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Virus de l'hépatite A et E Virus et marqueurs diagnostiques Vincent THIBAULT Laboratoire de Virologie Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière Assistance Publique Hôpitaux de Paris
Hépatites virales parentéral non A, non B féco-oral mode de transmission préférentiel B 1965 D 1977 A 1972 F, G, TTV, autres… C 1990 E 1991
Historique VHA ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Virus de l'hépatite A
Virus de l’Hépatite A ARN (+) Vpg Capside 27-32nm ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
3D  (POL) 3C  (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1  prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales IRES Traduction         VP1 VP3 VP2 VP4 2A Protéines de surface immunogénicité 3D  (POL) 3C  (PRO) 2C 2B VP1 VP3 VP2 3 A-B VP4 2A poly- protéine 2 227 AA ? Liaison NTP Hélicase Vpg Protéase ARN Polymérase Réplication VP1 VP3 VP2 VP4 2A VP0 Maturation finale X5 – X12
Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules Relargage Membrane cellulaire Réticulum  endoplasmique Espace  de Disse Canalicule biliaire P3 P2 P1 Traduction Synthèse  de la polyprotéine + - - + Réplication Maturation Libération du génome Attachement Empaquetage
VHA : physiopathologie ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Propriétés Physiques du VHA Virus  très  Stable HYGIENE
Variabilité génétique ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],3D  (POL) 3C  (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1  prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales
Génotypes et phylogénie IV Nonhuman primate, Philippines  V Nonhuman primate, Kenya VI  Nonhuman primate, Indonesia D'après Nainan et al. 2006 Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79  Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates in the VP1/P2B region (315-bp fragment). VP1/P2A Génotypes :  >15% variations Sous types : 7.5% variations
Répartition mondiale des génotypes Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en  rouge .  Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en  vert .  Cristina J, Costa-Mattioli M.  Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
VHA : épidémiologie http://wwwn.cdc.gov/travel/image.ashx?i=255
VHA : Paramètres Biologiques Semaines 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24 protection contre réinfection  Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique)  Symptomes Ictère Ag foie VHA Sang VHA Selles IgM IgG
VHA : Marqueurs disponibles ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Marqueurs indirects (+++) (ELISA) Marqueurs directs (plus spécialisé)
IgM HAV uniquement à bon escient ! ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887 82 % 11 % 1 % Faux positifs
Diagnostic ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
Hépatite A : le vaccin virus inactivé ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17
Difficultés diagnostiques En routine · Adresser prélèvements au  Centre national de référence du VHA Pr E Dussaix Laboratoire de virologie Hôpital Paul Brousse 12-14 av Paul Vaillant Couturier 94804 Villejuif cedex Tel : 01 45 59 37 21 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
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Historique VHE ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
 
VHE Virus non enveloppé Sphérique (SRV) Surface irrégulière Capside 27-34 nm Symétrie icosaédrique ARN simple brin hélice droite polarité + 7,5kb poly-A extrémité 3’ Stabilité Au laboratoire : instable(-70 à +8°C) Décongélation/congélation Tractus GI : stable (pH) Famille :  Hepeviridae Genre :  Hepevirus
Organisation génomique ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Non structurales Structurales 28 5109 7124 5’ NC 3’NC Poly-A ARN polarité +  7 200 nt Protéines immunogènes DIAGNOSTIC MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF3 ORF2 Génotypes 1-3
Hétérogénéité génétique ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains, 1 2 3 4 1a 1b 1c 1e 1d 0.05 4d 4c 4b 4a 4e 3f 3e 3c 3d 3b 3a D'après Lu et al. Rev. Med. Virol. 2006;16:5-36 Inde, Népal, Birmanie, Japon, Espagne Chine, Pakistan, Bengladesh Chine, Inde, Nepal, Russie Maroc, Algérie Algérie, Namibie, Afrique C. Mexico, Nigeria US, Japon, Corée, NL + porc Japon + porc NL (porc) Taiwan (porc) France, UK, Japon, Espagne + porc Espagne, UK, Grèce, NL, Japon + porc Chine, Taiwan Chine, Taiwan Japon, Vietnam Chine (porc) Inde (porc) Génotype < 20% hétérogénéité ORF2
Similarités des souches humaines et animales Borgen et al.  BMC Infectious Diseases  2008,  8 :61 Genetic relatedness between HEV strains from human and non-human sources and from various countries . Minimal spanning trees of 81 sequences of 148 nucleotides HEV RNA showing genetic distances between genotype 3 HEV strains from humans and animals.  Dutch cases are marked with ID numbers inside the colored circles.
 
Culture et Modèles animaux ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
HEV – virémie- transmission Matsubayashi K, et al. Transfusion. 2008 Jul;48(7):1368-75.  Concentré de plaquettes à J0  Transfusé à un homme de  64 ans traité pour Lymphome non-Hodgkinien par GM autologue serum salive selle IgG IgM
VHE : Paramètres Biologiques Jours 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200 Titre peu élevé protection contre réinfection ?   Symptomes Ictère VHE Sang VHE Selles IgM IgG
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Stratégie Diagnostique
Spécificité et Sensibilité des ELISAs ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Myint et al. JCM, 2006, p. 1581–1583
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Stratégie Diagnostique Se donner les moyens de faire le diagnostic Diagnostic Direct Recherche du  génome  sur  prélèvements  sang  et  selles Diagnostic Indirect Recherche de  l'immunité  antivirale IgM  anti VHE IgG  anti VHe - - + Immunité ancienne - - +++ Douteux + - - ou + Probable + ++ ++ Certain RT-PCR IgM IgG Diagnostic
Immunodépression, hépatite chronique et stratégie diagnostique Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
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Adresser les prélèvements au  Centre national de référence du VHE Dr E Nicand Laboratoire de biologie HIA Val de Grâce Tel : 01 40 51 40 00 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

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Thibault Vha Vhe Virus Et Marqueurs (1)

  • 1. Virus de l'hépatite A et E Virus et marqueurs diagnostiques Vincent THIBAULT Laboratoire de Virologie Groupe Hospitalier Pitié-Salpêtrière Assistance Publique Hôpitaux de Paris
  • 2. Hépatites virales parentéral non A, non B féco-oral mode de transmission préférentiel B 1965 D 1977 A 1972 F, G, TTV, autres… C 1990 E 1991
  • 3.
  • 5.
  • 6. 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B 1D 1C 1B 3 A-B 2A P1 prot. Capside Vpg 2.5kDa P2 P3 0 7478 1A AAA Structurales Non structurales IRES Traduction         VP1 VP3 VP2 VP4 2A Protéines de surface immunogénicité 3D (POL) 3C (PRO) 2C 2B VP1 VP3 VP2 3 A-B VP4 2A poly- protéine 2 227 AA ? Liaison NTP Hélicase Vpg Protéase ARN Polymérase Réplication VP1 VP3 VP2 VP4 2A VP0 Maturation finale X5 – X12
  • 7. Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules Relargage Membrane cellulaire Réticulum endoplasmique Espace de Disse Canalicule biliaire P3 P2 P1 Traduction Synthèse de la polyprotéine + - - + Réplication Maturation Libération du génome Attachement Empaquetage
  • 8.
  • 9. Propriétés Physiques du VHA Virus très Stable HYGIENE
  • 10.
  • 11. Génotypes et phylogénie IV Nonhuman primate, Philippines V Nonhuman primate, Kenya VI Nonhuman primate, Indonesia D'après Nainan et al. 2006 Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79 Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates in the VP1/P2B region (315-bp fragment). VP1/P2A Génotypes : >15% variations Sous types : 7.5% variations
  • 12. Répartition mondiale des génotypes Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge . Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert . Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
  • 13. VHA : épidémiologie http://wwwn.cdc.gov/travel/image.ashx?i=255
  • 14. VHA : Paramètres Biologiques Semaines 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24 protection contre réinfection Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique) Symptomes Ictère Ag foie VHA Sang VHA Selles IgM IgG
  • 15.
  • 16.
  • 17.
  • 18.
  • 19. Difficultés diagnostiques En routine · Adresser prélèvements au Centre national de référence du VHA Pr E Dussaix Laboratoire de virologie Hôpital Paul Brousse 12-14 av Paul Vaillant Couturier 94804 Villejuif cedex Tel : 01 45 59 37 21 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
  • 20. Grippe aviaire ? SRAS ? Hépatite E ? Hépatite E ?
  • 21.
  • 22.  
  • 23. VHE Virus non enveloppé Sphérique (SRV) Surface irrégulière Capside 27-34 nm Symétrie icosaédrique ARN simple brin hélice droite polarité + 7,5kb poly-A extrémité 3’ Stabilité Au laboratoire : instable(-70 à +8°C) Décongélation/congélation Tractus GI : stable (pH) Famille : Hepeviridae Genre : Hepevirus
  • 24.
  • 25.
  • 26. 301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains, 1 2 3 4 1a 1b 1c 1e 1d 0.05 4d 4c 4b 4a 4e 3f 3e 3c 3d 3b 3a D'après Lu et al. Rev. Med. Virol. 2006;16:5-36 Inde, Népal, Birmanie, Japon, Espagne Chine, Pakistan, Bengladesh Chine, Inde, Nepal, Russie Maroc, Algérie Algérie, Namibie, Afrique C. Mexico, Nigeria US, Japon, Corée, NL + porc Japon + porc NL (porc) Taiwan (porc) France, UK, Japon, Espagne + porc Espagne, UK, Grèce, NL, Japon + porc Chine, Taiwan Chine, Taiwan Japon, Vietnam Chine (porc) Inde (porc) Génotype < 20% hétérogénéité ORF2
  • 27. Similarités des souches humaines et animales Borgen et al. BMC Infectious Diseases 2008, 8 :61 Genetic relatedness between HEV strains from human and non-human sources and from various countries . Minimal spanning trees of 81 sequences of 148 nucleotides HEV RNA showing genetic distances between genotype 3 HEV strains from humans and animals. Dutch cases are marked with ID numbers inside the colored circles.
  • 28.  
  • 29.
  • 30. HEV – virémie- transmission Matsubayashi K, et al. Transfusion. 2008 Jul;48(7):1368-75. Concentré de plaquettes à J0 Transfusé à un homme de 64 ans traité pour Lymphome non-Hodgkinien par GM autologue serum salive selle IgG IgM
  • 31. VHE : Paramètres Biologiques Jours 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200 Titre peu élevé protection contre réinfection ? Symptomes Ictère VHE Sang VHE Selles IgM IgG
  • 32.
  • 33.
  • 34. Performance des tests J. Izopet Comm. Pers. CVV 2008 Panels 50 sérums ARN HEV (+), G3 406 sérums IgG ARN HEV (-)
  • 35. Stratégie Diagnostique Se donner les moyens de faire le diagnostic Diagnostic Direct Recherche du génome sur prélèvements sang et selles Diagnostic Indirect Recherche de l'immunité antivirale IgM anti VHE IgG anti VHe - - + Immunité ancienne - - +++ Douteux + - - ou + Probable + ++ ++ Certain RT-PCR IgM IgG Diagnostic
  • 36. Immunodépression, hépatite chronique et stratégie diagnostique Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
  • 37. VHE et vaccination Risque cumulé d'un premier épisode d'hépatite E Moyenne géométrique du taux d'anticorps anti-VHE 20 μg d'antigène rHEV (capside exprimée dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur 0.5 mg d'hydroxyde d'aluminum. 3 injections Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9 Efficacité : 95,5% après 3 doses
  • 38. Adresser les prélèvements au Centre national de référence du VHE Dr E Nicand Laboratoire de biologie HIA Val de Grâce Tel : 01 40 51 40 00 http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste