestra (Arroz con Pollo)
            - Balanza de capacidad no inferior a 250 g y una sensibilidad de 0,1 g
            - Instrumentos para la preparación de las muestras, cuchillos, espatulas, etc,
              previamente esterilizados
            - Pipetas de 10ml y 1 ml
            - Matraces Erlenmeyer o frascos con contener 90 ml de diluyente de SSP
            - Tubos de ensayo que contenga 9ml de diluyente SSP
            - Agar nutritivo APC, C. Brilla, BP, y SS.
            - Mecheros




.




    V)      PROCEDIMIENTO

            Primero se prepara la Solucion Salina Peptonada, luego los agares:
            - C.Brilla 37°C x 1 dia para Coliformes.      -10ml en TUBOS DE ENSAYO
            - APC 35°C x 1 dia para Aerobios mesofilos. -15ml en PLACAS PETRI



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        -   BP 35°C x 1 dia para S. Aureus.            -15ml en PLACAS PETRI
        -   SS 35°C x 1 dia para Salmonella            -15ml en PLACAS PETRI




                      Dos placas Petri por cada agar de 15ml cada uno.
        Luego se hace la dilucion con la Solucion Salina Peptonada(para 1 l: 8.4g
        peptona y 2g NaCl).




        Se trabajo con diluciones de 10-2 y 10-3.




         Tambien se preparo un solicion desinfectante con hipoclorito de sodio (200ml),
             para desinfectar los vasos para hacer la hogenizacion de la muestra.

  VI)   RESULTADOS Y DISCUCIONES




                       PRACTICA2                                                 Página 9
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO                            E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL


            Luego de los tiempos estipulados para cada agar se hizo el recuento respectivo
            teniento los siguientes resultados:

                                 CUADRO N° 1: RESULTADOS APC, BP., SS.

               AGAR 10-2 10-3                 x-2           x-3       X(el <)    Ufc/ml
                APC 360 167                  36000        167000      167000     17x104
                 BP  0    0                    0             0           0         0
                 SS  0    0                    0             0           0         0



            En Caldo Brilla se tuvieron los siguientes resultados:

                               CUADRO N° 2: RESULTADOS CALDO BRILLA

                 AGAR          10-1 10-2 10-3             Resultado    Comparacion
                                                                        Tabla NMP
                                 0       0       0       El unico        Según la
                                 0       1       0       resultado     Tabla el NMP
                 C. Brilla
                                                      porsitivo fue el por g o ml es
                                 0       0       0
                                                      de 10-2 (0 1 0)        3

            Los Resultados Obtenidos fueron satisfactorios porque se logro alcanzar el
            objetivo, logrando observar luego de un día del cultivo de los microorganismos,
            bacterias. Se hizo una resiembra para confirmar E. Coli pero todos los resultados
            fueron negativos.


Según la Norma del MINSA en la parte 6. Dispociones Especificas(Pag. 21).

                                                     CUADRO N° 3:
                     XV. 2 Alimentos preparados con tratamiento termico (ensaladas cocidas, guisos,
                     arroces, postres, cocidos, arroz con leche, mazamorra, otros)


                                                                                  Limite por g o ml
    Agente microbiano                Categoria       Clase     n        c
                                                                                  m              M
Aerobios Mesofilos                      2             3        5        2         104           105
Coliformes                              5             3        5        2         10            102
S. aureus                               8             3        5        1         10            102
E. coli                                 6             3        5        1         <3             -
Salmonella sp.                          10            2        5        0       Asencia          -


    VII)    CONCLUSIONES




                               PRACTICA2                                                         Página 10
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO               E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL


        -   Podemos decir que hay la presencia de Aerobios mesofilos, coliformes y no
            hay presencia de Salmonella sp, S. aureus y E. coli (en este caso se hizo una
            resiembra ya que podría estar presente pero los resultados fueron negativos
            para todos los casos).


        -   El alimento “arroz con pollo” analizado es optimo para consumo humano,
            porque presenta 17x104ufc/ml, mientras que la norma permite 105, en
            cuando a coliformes también porque presenta 3 gérmenes por g o ml (según
            método del NMP) la norma permite 10; en cuanto a S. aureus, E. coli y
            Salmonella no hay presencia de estos en la muestra; por lo tanto la muestra
            analizada es aceptable para el consumo humano.


  VIII) BIBLIOGRAFIA

        -Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiología. 4ª edición.
        McGraw-Hill Interamericana, 1999.

        -Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biología de los
        Microorganismos. 10ª edición. Prentice-Hall. Madrid, 2003.

        -Díaz, R., Gamazo, C, y López-Goñi, I. Manual práctico de Microbiología. 2ª
        edición. Masson, S.A.. Barcelona, 1999.

        -MSc. Victor Choquehuanca, Guia de Practicas de Microbiologia
        Agroindustrial II (Pag. 47.)

        -MINSA, Norma Sanitaria de Criterios Microbiologicos.


  IX)   WEBGRAFIA

        -   http://nutricionyalimentacionrespuestainmune.blogspot.com/2009/05/microorga
            nismos-importantes-en-la.html

        -   http://www.solociencia.com/biologia/microbiologia-microorganismos-
            combatir.htm

        -   http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/ciencia-y-
            tecnologia/2007/07/24/28327.php




                       PRACTICA2                                                     Página 11

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Informe preparacion y diluciones de Alimentos Solidos

  • 1. MICROBIOLOGIA a AGROINDUSTRIAL II Practica 3: Preparacion y Diluciones de las Muestras de Alimentos Solidos Presentado Por: Ricardo Valenzuela Antezana COD: 093336 Docente: M.Sc. Victor Choquehuanca Caceres
  • 2. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL I) INTRODUCCION: La presencia de microorganismos en los alimentos no significa necesariamente un peligro para el consumidor o una calidad inferior de estos productos. En realidad, si se exceptúa el reducido número de productos esterilizados, cada bocado de alimento contiene levaduras inocuas, mohos, bacterias y todos microorganismos. La mayor parte de los alimentos se convierten en potencialmente peligrosos para el consumidor sólo después de que han sido violados los principios de higiene, limpieza y desinfección. Silos alimentos han estado sometidos a condiciones que pudieran haber permitido la llegada a los mismos y/o la multiplicación de agentes infecciosos o toxigénicos, pueden constituirse en vehículo de transmisión de enfermedades., tales como la salmonelosis ola intoxicación estafilocócica. La puesta en evidencia de estos riesgos se basa en el examen de muestras de alimentos en busca de los propios agentes causales o de indicadores de una contaminación no admisible. El examen microbiológico rutinario de los alimentos para detectar en ellos toda una serie numerosa de microorganismos patógenos y de sus toxinas no es practicable en la mayoría de los laboratorios. Sin embargo, es imperativo realizar los análisis microbiológicos de rutina correspondientes siempre que la información epidemiológica o de otro tipo de que se disponga sugiera o haga pensar en la presencia de un agente patógeno específico en un determinado alimento. El microbiólogo de los alimentos no dispone aún de técnicas fiables que le permitan poner de manifiesto la presencia en los alimentos de ciertos agentes de enfermedades transmitidas por esta vía, como ocurre con el virus de la hepatitis infecciosa. Para otras infecciones contraídas por el consumo de alimentos o por el agua de bebida, tales como la shigelosis, los métodos de laboratorio no ofrecen suficiente confianza, especialmente cuando los agentes patógenos están en número escaso o se encuentran distribuidos de modo desigual en alimentos que, por otra parte, contienen gran número de microorganismos saprofitos. Aun en los casos en los que se cuenta con métodos sensibles, algunos laboratorios pueden no disponer de las facilidades y capacidades técnicas precisas para llevar a cabo estas pruebas. Tales dificultades han determinado la amplia utilización de grupos (o especies) de microorganismos, cuya enumeración o recuento se realiza con mayor facilidad y cuya presencia en los alimentos (en determinado número) indica que estos productos estuvieron expuestos a condiciones que pudieran haber introducido organismos peligrosos y/o permitido la multiplicación de especies infecciosas o toxigénicos. Los grupos o especies utilizadas con estos fines se denominan microorganismos indicadores , y sirven para evaluar tanto la seguridad que ofrecen los alimentos en cuanto a microorganismos y sus toxinas, como su calidad microbiológica. Los microorganismos indicadores se han utilizado con varios fines. Nos ocuparemos brevemente de las bases en las que se fundamenta su uso y de la interpretación de su significado en los diversos alimentos. En primer lugar, se discuten los indicadores de uso más universal, pero el orden en que son presentados no refleja necesariamente su valor relativo. El principal objetivo de la utilización de bacterias como indicadores de prácticas no sanitarias es revelar defectos de tratamiento que llevan consigo un peligro potencial, peligro que no está necesariamente presente en la muestra particular examinada, pero que es probable pueda encontrarse en muestras paralelas. BACTERIAS ENTÉRICAS INDICADORAS. Escherichia coli, los coliformes (grupo coliaerogenes) y las Enterobacteriaceae Escherichia coli es un germen cuyo hábitat natural es el tracto entérico del hombre y de los animales. Por ello, la presencia de este microorganismo en un alimento indica generalmente una contaminación directa o indirecta de origen fecal. E. coli es el indicador clásico de la posible presencia de patógenos entéricos en el agua, en los moluscos, en los productos lácteos y en otros alimentos. La enumeración de E. coli en el agua constituye una medida de la cuantía de la polución, mientras que los niveles detectados en los alimentos pueden estar influenciados por otros factores, tales como la multiplicación del microorganismo, su muerte o inactivación o su adherencia a las partículas del alimento. Con todo, cifras sustanciales de E. PRACTICA2 Página 2
  • 3. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL coli en un alimento sugieren una falta general de limpieza en el manejo del mismo y un almacenamiento inadecuado. La presencia de E. coli en un alimento no constituye una connotación directa de la presencia de un patógeno, sino que implica únicamente un cierto riesgo de que pudiera estar presente. En otras palabras, la presencia de E. coli en los alimentos no guarda siempre una estrecha correlación con la presencia de salmonellas o de otros microorganismos patógenos. El término coliformes fecales ha surgido como un intento de encontrar métodos rápidos y fiables para establecer la presencia de E. coli y variantes estrechamente relacionados sin necesidad de purificar los cultivos obtenidos en las pruebas para coliformes o de aplicar las relativamente costosas pruebas confirmatorias. Los “coliformes fecales” comprenden un grupo de microorganismos seleccionados por incubación de los inóculos procedentes de un caldo de enriquecimiento de coliformes a temperaturas superiores a las normales (44-45,5ºC, dependiendo del método). Tales cultivos de enriquecimiento contienen por lo general un alto porcentaje de E.coli tipos I y II y son, por ello, muy indicativos de una probable contaminación de origen fecal del alimento. En los alimentos que han recibido un tratamiento para garantizar su sanidad, la presencia de niveles considerables de Enterobacteriaceae o de coliformes indica: (1)tratamiento inadecuado y/o contaminación posterior al tratamiento; más frecuentemente partir de materias primas, equipos sucios o manejo no higiénico, (2) multiplicación microbiana que pudiera haber permitido el crecimiento de toda la serie de microorganismos patógenos y toxigénicos. Con todo lo valiosa que esta información pueda ser, nunca deberá interpretarse como indicación cierta de que ha tenido lugar una contaminación de origen fecal de tales alimentos. Una pregunta siempre apremiante es la de si un resultado negativo en cualquiera de las pruebas mencionadas asegura la ausencia de patógenos entéricos. Ello depende naturalmente de parámetros tales como: (1) el número y la magnitud de las alícuotas examinadas, (2) la sensibilidad del método y (3) el número de Enterobacteriaceae, coliformes o E. coli y de microorganismos patógenos. Se han publicado varios trabajos sobre la relación entre la presencia de Enterobacteriaceae en alimentos y el riesgo de la existencia simultánea de salmonellas. Esta elevada resistencia es, al mismo tiempo, la razón de la falta de validez de estos cocos como indicadores generales de contaminación fecal. Los enterococos pueden resistir de tal modo condiciones adversas que su presencia guarda escasa relación con el peligro de la existencia simultánea de microorganismos patógenos, tales como Salmonella y Shigella, mucho menos resistentes, gérmenes estos últimos que aunque hubieran llegado a los alimentos o a las superficies juntamente con los enterococos, probablemente no habrían sobrevivido. Pequeñas números de estreptococos fecales en los alimentos carecen de significado, excepto cuando se trata de productos industrializados que han sido sometidos a un riguroso tratamiento bactericida (por ejemplo, alimentos precocinados congelados). Otros microorganismos indicadores Entre otros microorganismos que se usan a veces como indicadores podemos mencionar: (1) Staphylococcus aureus, para la contaminación procedente de vías orales, nasales, piel y otros orígenes, (2) bacterias mesófilas esporuladas como indicadores de un tratamientos térmico insuficiente de los alimentos enlatados o de un almacenamientos prolongando sin refrigeración de los alimentos cocinados, tales como la carne y el arroz, y (3) los enterovirus formadores de placas en cultivo de tejidos como indicadores de otros virus cuya detección en los alimentos es más difícil si no imposible. Los indicadores mencionados no se utilizan de modo general, posiblemente porque cada uno de ellos tiene determinados inconvenientes 1. Estafilococos. La presencia de Staphylococcus aureus en un alimento se interpreta, por lo genera, como indicativo de contaminación a partir de la piel, la boca y las fosas nasales de los manipuladores de alimentos, si bien el material y equipo sucios y las materias primas de origen animal PRACTICA2 Página 3
  • 4. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL pueden ser asimismo la fuente de la contaminación . Cuando se encuentra un gran número de estafilococos en un alimento, ello significa, por lo general, que las prácticas de limpieza y desinfección y el control de la temperatura no han sido, en algún lugar, adecuados. Ingran (1960) concedía significado a la presencia de gran número de Staphylcoccus, por ejemplo en carnes curadas, debido a que, cuando los recuentos de este grupo de gérmenes son altos, se han dado circunstancias determinantes de que las cepas de S. aureus enterotoxigénicas pudieran encontrarse en número peligroso. 2. Bacterias mesófilas esporuladas. La presencia de bacilos mesófilos en alimentos enlatados indica que o bien el envase no se cerró herméticamente o que el tratamientos térmico fue insuficiente para destruir los esporos. Existe la posibilidad de que en tales circunstancias pudiera estar presente también Clostridium botulinum. Si fuera así, pudiera haber tenido lugar el crecimientos del germen y la producción de toxina en los alimentos enlatados de acidez escasa (pH 4,6 o más elevado), tales como sopa de pollo y champiñones. Cuando se encuentran bacterias esporuladas en los alimentos refrigerados y en los deshidratados en número anormalmente elevado, o en proporción excesivamente grande de la población total, existe el riesgo de que entre ellas puedan encontrarse C. perfringens, C. botulinum o Bacillus cereus. Estos microorganismos representan un peligro ya en el alimento tal como ha sido fabricado o en sus usos futuros. 3. Virus. La utilidad de los virus como indicadores de la contaminación de los alimentos es problemática, debido a las dificultades técnicas en la demostración de su presencia. El diagnóstico de las enfermedades víricas transmitidas por los alimentos, tales como la hepatitis infecciosa y la poliomielitis se basa, por lo general en las investigaciones epidemiológicas “a posteriori” y no en el análisis de laboratorio del alimentos implicado. No obstante, Kostenbader y Cliver (1973) han propuesto pruebas para enterovirus formadores de placas. Parecería que tales pruebas son especialmente útiles en situaciones en las que persisten los virus contaminantes aún cuando las pruebas para los indicadores bacterianos comunes den resultados negativos. LEVADURAS Y MOHOS Las levaduras y los mohos crecen más lentamente que las bacterias en los alimentos no ácidos que conservan humedad y por ello pocas veces determinan problemas en tales alimentos. Sin embargo, en los alimentos ácidos y en los de baja actividad de agua, crecen con mayor rapidez que las bacterias, determinando por ello importantes pérdidas por alteración de frutas frescas y jugos, vegetales, quesos, productos derivados de los cereales, alimentos salazonados y encurtidos, así como en los alimentos congelados y en los deshidratados, cuyo almacenamiento se realiza en condiciones inadecuadas. Además, existe el peligro potencial de producción de micotoxinas por parte delos mohos. Para eliminar o reducir tales problemas, los manipuladores de alimentos susceptibles de enmohecimiento deberán: (1) reducir la carga de esporas, observando unas buenas prácticas higiénicas, (2) reducir los tiempos de almacenamiento y vender los alimentos lo antes posible, (3) almacenar los alimentos congelados a temperaturas inferiores a los 5 ºC, (4) eliminar o reducir el contacto con el aire (mediante envasado o por otros procedimientos), (5) calentar el alimento en su envase final para destruir las células vegetativas y las esporas, (6) añadir ácidos para retardar el crecimiento o (7) añadir conservadores químicos, tales como los sorbatos y benzoatos. Ni el hombre ni los animales deben consumir alimentos visiblemente enmohecidos, excepto, por supuesto, los quesos tales como Roquefort o Camembert y ciertos salamis que deben sus sabores especiales a algunos mohos. Las levaduras crecen más rápidamente que los mohos, pero con frecuencia juntos a ellos. Mientras que los mohos son casi siempre aerobios estrictos, las levaduras generalmente crecen tanto en presencia como en ausencia de oxígeno, aunque con mayor rapidez y hasta poblaciones más elevadas en presencia de este gas. La fermentación es completamente un proceso anaeróbico. PRACTICA2 Página 4
  • 5. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL En los alimentos frescos y en los congelados, pueden encontrarse números reducidos de esporas y células vegetativas de levaduras, pero su presencia en estos alimentos es de escaso significado. Sólo cuando el alimento contiene cifras elevadas de levaduras o mohos visibles el consumidor se dará cuenta de la alteración. La alteración por levaduras no constituye un peligro para la salud. II) OBJETIVOS: · Conocer la presencia de aerobios mesofilos, coliformes, S. aureus, E. coli y Salmonella sp. en una muestra solida (arroz con pollo). · Comparar con la norma del MINSA y determinar así, si el alimento es apto o no para el consumo humano. III) FUNDAMENTO El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente actúa como vehículo de transmisión de microorganismos entéricos. La materia fecal puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma más común el ingreso a través de los sistemas de pozo ciego a napas profundas. El Código Alimentario Argentino (CAA), la Organización Mundial de la Salud (OMS) en sus Guías para la calidad del agua potable, la Directiva 98/83/CE1 y otras normas internacionales, establecen o recomiendan requisitos de calidad para el agua de consumo humano. En general, la normativa establece que el agua es apta bacteriológicamente para consumo si se encuentra exenta de microorganismos patógenos de origen entérico y parasitario intestinal. Ellos transmiten enfermedades tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis (Shigella), colera (Vibrio Cholerae), amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones gastrointestinales (Aeromonas mesófilas, Helicobacter pylori, Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia), cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis (Schistosoma), desórdenes hepáticos (virus de hepatitis), etc. La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida es un riesgo que se incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad microbiológica de muestras de diversos orígenes. Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hídricos, potencialmente riesgosos para la salud, resultan difíciles de llevar a cabo debido a la gran variedad de bacterias patógenas cultivables, a la complejidad de los ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentración de varias especies altamente agresivas, sin que el orden detallado indique prioridad. Por esta razón, los análisis bacteriológicos apuntan a la búsqueda de microorganismos indicadores de contaminación fecal y se centralizan en la cuantificación de coliformes. Este grupo está integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el indicador universal de contaminación fecal. 3. Microorganismos Presentes en Aguas Naturales La variabilidad microbiológica de las aguas naturales abarca numerosos organismos e incluye células eucariotas (algas, protozoarios y hongos), células PRACTICA2 Página 5
  • 6. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL procariotas (bacterias) y virus (microorganismos con capacidad de síntesis nula). Algas Estos microorganismos contienen necesariamente clorofila para la actividad fotosintética, sin embargo el color verde puede estar enmascarado por otros pigmentos (carotenoides) presentes. Son aerobias, y en ambientes con poco oxígeno, mueren, flotan y se descomponen produciendo mal olor. Podemos encontrar las siguientes familias de algas:  Chlorophyta o algas verdes que huelen a pescado o hierba.  Cyanophyta o algas verdes azuladas con olores desagradables que pueden producir sustancias tóxicas.  Chrysophita son de color amarillo verdoso y a menudo generan olores aromáticos (geranios) o huelen a pescado, por ej. Aulococeira y Cyclotella. Protozoarios Frecuentemente en el agua contaminada con heces se encuentran dos protozoarios parásitos con incidencia en salud humana, responsables de epidemias:  Giardia lamblia: es flagelado con un tamaño de 15 ìm y se transmite al hombre a través de agua contaminada con materia fecal. Las células del protozoario producen un estado de reposo denominado quiste. Los quistes al ser ingeridos germinan y causan giardiasis, enfermedad caracterizada por diarreas, calambres intestinales, flatulencia, nauseas, síntomas que pueden ser agudos o crónicos. La giardisis es una de las enfermedades parasitarias de origen hídrico más comunes.  Cryptosporidium parvum: es un parásito del hombre y animales de tamaño muy pequeño (2-5ìm), redondeado que crece en el interior de las células del epitelio mucoso de intestino y estómago. Los quistes infecciosos producidos por este protozoario poseen una pared muy gruesa. Los quistes de Cryptosporidium son mucho más resistentes a la cloración que los de Giardia. La criptoposiosis es una infección que se caracteriza por dolores estomacales, nauseas, diarrea y deshidratación. Virus El 87% de las enfermedades virales transmitidas por el agua son causadas por el virus de la hepatitis (adenovirus y rotavirus). Bacterias Más del 80% de las bacterias descriptas en el Manual de Bergey pueden aislarse del agua. Teniendo en cuenta la respuesta a la tinción de Gram, a continuación se mencionan y describen algunas de las más importantes. Bacterias Gram negativas Entre las especies que se han aislado de aguas, podemos mencionar a las pertenecientes a los géneros Pseudomonas, Flavobacterium, Gallionella, Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Achromobacter, Alcaligenes, Bordetella, Neisseria, Moraxella y Acinetobacter. Las pseudomonas son las más comunes en napas freáticas debido a su versatilidad respecto a fuentes de carbono, y a sus bajos requerimientos nutricionales. Ellas son bacilos psicrófilos, presentan flagelos perítricos, producen pigmentos (verde, azul verdoso, rojo, marrón) y no forman esporas. La morfología y el hábitat de muchas pseudomonas coincide con el de bacterias entéricas como Escherichia coli pero se diferencian en que no fermentan azúcares. Según el Manual de Bergey este grupo admite 7 especies, siendo Pseudomonas aeruginosa la de mayor relevancia sanitaria, es un patógeno oportunista por excelencia y el agente etiológico principal de infecciones en vías urinaria, intestino, oído y heridas. Por su relativa resistencia al cloro es considerada un indicador de eficiencia de la cloración. Su presencia en sistemas de almacenamiento, tanque, y cisternas, responde a un estado deficiente de dichas instalaciones. El control de PRACTICA2 Página 6
  • 7. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL pseudomonas, al igual que el de bacterias aeróbicas, debe intensificarse en redes expuestas a contaminación o cuando se comprueba cloración deficiente. Flavobacterium es un género ampliamente distribuido en aguas y suelos. No ha sido encontrado en sedimentos de acuíferos profundos pero si en las aguas que se extraen de ellos. Por esta razón, se duda si las flavobacterias se encuentran naturalmente en un acuífero o simplemente colonizan el pozo luego de su perforación. Son bacilos que se caracterizan por falta de movilidad y producción de pigmentos de color amarillo. Los bacilos del género Gallionella se caracterizan por ser quimiolitótrofas, obtienen energía por oxidación de Fe2+ a Fe3+ y la precipitación usualmente de hidróxidos de (III), en o sobre las colonias, les otorga una coloración marrón característica. Ellas crecen en lugares donde existen mezclas de aguas aerobias y anaerobias, y donde abunda el ion Fe2+. Así, en pozos donde existe una interfaz aero-anaeróbica, su desarrollo causa obstrucción por la precipitación de oxihidróxidos de hierro (III). Las enterobacterias o Enterobacteriaceae son las más importantes dentro de los anaeróbicos facultativos y su presencia en agua está asociada a contaminación fecal. Este grupo de bacterias habita naturalmente el intestino de los animales. Son bacilos no esporulados, no móviles y si lo son es por flagelos de inserción perítrica, con requerimientos nutricionales relativamente simples. Generalmente se identifican por su capacidad para fermentar glucosa por vía glucolítica dando ácidos como producto final. Escherichia coli, habitante normal del intestino humano, es utilizada como indicador de contaminación fecal de aguas. Las cepas patógenas de E. coli causan infecciones del tracto intestinal (generalmente agudas y no presentan mayores complicaciones, excepto en niños y adultos con deficiencias nutricionales). Otros ejemplos de patógenos humanos de este grupo son Shigella, Salmonella y Klebsiella. Shigella dysenteriae es causante de la disentería bacilar, Salmonella typhimurium y typhi producen gastroenteritis y fiebre tifoidea respectivamente. El grupo Vibrio está integrado por bacilos curvados, anaerobios facultativos, poseen flagelos polares aunque algunos son perítricos. Se diferencian de las Pseudomonas en su metabolismo no fermentativo. Están presentes en aguas dulces o marinas. Vibrio cholerae, especie más representativa de este género, es patógeno para humanos y responsable del cólera. Su transmisión es casi exclusivamente por vía hídrica. Otras especies patógenas importantes para el hombre que se pueden encontrar en muestras de agua pertenecen a los géneros Neisseria, Moraxella y Acinetobacter. Los cocos del género Neisseria, aislados de sedimentos de acuíferos aeróbicos, son causantes de gonorrea (Neisseria gonorrhoeae) y meningitis (Neisseria meningitidis). Las especies de Moraxella y Acinetobacter son bacilos y se transforman en cocos solamente en la senectud, y por ello se las propone como cocobacilos. Algunas especies de Moraxella han sido aisladas de aguas profundas originadas de acuíferos aeróbicos y representantes del género Acinetobacter se encuentran frecuentemente también en aguas subterráneas aeróbicas. Bacterias Gram positivas No representan un grupo muy difundido en agua, sin embargo incluye algunos patógenos humanos aislados especialmente de aguas subterráneas. Los cocos más comunes pertenecen a los géneros Micrococcus, Staphylococcus y Streptococcus. Los micrococos y estafilococos son aerobios y tolerantes a altas concentraciones salinas que permite diferenciarlos de los estreptococos. Varias especies de los dos primeros son importantes patógenos humanos; aunque no existe certeza acerca de su habitat original, la bibliografía las considera procedentes de aguas subterráneas. El género Streptococcus incluye a Enterococcus faecalis, patógeno humano que habita normalmente en el intestino PRACTICA2 Página 7
  • 8. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL de hombres y animales por lo que es un indicador de contaminación fecal de aguas. Las bacterias esporulantes, pertenecientes a los géneros Bacillus y Clostridium presentan metabolismo aeróbico y anaeróbico respectivamente. A partir de suelos y acuíferos aeróbicos se aíslan especies incluidas en el género Bacillus; y a partir de suelos, sedimentos, aguas subterráneas anaerobias y última porción del tracto intestinal de animales se pueden encontrar especies de Clostridium. Algunas especies son patógenos para animales, generalmente debido a la producción de poderosas exotoxinas: la del Bacillus anthracis, conduce al desarrollo de antrax, enfermedad de animales que puede transmitirse a humanos (zoonosis) y la del Clostridium tetani que ocasiona una enfermedad en humanos caracterizada por tetanización de músculos, razón por la cual recibe el nombre de tétano. IV) MATERIALES Y EQUIPOS - Muestra (Arroz con Pollo) - Balanza de capacidad no inferior a 250 g y una sensibilidad de 0,1 g - Instrumentos para la preparación de las muestras, cuchillos, espatulas, etc, previamente esterilizados - Pipetas de 10ml y 1 ml - Matraces Erlenmeyer o frascos con contener 90 ml de diluyente de SSP - Tubos de ensayo que contenga 9ml de diluyente SSP - Agar nutritivo APC, C. Brilla, BP, y SS. - Mecheros . V) PROCEDIMIENTO Primero se prepara la Solucion Salina Peptonada, luego los agares: - C.Brilla 37°C x 1 dia para Coliformes. -10ml en TUBOS DE ENSAYO - APC 35°C x 1 dia para Aerobios mesofilos. -15ml en PLACAS PETRI PRACTICA2 Página 8
  • 9. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL - BP 35°C x 1 dia para S. Aureus. -15ml en PLACAS PETRI - SS 35°C x 1 dia para Salmonella -15ml en PLACAS PETRI Dos placas Petri por cada agar de 15ml cada uno. Luego se hace la dilucion con la Solucion Salina Peptonada(para 1 l: 8.4g peptona y 2g NaCl). Se trabajo con diluciones de 10-2 y 10-3. Tambien se preparo un solicion desinfectante con hipoclorito de sodio (200ml), para desinfectar los vasos para hacer la hogenizacion de la muestra. VI) RESULTADOS Y DISCUCIONES PRACTICA2 Página 9
  • 10. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL Luego de los tiempos estipulados para cada agar se hizo el recuento respectivo teniento los siguientes resultados: CUADRO N° 1: RESULTADOS APC, BP., SS. AGAR 10-2 10-3 x-2 x-3 X(el <) Ufc/ml APC 360 167 36000 167000 167000 17x104 BP 0 0 0 0 0 0 SS 0 0 0 0 0 0 En Caldo Brilla se tuvieron los siguientes resultados: CUADRO N° 2: RESULTADOS CALDO BRILLA AGAR 10-1 10-2 10-3 Resultado Comparacion Tabla NMP 0 0 0 El unico Según la 0 1 0 resultado Tabla el NMP C. Brilla porsitivo fue el por g o ml es 0 0 0 de 10-2 (0 1 0) 3 Los Resultados Obtenidos fueron satisfactorios porque se logro alcanzar el objetivo, logrando observar luego de un día del cultivo de los microorganismos, bacterias. Se hizo una resiembra para confirmar E. Coli pero todos los resultados fueron negativos. Según la Norma del MINSA en la parte 6. Dispociones Especificas(Pag. 21). CUADRO N° 3: XV. 2 Alimentos preparados con tratamiento termico (ensaladas cocidas, guisos, arroces, postres, cocidos, arroz con leche, mazamorra, otros) Limite por g o ml Agente microbiano Categoria Clase n c m M Aerobios Mesofilos 2 3 5 2 104 105 Coliformes 5 3 5 2 10 102 S. aureus 8 3 5 1 10 102 E. coli 6 3 5 1 <3 - Salmonella sp. 10 2 5 0 Asencia - VII) CONCLUSIONES PRACTICA2 Página 10
  • 11. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO E.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL - Podemos decir que hay la presencia de Aerobios mesofilos, coliformes y no hay presencia de Salmonella sp, S. aureus y E. coli (en este caso se hizo una resiembra ya que podría estar presente pero los resultados fueron negativos para todos los casos). - El alimento “arroz con pollo” analizado es optimo para consumo humano, porque presenta 17x104ufc/ml, mientras que la norma permite 105, en cuando a coliformes también porque presenta 3 gérmenes por g o ml (según método del NMP) la norma permite 10; en cuanto a S. aureus, E. coli y Salmonella no hay presencia de estos en la muestra; por lo tanto la muestra analizada es aceptable para el consumo humano. VIII) BIBLIOGRAFIA -Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiología. 4ª edición. McGraw-Hill Interamericana, 1999. -Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biología de los Microorganismos. 10ª edición. Prentice-Hall. Madrid, 2003. -Díaz, R., Gamazo, C, y López-Goñi, I. Manual práctico de Microbiología. 2ª edición. Masson, S.A.. Barcelona, 1999. -MSc. Victor Choquehuanca, Guia de Practicas de Microbiologia Agroindustrial II (Pag. 47.) -MINSA, Norma Sanitaria de Criterios Microbiologicos. IX) WEBGRAFIA - http://nutricionyalimentacionrespuestainmune.blogspot.com/2009/05/microorga nismos-importantes-en-la.html - http://www.solociencia.com/biologia/microbiologia-microorganismos- combatir.htm - http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/ciencia-y- tecnologia/2007/07/24/28327.php PRACTICA2 Página 11