Eres un interno de verano en un laboratorio de hematologa clnica. El director del laboratorio le da una muestra de las protenas de la sangre de un paciente y le pide que caracterice la trombina en la muestra. Tambin le dice que la trombina es una serina proteasa importante en la coagulacin de la sangre (consulte la Tabla 5.3) y que este paciente es un recin nacido con sangrado incontrolable. Para caracterizar la trombina en la muestra, debe eliminar dos protenas que interfieren con el ensayo de actividad de la trombina: el citocromo c y la lactoglobina. Encuentra un poco de CM- celulosa (consulte la Figura 5A.5) y un tampn de fosfato (pH = 6,4) en el estante de su laboratorio. Decide cargar la muestra de protena en una columna de CM-celulosa equilibrada en el tampn de pH = 6,4. Prediga el orden de elucin de las tres protenas que se muestran en la tabla adjunta. A pH = 6,4, qu protena predice que permanecer unida a la columna? La tabla 5.3 dice Citocromo C pI: 10,6 Lactoglobina pI: 5,2 Trombina (tipo viento) pI 7.1 Enumere dos formas diferentes en las que podra cambiar el tampn para eluir la(s) protena(s) unida(s) y lograr una separacin adecuada de las protenas. Le sorprende observar que la trombina del paciente fluye a travs de la columna de CM-celulosa a pH = 6,4 y no se une. Confiado en su tcnica, sospecha que la trombina del paciente es diferente de la trombina de tipo salvaje. Con un sistema de tampn diferente, logra purificar parte de la trombina del paciente y enva la muestra purificada para la secuenciacin de aminocidos. El anlisis de secuencia muestra que la trombina del paciente contiene una mutacin en el sitio activo de la enzima. Un residuo de lisina en el tipo salvaje se ha mutado a una asparagina en la trombina del paciente. Esta mutacin explica el comportamiento anmalo de unin de CM-celulosa que observ? Cuntos cambios de nucletidos se requieren a nivel del gen para una mutacin de lisina a asparagina? Cree que Lys-to-Asn (o Asn-to-Lys) es probable que sea una mutacin observada con frecuencia en las protenas? Con base en las estructuras de sus cadenas laterales, compare y contraste el potencial de Lys y Asn para formar interacciones no covalentes. En otras palabras, puede cada uno formar enlaces H y/o puentes salinos y/o contactos de van der Waals?.

1. Eres un interno de verano en un laboratorio de hematologa clnica. El director del laboratorio le
da una muestra de las protenas de la sangre de un paciente y le pide que caracterice la trombina
en la muestra. Tambin le dice que la trombina es una serina proteasa importante en la coagulacin
de la sangre (consulte la Tabla 5.3) y que este paciente es un recin nacido con sangrado
incontrolable.
Para caracterizar la trombina en la muestra, debe eliminar dos protenas que interfieren con el
ensayo de actividad de la trombina: el citocromo c y la lactoglobina. Encuentra un poco de CM-
celulosa (consulte la Figura 5A.5) y un tampn de fosfato (pH = 6,4) en el estante de su
laboratorio. Decide cargar la muestra de protena en una columna de CM-celulosa equilibrada en
el tampn de pH = 6,4. Prediga el orden de elucin de las tres protenas que se muestran en la tabla
adjunta. A pH = 6,4, qu protena predice que permanecer unida a la columna?
La tabla 5.3 dice
Citocromo C pI: 10,6
Lactoglobina pI: 5,2
Trombina (tipo viento) pI 7.1
Enumere dos formas diferentes en las que podra cambiar el tampn para eluir la(s) protena(s)
unida(s) y lograr una separacin adecuada de las protenas.
Le sorprende observar que la trombina del paciente fluye a travs de la columna de CM-celulosa
a pH = 6,4 y no se une. Confiado en su tcnica, sospecha que la trombina del paciente es diferente
de la trombina de tipo salvaje. Con un sistema de tampn diferente, logra purificar parte de la
trombina del paciente y enva la muestra purificada para la secuenciacin de aminocidos. El anlisis
de secuencia muestra que la trombina del paciente contiene una mutacin en el sitio activo de la
enzima. Un residuo de lisina en el tipo salvaje se ha mutado a una asparagina en la trombina del
paciente. Esta mutacin explica el comportamiento anmalo de unin de CM-celulosa que observ?
Cuntos cambios de nucletidos se requieren a nivel del gen para una mutacin de lisina a
asparagina? Cree que Lys-to-Asn (o Asn-to-Lys) es probable que sea una mutacin observada con
frecuencia en las protenas?
Con base en las estructuras de sus cadenas laterales, compare y contraste el potencial de Lys y
Asn para formar interacciones no covalentes. En otras palabras, puede cada uno formar enlaces
H y/o puentes salinos y/o contactos de van der Waals?