Tilapia agua dulce

1. Clasificación Taxonomíca
Filo: Cordados
Subfilo: Vertebrados
Gigaclase: Actinopterygi
superclase: Actinopterigio
Clase: Teleósteos
Orden: Salmoniformes
Familia: Salmónidos

2. Especies de PECES DE LA Familia DE Salmónidos

3. Enfermedad infección por el alfavirus de los
salmónidos
La infección AVS (alfavirus de los salmónidos):
¿Cuántos subtipos tiene ?
• Es causada por cualquier subtipo de AVS, dividiéndose en 6
subtipos (SAV1-SAV6)
¿Qué genero y familia pertenece?
• Pertenece al género Alphavirus y de la familia Togaviridae,
dividiéndose en 6 subtipos (SAV1-SAV6)
¿Qué genoma tiene AVS?
• Es un virus de genoma ARN
¿Cuanto mide y pesa?
• Mide 70nm de diámetro
• Pesa de ~12 kb
¿Forma de transmisión?
• Forma horizontal y ataca a peces enfermos
¿AVS que caracteristica tiene?
• Esta enfermedad se caracteriza por la perdida y necrosis de
tejido pancreático, así como lesiones en músculo esqueletico
y cardiaco, su mortalidad es mayor del 50%

4. En la siguiente tabla se muestran los subtipos de AVS, hospedador y País. (abreviaturas:
AS= agua salada; AD = agua dulce; EP = enfermedad pancreática; ES = enfermedad del
sueño)
Subtipo AVS Hospedador y medio País
AVS 1 (EP) Salmón del
Atlántico (AS)
Trucha arco
Iris(AD)
Irlanda, Reino Unido
(Irlanda del Norte, Escocia )
AVS2
AVS3
Marino(PD)
Trucha arco
iris (AD)
Salmón del
Atlántico (AS)
Salmón del
Atlántico (AS)
Francia, Alemania, Italia,
España, Suiza, Polonia,
Reino Unido (Inglaterra,
Escocia ) Noruega, Reino
Unido (Escocia )
AVS3(PD) Trucha arco
Iris(AD)
Salmon del
Atlantico (AS)
Noruega
AVS4(PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Irlanda, Reino Unido
(Irlanda del Norte, Escocia )
AVS 5(PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Reino Unido (Escocia )
AVS 6 (PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Irlanda

5. Métodos de diagnóstico para la identificación de la
infección AVS en salmónidos
 Histologia e inmunohistoquímica
 Biologia molecular
 Cultivo celular
Según la OMSA:
Para ello se debe obtener ejemplares de peces enfermos o débiles que tenga un
comportamiento anormal, que se encuentren en el fondo del tanque, que tengan
características morfológicas alargados y delgados, llamado peces enanos

6. DIAGNÓSTICO CLÍNICO
Es importante saber diferenciar un pez sano de un pez enfermo

7. Métodos de diagnóstico para la identificación de la
infección AVS en salmónidos
¿Qué órganos se selecciona para
realizar diagnóstico Histologia,
Biologia molecular y Cultivo
celular
Ejemplar: Trucha
arcoiris
También: branquias y corazón

8. Histología para infección AVS en salmónidos
Preparacion de los cortes de tejido se sigue el siguiente procedimiento
1. Fijar los tejidos en formalina neutra al 10% tamponada con fosfato durante al
menos 1 día.
2. Deshidratar los tejidos en etanol gradado.
3. Aclarar en xileno y posterior inclusión en parafina, siguiendo los protocolos
estándar.
4. Calentar cortes de aproximadamente 3 µm de espesor a 56–58°C (máximo de 60°C)
durante 20 minutos.
5. Desparafinar los cortes en xileno.
6. Rehidratar con etanol gradado.
7. Tintar con hematoxilina y eosina para histopatología, utilizando portaobjetos
recubiertos de poli-L-lisina.

9. Cultivo Celular para infección AVS en salmónidos
• Los cultivos celulares CHSE-214 son comúnmente empleados para el
aislamiento primario del AVS
• Las células CHSE-214 se cultivan a 20°C en medio esencial mínimo de Eagle
(EMEM) con aminoácidos no esenciales y tampón HEPES (ácido N-2-
hidroxietil-piperazina-N-2-etanosulfónico) 0,01 M, o en medio de cultivo
celular L-15 de Leibovitz, ambos complementados con suero fetal bovino (FBS)
al 5% o 10%, y L-glutamina 4 mM.
• Para el aislamiento del virus, las células se cultivan en frascos de cultivo tisular
o en placas de cultivo celular de varios pocillos.

10. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos
• Los cebadores delineados a continuación, diseñados para la RT-PCR en tiempo real y
la RT-PCR con secuenciación, tienen la capacidad de identificar todos los genotipos
conocidos del virus de la anemia infecciosa del salmón (AVS).
• La RT-PCR se emplea para la detección del AVS a partir del ARN total, extraído de
órganos o tejidos recomendados ya mencionados anteriormente.
• Para la extracción de ARN, se pueden emplear extractores automáticos y
semiautomáticos de ácido nucleico, así como diversos kits manuales de extracción
de ARN.
• En términos de equipos, se pueden utilizar diferentes kits de RT-PCR y máquinas de
PCR en tiempo real, con el programa de PCR adaptado según el kit y el equipo de
PCR en tiempo real específicos del laboratorio

11. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos -RT-PCR en tiempo real
Secuencias de cebador y sonda Tipo de
prueba
Segmento
genómico
Tamaño de
producto
Referencia
QnsP1F: 5’-CCG-GCC-CTG-AAC-CAG-
TT-3’ QnsP1R: 5’-GTA-GCC-AAG-TGG-
GAG-AAA-GCT-3’ QnsP1probe:
5’FAM-CTG-GCC-ACC-ACT-TCG-
AMGB3’ (Taqman®probe)
RT-PCR en
tiempo
real
QnsP1 107 bp Hodneland
et al., 2006
En el Laboratorio de Referencia de la OIE, las condiciones recomendadas para la RT-PCR en tiempo real son las siguientes:
50°C durante 10 minutos, 95°C durante 3 minutos y 40 ciclos de (95°C durante 10 segundos, 60°C durante 20 segundos).

12. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos -RT-PCR convencional
En el Laboratorio de Referencia de la OIE, las condiciones recomendadas). se sigue el siguiente
programa: 50°C durante 30 minutos, 95°C durante 15 minutos y 45 ciclos de (94°C durante 60 segundos,
55°C durante 45 segundos, 72°C durante 60 segundos). En cada experimento de RT-PCR, se deben
incorporar los controles esenciales, incluyendo el control negativo de extracción, el control positivo con
molde y el control sin molde.
Secuencias de cebador y sonda Tipo de
prueba
Segmento
genómico
Tamaño
de
producto
Referencia
E2F: 5’-CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-
ATG-3’ E2R: 5’-CCT-CAT-AGG-TGA-
TCG-ACG-GCA-G-3’
RT-PCR E2 516 107
bp
Fringuelli et
al., 2008

13. Control y Prevención
• Vacunación: Actualmente, se dispone de una vacuna comercial. Esta vacuna se
introdujo en 2007 y se utiliza mucho en piscifactorías de salmón del Atlántico
de zonas endémicas de Noruega, Irlanda y Escocia. Esta vacuna contiene el
subtipo 1 del AVS inactivado.
• Tratamiento con sus sustancias químicas: No se dispone de tratamientos con
sustancias químicas.
• Inmunoestimulación: No se dispone de inmunoestimulación.

14. Control y Prevención
Prácticas generales de menaje:
• Para evitar la infección por el AVS, deben aplicarse unas buenas prácticas de higiene
generales:
• Utilizar lugares adecuados para el cultivo de peces
• Separar generaciones
• Poblar con peces de calidad
• Retirar los peces muertos
• Limpiar con regularidad los tanques y los compartimientos
• Controlar los parásitos y otros agentes patógenos
• Manipular cuidadosamente los peces.
• Si una piscifactoría ha resultado infectada, la mortalidad puede reducirse imponiendo una
parada general de la manipulación de los peces así como una parada general de la
alimentación.

15. Conclusiones
• La implementación de técnicas moleculares, como la RT-PCR en tiempo real
utilizando cebadores específicos del gen nsP1 y la secuenciación del gen E2, ha
demostrado ser una herramienta eficaz y sensible para la detección del virus de la
anemia infecciosa del salmón (AVS). Estas técnicas permiten una identificación
precisa de los genotipos del AVS, facilitando el análisis genómico y
epidemiológico.
• La aplicación de técnicas inmunohistoquímicas ofrece la ventaja de visualizar la
presencia del AVS a nivel celular en tejidos específicos.
• El cultivo celular, con un enfoque en líneas celulares como CHSE-214, se presenta
como una herramienta esencial para el aislamiento primario del AVS.

16. Recomendaciones
• Establecer programas de monitoreo periódico utilizando técnicas moleculares
como la RT-PCR en tiempo real para detectar la presencia de alfavirus esto
facilitará la identificación temprana de infecciones, permitiendo una respuesta
rápida y efectiva para controlar la propagación del virus.
• Mejorar y optimizar las técnicas de cultivo celular, especialmente utilizando líneas
celulares específicas para los peces salmónidos, con el fin de facilitar el
aislamiento y la observación de efectos citopáticos asociados a alfavirus, esto
contribuirá a un mejor entendimiento de la replicación viral y la patogénesis en un
entorno controlado.
• Emplear enfoques diagnósticos multimodales que combinen técnicas moleculares,
cultivo celular y métodos inmunohistoquímicos para obtener una evaluación
completa de la infección por alfavirus, esta estrategia permitirá una
caracterización más precisa de la presencia viral, su genotipo y los efectos
patológicos asociados en los salmónidos.

17. Referencia Bibliográficas
• Christie, K. E., Fyrand, K., Holtet, L., & Rowley, H. M. (1998). Aislamiento del virus de la enfermedad del
páncreas del salmón del Atlántico de piscifactoría, Salmo salar L., in Norway. Journal of Fish Diseases, 21(5),
391-394. https://www.cabdirect.org/cabdirect/abstract/19992201562
• Colaboradores de Wikipedia. (2023, 23 mayo). Salmonidae. Wikipedia, la enciclopedia libre.
https://es.wikipedia.org/wiki/Salmonidae
• Graham, DA, Fringuelli, E., Wilson, C., Rowley, HM, Brown, A., Rodger, H., ... y Ruane, NM (2009).
Estudios longitudinales prospectivos de infecciones por alfavirus de salmónidos en dos granjas de
salmón del Atlántico en Irlanda; evidencia de persistencia viral. Revista de enfermedades de los
peces , 33 (2), 123-135. https://acortar.link/MFrzcf
• Deperasińska, I., Schulz, P., & Siwicki, A. K. (2018). Salmonid alphavirus (SAV). Journal of Veterinary
Research, 62(1), 1. https://sciendo.com/downloadpdf/journals/jvetres/62/1/article-p1.xml
• Jansen, MD, Taksdal, T., Wasmuth, MA, Gjerset, B., Brun, E., Olsen, AB, ... y Sandberg, M. (2010).
Alfavirus de salmónidos (SAV) y enfermedad del páncreas (PD) en salmón del Atlántico, Salmo salar
L., en sitios de agua dulce y de mar en Noruega de 2006 a 2008. Journal of fish technologies , 33 (5),
391-402. https://acortar.link/oggZp3
• Muller, Edwin (1973). Misterios del Salmón. Documenta, Ministerio de Pesquería Nº25: 56-58.
https://repositorio.imarpe.gob.pe/handle/20.500.12958/3868

18. Referencia Bibliográficas
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Chile]. https://repositorio.uchile.cl/handle/2250/131110
• Petterson, E., Stormoen, M., Evensen, Ø., Mikalsen, A. B., & Haugland, Ø. (2013). La infección natural del salmón del
Atlántico (Salmo salar L.) con alfavirus 3 de salmónidos genera numerosos mutantes de deleción viral. Journal of
General Virology, 94(9), 1945-1954.
https://www.microbiologyresearch.org/content/journal/jgv/10.1099/vir.0.052563-0
• Soto, M. (2013). Inducción y evaluación de la respuesta inmune humoral del Salmón del Atlántico (Salmo salar L.)
frente a variantes de las proteínas recombinantes E1 y E2 de Alfavirus de salmónidos (SAV) [Tesis de Magister de
Biotecnologia, Universidad Andrés Bello].
• Taksdal, T., Olsen, AB, Bjerkås, I., Hjortaas, MJ, Dannevig, BH, Graham, DA y McLoughlin, MF (2007). Enfermedad del
páncreas en salmón del Atlántico, Salmo salar L., y trucha arco iris, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), de
piscifactoría en Noruega. Revista de enfermedades de los peces , 30 (9), 545-558. https://acortar.link/ITd4SR
• World Organisation for Animal Health. (2021). Enfermedad del páncreas del salmón (alfavirus de los salmónidos) -
OMSA - Organización Mundial de Sanidad Animal. OMSA - Organización Mundial de Sanidad Animal.
https://www.woah.org/es/enfermedad/enfermedad-del-pancreas-del-salmon-alfavirus-de-los-salmonidos/.
https://www.woah.org/es/enfermedad/enfermedad-del-pancreas-del-salmon-alfavirus-de-los-salmonidos/
• WORMS - World Register of Marine Species - Salmonidae Jarocki or Schinz, 1822. (s. f.).
https://www.marinespecies.org/aphia.php?p=taxdetails&id=125587