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Ministère de la recherche et de l’enseignement supérieur.
Université Abderrahmane Mira de Bejaia.
Faculté des sciences de la nature et de la vie.
Département de microbiologie.
Master II biotechnologie microbienne .
Mémoire de Fin de Cycle
En vue de l'obtention du diplôme
Master
Etude de quelques activités biologiques de
souches d’actinobactéries
Présenté par:
Bouzid Kahina
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Encadrée par:
Souagui. S
Plande travail
Introduction
Matériel et méthodes
Conclusion et perspectives
Résultats et discussion
3
Introduction
Synthétique
semi-synthétique
Naturelle
5
Industrie
Bacteries a Gram positif avec un GC% élevé.
Peuvent présenter diverses morphologies
(filamenteuse, bacilles, cocci,,,)
Souvent telluriques.
Synthétisent les métabolites bioactifs.
6
Généralités sur les actinobatéries
Le genre Streptomyces est une composante prédominante de la population
microbienne dans les sols et est connu pour être commercialement et
thérapeutiquement, une source majeure de métabolites secondaires importants
appliqués dans différents domaines.
Applications biotechnologique des actinobatéries
7
Etude des l’activités enzymatiques
des souches d’actinobactéries
OBJECTIFS DU TRAVAIL
8
Materiéls et Méthodes
9
10
Matériels
Souches
d’actinobactéries
NA44.
SC20.
ND101.
Isolées à partir de sol de la
région de Béjaia
Millieux de cultures
Tween 80.
Gélose au lait ecrémé .
Gélose à la gélatine .
Gélose au jaune d’œuf.
Gélose à la tyrosine.
CMC.
Gélose de Gausse.
Urée indole.
Bouillon nitraté.
11
Étude des l’activités
enzymatiques
Sur milieu
solide
sur milieu liquide
Méthodologies
12
milieu solide
Ensemencement
Tween 80
CMC
Gélose à la gélatine
Gélose à la Tyrosine
Gélose de Gausse
Gélose au jeune d’œuf
Gélose au lait crémé
Souches d’actinobactéries
13
Milieu liquide
Tube 3
Urée Indole
Bouillon Nitraté
Tube 1 Tube 2
Tube 1 Tube 2 Tube 3
Souches d’actinobactéries
Ensemencement
RÉSULTATSET DISCUSSIONs
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15
Résultats
1. Sur milieu liquide
Tableau I: Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu
liquide
Substrat
dégradé
Les souches d’actinobactéries
NA44 ND101 SC20
Urée + + +
Nitrate + + +
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
+: Présence de l’enzyme
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Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
17
Résultats
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
2. Sur milieu solide
Substrat
dégradé
Les souches d’actinobactéries
NA44 ND101 SC20
Amidon Halo clair Halo clair Halo clair
Caséine
Halo clair Halo clair Halo clair
Cellulose
Halo jaunâtre
Halo jaunâtre
Halo jaunâtre
Gélatine halo clair Pas d’halo Halo clair
Tween 80
Halo opaque
Halo opaque Halo opaque
Lécithine
Halo opaque Halo opaque Halo opaque
Noircissement de milieu
Noircissement de milieu Noircissement de milieu
L-Tyrosine
Tableau II :Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu solide
18
Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
19
Discussions
 Après 7jours d’incubation à 30C°,les tubes de milieu Urée-Indol déjà ensemencés avec chacune des
trois souches d’actinobactéries (ND101, NA44, SC20) ont viré au rouge violet; ceci confirme
l’alcalinité du milieu suite à la production d’ammoniac après catalyse de l’urée par l’uréase produite
par nos souches.
 Après l’addition des deux réactif NR1 et NR2 pour les tubes de milieu bouillon nitraté déjà
ensemencés par les souches d’actinobactéries (ND101, NA44,SC20);seul le tube correspond à la
souches ND101 qui a viré vers le rouge; ceux qui indique que cette souche a produit la nitrate
réductase.
 Pour les deux autre souches NA44 et SC20 aucun virage n’a été observé mais l’addition de
quelque Mg de poudre de zinc nous a aidé à confirmer le résultat positif de la présence d’une activité
nitrate réductase.
20
Discussions
 la présence d’un halo clair autour des colonies dans les deux milieu « Gausse » et « Gélose au lait
écrémé » signifié que les deux substrat « Amidon » et « Casiéne » ont été dégradé par les deux enzymes
« Amylase » et « Caséinase » respectivement produites par nos trois souches d’actinobactéries
(NA44,ND101,SC20),
 L’halo opaque qui a été manifesté autour des colonies dans les deux milieu « T ween80 » et « Gélose au
jaune d’œuf » indique la présence de l’activité estérasique et lécithinasique respectivement chez les trois
souches d’actinobactéries testées.
 L’apparition d’halo jaunâtre dans le milieu CMC montre que nos souches d’actinobactéries ont une
activité cellulolytique.
 Noircissement du milieu « Gélose à la tyrosine » s’explique par l’hydrolyse de L-tyrosine et la
production de la milanine.
 L’halo clair présenté chez les deux souches NA44 et SC20 sur le milieu « Gélose à la gélatine »
désigne une activé gélatinase positive ,le résultat négatif de cette activité chez la souche ND101 se
traduit par l’absence d’une zone autour des colonies.
21
CONCLUSION
 Les trois souches d’actinobactéries (NA44, ND101 et SC20) présentent plusieurs
activités enzymatiques (Amylolytique,cellulolytique,caséinase,estérasique,
lécitinasique, tyrosinase, uréasique, nitrate réductase).
 L’activité Amylolytique de deux souches d’actinobactéries (NA44
SC20) est relativement plus élevée par rapport à la souche ND101 .
 L’activité gélatinase est présenté chez les deux souches d’actinobactéries (NA44,
SC20) cependant la souche d’actinobactérie ND101 n’a pas pu hydrolysée la gélatine.
 L’identification des souches testées.
 Caractérisations des enzymes produites.
 Compléter l’étude avec les testes d’autres activités biologiques pour évaluer leurs
éventuelles intérêt dans d’autres applications.
22
PERSPECTIVES
Merci pour votre attention
23

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  • 1. 1
  • 2. Ministère de la recherche et de l’enseignement supérieur. Université Abderrahmane Mira de Bejaia. Faculté des sciences de la nature et de la vie. Département de microbiologie. Master II biotechnologie microbienne . Mémoire de Fin de Cycle En vue de l'obtention du diplôme Master Etude de quelques activités biologiques de souches d’actinobactéries Présenté par: Bouzid Kahina 2 Encadrée par: Souagui. S
  • 3. Plande travail Introduction Matériel et méthodes Conclusion et perspectives Résultats et discussion 3
  • 6. Bacteries a Gram positif avec un GC% élevé. Peuvent présenter diverses morphologies (filamenteuse, bacilles, cocci,,,) Souvent telluriques. Synthétisent les métabolites bioactifs. 6 Généralités sur les actinobatéries Le genre Streptomyces est une composante prédominante de la population microbienne dans les sols et est connu pour être commercialement et thérapeutiquement, une source majeure de métabolites secondaires importants appliqués dans différents domaines.
  • 8. Etude des l’activités enzymatiques des souches d’actinobactéries OBJECTIFS DU TRAVAIL 8
  • 10. 10 Matériels Souches d’actinobactéries NA44. SC20. ND101. Isolées à partir de sol de la région de Béjaia Millieux de cultures Tween 80. Gélose au lait ecrémé . Gélose à la gélatine . Gélose au jaune d’œuf. Gélose à la tyrosine. CMC. Gélose de Gausse. Urée indole. Bouillon nitraté.
  • 11. 11 Étude des l’activités enzymatiques Sur milieu solide sur milieu liquide Méthodologies
  • 12. 12 milieu solide Ensemencement Tween 80 CMC Gélose à la gélatine Gélose à la Tyrosine Gélose de Gausse Gélose au jeune d’œuf Gélose au lait crémé Souches d’actinobactéries
  • 13. 13 Milieu liquide Tube 3 Urée Indole Bouillon Nitraté Tube 1 Tube 2 Tube 1 Tube 2 Tube 3 Souches d’actinobactéries Ensemencement
  • 15. 15 Résultats 1. Sur milieu liquide Tableau I: Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu liquide Substrat dégradé Les souches d’actinobactéries NA44 ND101 SC20 Urée + + + Nitrate + + + Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques +: Présence de l’enzyme
  • 16. 16 Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
  • 17. 17 Résultats Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques 2. Sur milieu solide Substrat dégradé Les souches d’actinobactéries NA44 ND101 SC20 Amidon Halo clair Halo clair Halo clair Caséine Halo clair Halo clair Halo clair Cellulose Halo jaunâtre Halo jaunâtre Halo jaunâtre Gélatine halo clair Pas d’halo Halo clair Tween 80 Halo opaque Halo opaque Halo opaque Lécithine Halo opaque Halo opaque Halo opaque Noircissement de milieu Noircissement de milieu Noircissement de milieu L-Tyrosine Tableau II :Activités enzymatiques des trois souches d’actinobactéries sur milieu solide
  • 18. 18 Résultats de l’étude des l’activités enzymatiques
  • 19. 19 Discussions  Après 7jours d’incubation à 30C°,les tubes de milieu Urée-Indol déjà ensemencés avec chacune des trois souches d’actinobactéries (ND101, NA44, SC20) ont viré au rouge violet; ceci confirme l’alcalinité du milieu suite à la production d’ammoniac après catalyse de l’urée par l’uréase produite par nos souches.  Après l’addition des deux réactif NR1 et NR2 pour les tubes de milieu bouillon nitraté déjà ensemencés par les souches d’actinobactéries (ND101, NA44,SC20);seul le tube correspond à la souches ND101 qui a viré vers le rouge; ceux qui indique que cette souche a produit la nitrate réductase.  Pour les deux autre souches NA44 et SC20 aucun virage n’a été observé mais l’addition de quelque Mg de poudre de zinc nous a aidé à confirmer le résultat positif de la présence d’une activité nitrate réductase.
  • 20. 20 Discussions  la présence d’un halo clair autour des colonies dans les deux milieu « Gausse » et « Gélose au lait écrémé » signifié que les deux substrat « Amidon » et « Casiéne » ont été dégradé par les deux enzymes « Amylase » et « Caséinase » respectivement produites par nos trois souches d’actinobactéries (NA44,ND101,SC20),  L’halo opaque qui a été manifesté autour des colonies dans les deux milieu « T ween80 » et « Gélose au jaune d’œuf » indique la présence de l’activité estérasique et lécithinasique respectivement chez les trois souches d’actinobactéries testées.  L’apparition d’halo jaunâtre dans le milieu CMC montre que nos souches d’actinobactéries ont une activité cellulolytique.  Noircissement du milieu « Gélose à la tyrosine » s’explique par l’hydrolyse de L-tyrosine et la production de la milanine.  L’halo clair présenté chez les deux souches NA44 et SC20 sur le milieu « Gélose à la gélatine » désigne une activé gélatinase positive ,le résultat négatif de cette activité chez la souche ND101 se traduit par l’absence d’une zone autour des colonies.
  • 21. 21 CONCLUSION  Les trois souches d’actinobactéries (NA44, ND101 et SC20) présentent plusieurs activités enzymatiques (Amylolytique,cellulolytique,caséinase,estérasique, lécitinasique, tyrosinase, uréasique, nitrate réductase).  L’activité Amylolytique de deux souches d’actinobactéries (NA44 SC20) est relativement plus élevée par rapport à la souche ND101 .  L’activité gélatinase est présenté chez les deux souches d’actinobactéries (NA44, SC20) cependant la souche d’actinobactérie ND101 n’a pas pu hydrolysée la gélatine.
  • 22.  L’identification des souches testées.  Caractérisations des enzymes produites.  Compléter l’étude avec les testes d’autres activités biologiques pour évaluer leurs éventuelles intérêt dans d’autres applications. 22 PERSPECTIVES
  • 23. Merci pour votre attention 23