Técnicas Histológicas y Microscopia - Histologia de Ross *Contenido* -Preparación del Tejido -Microscopia --Microscopia Óptica --Microscopia Electrónica *BIBLIOGRAFIA* Ross Histología Texto y Atlas: Correlación con Biología Celular y Molecular, 7a Ed

1. Técnicas Histológicas y Microscopia
Preparación del Tejido
1º Paso: Obtención de la muestra:
 Biopsia; tejido vivo.
 Autopsia; tejido muerto.
 Necropsia; tejido podrido - necrosado.
2º Paso: Fijación:
 En general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclas
de estas;
 El fijador de uso más común es la formalina (solución acuosa de formaldehido al 37%);
 Este fijador no reacciona con los lípidos, por lo tanto es un mal fijador de las
membranas;
3º Paso: Deshidratación:
 Luego después de la fijación, se lava y deshidrata la muestra en una serie de soluciones
alcohólicas de concentración creciente hasta llegar al 100%;
 Después de eso, se utilizan solventes como el xileno o tolueno para extraer el alcohol al
100%
4º Paso: Inclusión:
 Incluir la muestra en la parafina fundida a 60 grados;
 Luego después que la parafina se ha enfriado y endurecido se obterá un bloque
denominado taco;
 Coloca-se el taco en una maquina denominada micrótomo, que se encargará de hacer
cortes de 5 a 15 µm (micras) (1 micra equivale a milésima parte de 1 milímetro);
5º Paso: Coloración:
 Después de los cortes hay que hidratar la muestra con una serie de soluciones
alcohólicas en porción decreciente para que se pueda colorear con hematoxilina (color
azul) y después otra vez deshidratar con una serie de soluciones alcohólicas en porción
creciente para que se pueda colorear con eosina (color rosa).
Microscopia
Microscopia Óptica
 Microscopio de campo claro: es actualmente el microscopio más utilizado por los estudiantes,
ello es el microscopio descendente de los utilizados en el siglo XIX. Sus componentes son los
siguientes:
o Fuente luminosa;
o Condensador;
o Platina;
o Objetivo;
o Ocular.
Las muestras a seren observadas en ese tipo de microscopio tiene que ser extremamente
finas, para que la luz pase a través de ella, y coloreadas con eosina y hematoxilina. Sin eses
pré-requisitos la muestra no se produce grado de contraste suficiente para estudio.

2.  Microscopio de campo escuro: en ese tipo de microscopio, la lente objetiva no capta luz
directa proveniente de la fuente luminosa. Él está provisto de un condensador especial que
elimina el preparado con mucha intensidad y en forma muy oblicua. Solamente los rayos de
luz refractados por las estructuras de la muestra penetran la lente objetiva. La resolución del
microscopio de campo escuro no es mejor que la de campo claro, pero se puede detectar
partículas más pequeñas.
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 Microscopio de fluorescencia: Aprovecha la capacidad algunas moléculas de florecer bajo
la luz ultravioleta, como a vitamina A y algunos neurotransmisores. La función del
microscopio de fluorescencia es estudiar la fluorescencia secundaria, que es detectar
antígenos o anticuerpos en las técnicas de inmunocitoquimica.
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 Microscopio confocal de barrido: combina componentes de un microscopio de campo
claro con un sistema de barrido para disecar ópticamente una muestra. Fuiste desarrollado
para estudiar la estructura de materiales biológicos. Poseí un sistema de iluminación a laser
que produce un punto de barrido muy superficial.
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 Microscopio de luz ultravioleta: La imagen en este tipo de microscopio depende de la
absorción de la luz UV por las moléculas de la muestra. La muestra no puede inspeccionar-
se en forma directa a través del ocular porque la UV no es visible y lesiona el ojo, entonces
los resultados se registran en una placa fotográfica para q se pueda analizar-se.
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 Microscopio de polarización: es una simple modificación del microscopio de campo claro
en el cual un filtro de polarización se coloca entre la fuente de luz y la muestra, y un segundo
filtro se coloca entre o objetivo del microscopio y el observador;
Microscopia Electrónica
 Microscopio electrónico de transmisión (MET); utiliza la interacción de un haz de
electrones con la muestra para producir una imagen.
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 Microscopio electrónico de barrido (MEB); el haz de electrones no atraviesa la muestra
sino que explora su superficie.
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 Microscopio electrónico de transmisión-barrido; combina características del MET y del
MTB para permitir el microanálisis de rayos X por sonda electrónica.
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BIBLIOGRAFIA
Ross Histología Texto y Atlas: Correlación con Biología Celular y Molecular, 7a Ed