3. Enfermedad infección por el alfavirus de los
salmónidos
La infección AVS (alfavirus de los salmónidos):
¿Cuántos subtipos tiene ?
• Es causada por cualquier subtipo de AVS, dividiéndose en 6
subtipos (SAV1-SAV6)
¿Qué genero y familia pertenece?
• Pertenece al género Alphavirus y de la familia Togaviridae,
dividiéndose en 6 subtipos (SAV1-SAV6)
¿Qué genoma tiene AVS?
• Es un virus de genoma ARN
¿Cuanto mide y pesa?
• Mide 70nm de diámetro
• Pesa de ~12 kb
¿Forma de transmisión?
• Forma horizontal y ataca a peces enfermos
¿AVS que caracteristica tiene?
• Esta enfermedad se caracteriza por la perdida y necrosis de
tejido pancreático, así como lesiones en músculo esqueletico
y cardiaco, su mortalidad es mayor del 50%
4. En la siguiente tabla se muestran los subtipos de AVS, hospedador y País. (abreviaturas:
AS= agua salada; AD = agua dulce; EP = enfermedad pancreática; ES = enfermedad del
sueño)
Subtipo AVS Hospedador y medio País
AVS 1 (EP) Salmón del
Atlántico (AS)
Trucha arco
Iris(AD)
Irlanda, Reino Unido
(Irlanda del Norte, Escocia )
AVS2
AVS3
Marino(PD)
Trucha arco
iris (AD)
Salmón del
Atlántico (AS)
Salmón del
Atlántico (AS)
Francia, Alemania, Italia,
España, Suiza, Polonia,
Reino Unido (Inglaterra,
Escocia ) Noruega, Reino
Unido (Escocia )
AVS3(PD) Trucha arco
Iris(AD)
Salmon del
Atlantico (AS)
Noruega
AVS4(PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Irlanda, Reino Unido
(Irlanda del Norte, Escocia )
AVS 5(PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Reino Unido (Escocia )
AVS 6 (PD) Salmon del
Atlantico (AS)
Irlanda
5. Métodos de diagnóstico para la identificación de la
infección AVS en salmónidos
Histologia e inmunohistoquímica
Biologia molecular
Cultivo celular
Según la OMSA:
Para ello se debe obtener ejemplares de peces enfermos o débiles que tenga un
comportamiento anormal, que se encuentren en el fondo del tanque, que tengan
características morfológicas alargados y delgados, llamado peces enanos
7. Métodos de diagnóstico para la identificación de la
infección AVS en salmónidos
¿Qué órganos se selecciona para
realizar diagnóstico Histologia,
Biologia molecular y Cultivo
celular
Ejemplar: Trucha
arcoiris
También: branquias y corazón
8. Histología para infección AVS en salmónidos
Preparacion de los cortes de tejido se sigue el siguiente procedimiento
1. Fijar los tejidos en formalina neutra al 10% tamponada con fosfato durante al
menos 1 día.
2. Deshidratar los tejidos en etanol gradado.
3. Aclarar en xileno y posterior inclusión en parafina, siguiendo los protocolos
estándar.
4. Calentar cortes de aproximadamente 3 µm de espesor a 56–58°C (máximo de 60°C)
durante 20 minutos.
5. Desparafinar los cortes en xileno.
6. Rehidratar con etanol gradado.
7. Tintar con hematoxilina y eosina para histopatología, utilizando portaobjetos
recubiertos de poli-L-lisina.
9. Cultivo Celular para infección AVS en salmónidos
• Los cultivos celulares CHSE-214 son comúnmente empleados para el
aislamiento primario del AVS
• Las células CHSE-214 se cultivan a 20°C en medio esencial mínimo de Eagle
(EMEM) con aminoácidos no esenciales y tampón HEPES (ácido N-2-
hidroxietil-piperazina-N-2-etanosulfónico) 0,01 M, o en medio de cultivo
celular L-15 de Leibovitz, ambos complementados con suero fetal bovino (FBS)
al 5% o 10%, y L-glutamina 4 mM.
• Para el aislamiento del virus, las células se cultivan en frascos de cultivo tisular
o en placas de cultivo celular de varios pocillos.
10. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos
• Los cebadores delineados a continuación, diseñados para la RT-PCR en tiempo real y
la RT-PCR con secuenciación, tienen la capacidad de identificar todos los genotipos
conocidos del virus de la anemia infecciosa del salmón (AVS).
• La RT-PCR se emplea para la detección del AVS a partir del ARN total, extraído de
órganos o tejidos recomendados ya mencionados anteriormente.
• Para la extracción de ARN, se pueden emplear extractores automáticos y
semiautomáticos de ácido nucleico, así como diversos kits manuales de extracción
de ARN.
• En términos de equipos, se pueden utilizar diferentes kits de RT-PCR y máquinas de
PCR en tiempo real, con el programa de PCR adaptado según el kit y el equipo de
PCR en tiempo real específicos del laboratorio
11. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos -RT-PCR en tiempo real
Secuencias de cebador y sonda Tipo de
prueba
Segmento
genómico
Tamaño de
producto
Referencia
QnsP1F: 5’-CCG-GCC-CTG-AAC-CAG-
TT-3’ QnsP1R: 5’-GTA-GCC-AAG-TGG-
GAG-AAA-GCT-3’ QnsP1probe:
5’FAM-CTG-GCC-ACC-ACT-TCG-
AMGB3’ (Taqman®probe)
RT-PCR en
tiempo
real
QnsP1 107 bp Hodneland
et al., 2006
En el Laboratorio de Referencia de la OIE, las condiciones recomendadas para la RT-PCR en tiempo real son las siguientes:
50°C durante 10 minutos, 95°C durante 3 minutos y 40 ciclos de (95°C durante 10 segundos, 60°C durante 20 segundos).
12. Diagnóstico Molecular para infección AVS en
salmónidos -RT-PCR convencional
En el Laboratorio de Referencia de la OIE, las condiciones recomendadas). se sigue el siguiente
programa: 50°C durante 30 minutos, 95°C durante 15 minutos y 45 ciclos de (94°C durante 60 segundos,
55°C durante 45 segundos, 72°C durante 60 segundos). En cada experimento de RT-PCR, se deben
incorporar los controles esenciales, incluyendo el control negativo de extracción, el control positivo con
molde y el control sin molde.
Secuencias de cebador y sonda Tipo de
prueba
Segmento
genómico
Tamaño
de
producto
Referencia
E2F: 5’-CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-
ATG-3’ E2R: 5’-CCT-CAT-AGG-TGA-
TCG-ACG-GCA-G-3’
RT-PCR E2 516 107
bp
Fringuelli et
al., 2008
13. Control y Prevención
• Vacunación: Actualmente, se dispone de una vacuna comercial. Esta vacuna se
introdujo en 2007 y se utiliza mucho en piscifactorías de salmón del Atlántico
de zonas endémicas de Noruega, Irlanda y Escocia. Esta vacuna contiene el
subtipo 1 del AVS inactivado.
• Tratamiento con sus sustancias químicas: No se dispone de tratamientos con
sustancias químicas.
• Inmunoestimulación: No se dispone de inmunoestimulación.
14. Control y Prevención
Prácticas generales de menaje:
• Para evitar la infección por el AVS, deben aplicarse unas buenas prácticas de higiene
generales:
• Utilizar lugares adecuados para el cultivo de peces
• Separar generaciones
• Poblar con peces de calidad
• Retirar los peces muertos
• Limpiar con regularidad los tanques y los compartimientos
• Controlar los parásitos y otros agentes patógenos
• Manipular cuidadosamente los peces.
• Si una piscifactoría ha resultado infectada, la mortalidad puede reducirse imponiendo una
parada general de la manipulación de los peces así como una parada general de la
alimentación.
15. Conclusiones
• La implementación de técnicas moleculares, como la RT-PCR en tiempo real
utilizando cebadores específicos del gen nsP1 y la secuenciación del gen E2, ha
demostrado ser una herramienta eficaz y sensible para la detección del virus de la
anemia infecciosa del salmón (AVS). Estas técnicas permiten una identificación
precisa de los genotipos del AVS, facilitando el análisis genómico y
epidemiológico.
• La aplicación de técnicas inmunohistoquímicas ofrece la ventaja de visualizar la
presencia del AVS a nivel celular en tejidos específicos.
• El cultivo celular, con un enfoque en líneas celulares como CHSE-214, se presenta
como una herramienta esencial para el aislamiento primario del AVS.
16. Recomendaciones
• Establecer programas de monitoreo periódico utilizando técnicas moleculares
como la RT-PCR en tiempo real para detectar la presencia de alfavirus esto
facilitará la identificación temprana de infecciones, permitiendo una respuesta
rápida y efectiva para controlar la propagación del virus.
• Mejorar y optimizar las técnicas de cultivo celular, especialmente utilizando líneas
celulares específicas para los peces salmónidos, con el fin de facilitar el
aislamiento y la observación de efectos citopáticos asociados a alfavirus, esto
contribuirá a un mejor entendimiento de la replicación viral y la patogénesis en un
entorno controlado.
• Emplear enfoques diagnósticos multimodales que combinen técnicas moleculares,
cultivo celular y métodos inmunohistoquímicos para obtener una evaluación
completa de la infección por alfavirus, esta estrategia permitirá una
caracterización más precisa de la presencia viral, su genotipo y los efectos
patológicos asociados en los salmónidos.
17. Referencia Bibliográficas
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páncreas del salmón del Atlántico de piscifactoría, Salmo salar L., in Norway. Journal of Fish Diseases, 21(5),
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• Colaboradores de Wikipedia. (2023, 23 mayo). Salmonidae. Wikipedia, la enciclopedia libre.
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Alfavirus de salmónidos (SAV) y enfermedad del páncreas (PD) en salmón del Atlántico, Salmo salar
L., en sitios de agua dulce y de mar en Noruega de 2006 a 2008. Journal of fish technologies , 33 (5),
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• Muller, Edwin (1973). Misterios del Salmón. Documenta, Ministerio de Pesquería Nº25: 56-58.
https://repositorio.imarpe.gob.pe/handle/20.500.12958/3868
18. Referencia Bibliográficas
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poblaciones de peces silvestres y asilvestrados, Región de Los Lagos [Tesis de Médico veterinario, Universidad de
Chile]. https://repositorio.uchile.cl/handle/2250/131110
• Petterson, E., Stormoen, M., Evensen, Ø., Mikalsen, A. B., & Haugland, Ø. (2013). La infección natural del salmón del
Atlántico (Salmo salar L.) con alfavirus 3 de salmónidos genera numerosos mutantes de deleción viral. Journal of
General Virology, 94(9), 1945-1954.
https://www.microbiologyresearch.org/content/journal/jgv/10.1099/vir.0.052563-0
• Soto, M. (2013). Inducción y evaluación de la respuesta inmune humoral del Salmón del Atlántico (Salmo salar L.)
frente a variantes de las proteínas recombinantes E1 y E2 de Alfavirus de salmónidos (SAV) [Tesis de Magister de
Biotecnologia, Universidad Andrés Bello].
• Taksdal, T., Olsen, AB, Bjerkås, I., Hjortaas, MJ, Dannevig, BH, Graham, DA y McLoughlin, MF (2007). Enfermedad del
páncreas en salmón del Atlántico, Salmo salar L., y trucha arco iris, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), de
piscifactoría en Noruega. Revista de enfermedades de los peces , 30 (9), 545-558. https://acortar.link/ITd4SR
• World Organisation for Animal Health. (2021). Enfermedad del páncreas del salmón (alfavirus de los salmónidos) -
OMSA - Organización Mundial de Sanidad Animal. OMSA - Organización Mundial de Sanidad Animal.
https://www.woah.org/es/enfermedad/enfermedad-del-pancreas-del-salmon-alfavirus-de-los-salmonidos/.
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• WORMS - World Register of Marine Species - Salmonidae Jarocki or Schinz, 1822. (s. f.).
https://www.marinespecies.org/aphia.php?p=taxdetails&id=125587
