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APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE
DANS LA COMPREHENSION DE
L’EPIDEMIOLOGIE DU PALUDISME
Ravelojaona Alain Mamy
24/08/2009
EVALUATION
par les FACILITATEURS
Code de classement
Excellente présentation : 5 étoiles colorées sur 5
(voir diapositive de titre)
Adressez vos questions ou commentaires à :
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Bonne lecture !
APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE
DANS LA COMPREHENSION DE
L’EPIDEMIOLOGIE DU PALUDISME
Ravelojaona Alain Mamy
24/08/2009
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PLAN
I- Identification de l’espèce plasmodiale
1) Sang humain
2) Chez les moustiques
II- Appréciation de l’évolution de la résistance
1) Résistance des anophèles vis-à-vis des pesticides
2) Résistances des parasites vis-à-vis des médicaments antipaludiques
III- Génétique des populations : vecteurs, hommes
1) Au niveau des vecteurs
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IV- Conclusion
VI- Bibliographie
I- Identification de l’espèce plasmodiale
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Principe: la Polymerase Chain Reaction (PCR) permet d’amplifier une séquence
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Fontenille et al., 1995
I- Identification de l’espèce plasmodiale(suite)
2) Chez les moustiques
- Biologie moléculaire confirme la reémérgence d’un vecteur porteur d’un
plasmodium
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 mode de vie
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II- Appréciation de l’évolution de la résistance
1) Résistance des anophèles vis-à-vis des pesticides
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II- Appréciation de l’évolution de la résistance
(suite)
2) Résistance des parasites vis-à-vis des médicaments antipaludiques
Des études réalisées au Cameroun portant sur la résistance de Plasmodium
falciparum à la Sulfadoxine pyrimethamine ont montré que cette résistance
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Greenwood et al., 2005
III- Génétique des populations : vecteurs et
hommes
1) Au niveau des vecteurs
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III- Génétique des populations : vecteurs et
hommes
2) Au niveau de l’homme
Polymorphisme génétique par PCR des gènes des séquences microsatellites de
l’ADN contenu dans des leucocytes humains provenant d’un repas sanguin de
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 permet d’identifier l’individu qui a été piqué
Fontenille et al., 1995
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Limites:
technologie coûteuse
qui demande des matériels sophistiqués (thermocycler, matériel à
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santé secondaires en Afrique
Bibliographie
Berry A, Fabre R, Benoit-Vical F, Cassaing S, Magnaval JF. Contribution of PCR-based methods to
diagnosis and management of imported malaria. Med Trop (Mars). 2005;65(2):176-83.
Elissa N, Karch S. Re-emergence of Anopheles funestus and its possible effect on malaria transmission
on Mayotte Island, Indian Ocean.J Am Mosq Control Assoc. 2005 Dec;21(4):472-3
Fonseca-González I, Quiñones ML, McAllister J, Brogdon WG. Mixed-function oxidases and esterases
associated with cross-resistance between DDT and lambda-cyhalothrin in Anopheles darlingi Root
1926 populations from Colombia. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2009 Feb;104(1):18-26
Fontenille D, Diatta M, Konate L, Lochouarn L, Lemasson JJ, Diagne N, Molez JF, Rogier C, Trape JF, Faye
O. Intérêt de l’utilisation des outils de biologie moléculaire dans la transmission du paludisme:
l’exemple des programmes conduits au Sénégal. Med Trop (Mars). 1995;55(4 Suppl):52-5.
Greenwood BM, Bojang K, Whitty CJ, Targett GA. Malaria. Lancet. 2005 Apr 23-29;365(9469):1487-98.
Pinto J, Lynd A, Elissa N, Donnelly MJ, Costa C, Gentile G, Caccone A, do Rosário VE. Co-occurrence of
East and West African kdr mutations suggests high levels of resistance to pyrethroid insecticides in
Anopheles gambiae from Libreville, Gabon. Med Vet Entomol. 2006 Mar;20(1):27-32

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  • 1. APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE DANS LA COMPREHENSION DE L’EPIDEMIOLOGIE DU PALUDISME Ravelojaona Alain Mamy 24/08/2009 EVALUATION par les FACILITATEURS
  • 2. Code de classement Excellente présentation : 5 étoiles colorées sur 5 (voir diapositive de titre) Adressez vos questions ou commentaires à : atelier.paludisme@pasteur.mg Bonne lecture !
  • 3. APPORT DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE DANS LA COMPREHENSION DE L’EPIDEMIOLOGIE DU PALUDISME Ravelojaona Alain Mamy 24/08/2009 EVALUATION par les FACILITATEURS
  • 4. PLAN I- Identification de l’espèce plasmodiale 1) Sang humain 2) Chez les moustiques II- Appréciation de l’évolution de la résistance 1) Résistance des anophèles vis-à-vis des pesticides 2) Résistances des parasites vis-à-vis des médicaments antipaludiques III- Génétique des populations : vecteurs, hommes 1) Au niveau des vecteurs 2) Au niveau de l’homme IV- Conclusion VI- Bibliographie
  • 5. I- Identification de l’espèce plasmodiale 1) Sang humain Principe: la Polymerase Chain Reaction (PCR) permet d’amplifier une séquence d’ADN pour identifier un gène 2) Migration sur un gel d’agarose (électrophorèse) 1) Amplification par Taq-polymérase 3) Détection UV
  • 6. I- Identification de l’espèce plasmodiale 1) Sang humain Dans le cadre du paludisme, cette technique est utilisée en diagnostic biologique afin de: -réaliser une identification spécifique des 4 espèces de plasmodium, en complément de la microscopie. -détecter les infections mixtes. -détecter des taux très bas de parasitémie. La sensibilité et la spécificité de la PCR constituent un atout majeur dans l’identification de l’espèce infestant et permet donc d’adapter le traitement plus efficacement. La PCR précise la répartition, les cycles, la préférence trophique des espèces d’Anophèles. Berry et al., 2005 Fontenille et al., 1995
  • 7. I- Identification de l’espèce plasmodiale(suite) 2) Chez les moustiques - Biologie moléculaire confirme la reémérgence d’un vecteur porteur d’un plasmodium ex: cas d’Anopheles funestus à Mayotte La connaissance du vecteur  mode de vie  modification de la stratégie de lutte. Elissa et Karch, 2005
  • 8. II- Appréciation de l’évolution de la résistance 1) Résistance des anophèles vis-à-vis des pesticides - Emergence de population d’Anopheles gambiae résistante aux pesticides de type pyréthroïdes (utilisés dans le traitement des moustiquaires imprégnées). mutation du gènes kdr (knock down resistance) - Mutation précédemment décrite en Afrique de l’Est a été caractérisé sur une population d’Anopheles gambiae dans un pays des côtes de l’Afrique de l’Ouest Pinto et al., 2006
  • 9. II- Appréciation de l’évolution de la résistance (suite) 2) Résistance des parasites vis-à-vis des médicaments antipaludiques Des études réalisées au Cameroun portant sur la résistance de Plasmodium falciparum à la Sulfadoxine pyrimethamine ont montré que cette résistance serait due: - une augmentation de la fréquence des mutations triples sur le gène dhfr (dihydro folate réductase) - une augmentation de la fréquence des mutations simple ou double sur le gène dhps (dihydroptéroate synthase) Greenwood et al., 2005
  • 10. III- Génétique des populations : vecteurs et hommes 1) Au niveau des vecteurs Polymorphisme génétique des anophèles étudiés par PCR Résistance d’Anopheles darligni vis-à-vis du DDT et autres pesticides Polymorphisme du gène nd4 par séquençage, caractérisation de 20 haplotypes de ce gène Fonseca-González et al., 2009
  • 11. III- Génétique des populations : vecteurs et hommes 2) Au niveau de l’homme Polymorphisme génétique par PCR des gènes des séquences microsatellites de l’ADN contenu dans des leucocytes humains provenant d’un repas sanguin de moustique  permet d’identifier l’individu qui a été piqué Fontenille et al., 1995
  • 12. Conclusion Avantages: la biologie moléculaire a permis, en association avec d’autres techniques plus classiques utilisées en entomologie, de préciser : - quel vecteur transmet quel plasmodium, - mais aussi où, quand et à quel taux cette transmission s’effectue Limites: technologie coûteuse qui demande des matériels sophistiqués (thermocycler, matériel à électrophorèse, environnements stériles…) Disponibilité limitée aux centres de recherche et CHU  peu compatible avec la réalité de terrain dans les centres de santé secondaires en Afrique
  • 13. Bibliographie Berry A, Fabre R, Benoit-Vical F, Cassaing S, Magnaval JF. Contribution of PCR-based methods to diagnosis and management of imported malaria. Med Trop (Mars). 2005;65(2):176-83. Elissa N, Karch S. Re-emergence of Anopheles funestus and its possible effect on malaria transmission on Mayotte Island, Indian Ocean.J Am Mosq Control Assoc. 2005 Dec;21(4):472-3 Fonseca-González I, Quiñones ML, McAllister J, Brogdon WG. Mixed-function oxidases and esterases associated with cross-resistance between DDT and lambda-cyhalothrin in Anopheles darlingi Root 1926 populations from Colombia. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2009 Feb;104(1):18-26 Fontenille D, Diatta M, Konate L, Lochouarn L, Lemasson JJ, Diagne N, Molez JF, Rogier C, Trape JF, Faye O. Intérêt de l’utilisation des outils de biologie moléculaire dans la transmission du paludisme: l’exemple des programmes conduits au Sénégal. Med Trop (Mars). 1995;55(4 Suppl):52-5. Greenwood BM, Bojang K, Whitty CJ, Targett GA. Malaria. Lancet. 2005 Apr 23-29;365(9469):1487-98. Pinto J, Lynd A, Elissa N, Donnelly MJ, Costa C, Gentile G, Caccone A, do Rosário VE. Co-occurrence of East and West African kdr mutations suggests high levels of resistance to pyrethroid insecticides in Anopheles gambiae from Libreville, Gabon. Med Vet Entomol. 2006 Mar;20(1):27-32