1. •Antígeno es una sustancia de alto peso molecular, con cierta
rigidez estructural y que tiene la particularidad de ser
parcialmente “metabolizado” por células especializadas
llamadas macrófagos, por lo tanto es capaz de generar una
respuesta inmune en un organismo que la detecte como un
agente extraño.

2. • Anticuerpo es una glicoproteína, producida
por linfocitos B activados, llamados células
plasmáticas, como respuesta a la presencia de
un antígeno en el organismo, a su vez los
anticuerpos pueden ser producidos por líneas
celulares in vitro, como es el caso de la
producción de anticuerpos monoclonales.
Dichos anticuerpos llamados también
inmunoglobulinas, se presentan en cinco
clases principales, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, que
se diferencian entre sí por sus características
físicas, químicas y biológicas.

10. • La reacción antígeno- anticuerpo
Las zonas del antígeno que se unen específicamente
con el anticuerpo o con el receptor de un linfocito, se
denominan determinantes antigénicos.
Cada antígeno puede presentar varios determinantes
antigénicos diferentes que estimulan la producción
de anticuerpos y la respuesta de los linfocitos T.
Los determinantes antigénicos con los responsables de
la especificidad de la respuesta inmunitaria.

11. • Las reacciones mas importantes entre un
antígeno y un anticuerpo son las siguientes:
1. Precipitación: Al unirse antígenos y anticuerpos
solubles, forman agregados insolubles que
precipitan, lo que inactiva a los antígenos.
2. Aglutinación: Los anticuerpos se unen a
antígenos situados en la superficie de una célula.
Como los anticuerpos tienen dos puntos de
unión, los microorganismos forman agregados y
ya no pueden infectar otras células.
3. Neutralización: Anticuerpos situados en la
membrana plasmática bloquean la acción de los
antígenos contra la célula. Así los antígenos no se
pueden unir a las células y matarlas.

16. • La técnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent
Assay) se basa en la detección de un antígeno
inmovilizado sobre una fase sólida mediante
anticuerpos que directa o indirectamente producen
una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante,
puede ser medido espectrofotométricamente.
• Este principio tiene muchas de las propiedades de un
inmunoensayo ideal : es versátil, robusto, simple en su
realización, emplea reactivos económicos y consigue,
mediante el uso de la fase sólida, de una separación
fácil entre la fracción retenida y la fracción libre.

17. DISPOSITIVOS EMPLEADOS EN ELISA
• Se han ensayado numerosas fases sólidas, desde
los tubos de cristal de los orígenes a las actuales
microplacas de 96 pocillos de plástico tratado
para aumentar su capacidad de absorción de
moléculas y con fondos de pocillo ópticamente
claros para poder realizar las medidas de
densidad óptica en instrumentos específicos,
espectrofotómetros de lectura de placas que han
recibido el nombre de lectores ELISA.

18. DISPOSITIVOS EMPLEADOS EN ELISA
• Los lectores ELISA son espectrofotómetros
capaces de realizar lecturas seriadas de cada uno
de los pocillos de la placa ELISA.
• A diferencia de un espectrofotómetro
convencional, con capacidad de leer todas las
longitudes de onda del ultravioleta y el visible de
manera continua, los lectores de ELISA disponen
de sistemas de filtros que sólo permiten la
lectura de una o pocas longitudes de onda. Son
las que se corresponden con las necesarias para
determinar la densidad óptica de los cromógenos
más comúnmente utilizados.

20. ENZIMOINMUNOENSAYO
•En el ELISA, la reacción Ag-Ab se pone de manifiesto
por la acción de una enzima conjugada a los
inmunocomplejos. La acción enzimática se revela por
colorimetría.
•Hay diferentes variantes: indirecto, en sándwich,
competitivo.
•Aplicaciones: detección de anticuerpos anti-
agentes infecciosos (p. ej.: VIH), detección de
anticuerpos en enfermedades autoinmunes (p. ej.:
anti-DNA), detección de citocinas, etc.…

21. Las 4 fases de un ensayo ELISA son las
siguientes :
1.Conjugación del anticuerpo o del antígeno con
un enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina,...).
El anticuerpo conjugado al enzima se emplea
en los ensayos directos e indirectos, sándwich,
etc.. El antígeno marcado se emplea en
ensayos de competición de antígeno.

22. 2. Unión del antígeno (o del anticuerpo) a los pocillos.
La unión de anticuerpos o antígenos se realiza con
facilidad a la superficie de plásticos tratados que
tienen gran afinidad por proteínas.

23. 3. Formación de una o más capas de inmunocomplejos.
En el caso del antígeno unido a la placa se puede
detectar mediante un anticuerpo anti-antígeno
marcado (ELISA directo) o empleando un anticuerpo
primario anti-antígeno y un secundario anti primario
marcado (ELISA indirecto).

24. 4. Revelado de la reacción enzimática. Después de un
lavado para eliminar todos las moléculas marcadas
no fijadas en forma de inmunocomplejos se añade
el sustrato enzimático en solución. Se deja
reaccionar y se lee la densidad óptica (D.O.)
mediante espectrofotometría. En el esquema se
muestra la reacción asociada a un ELISA directo .