2. Downregulatie van groeifactor signaaltransductie What goes up must go down Paul van Bergen en Henegouwen

3. Deel 1: Introductie van voorbeeld receptor: EGFR Deel 2: Regulatie van de endocytose Deel 3: Sorting en transport naar het lysosoom Deel 4: Valorisatie

4. L1 CR1 L2 CR2 Tyrosine kinase Internalisatie Substraat domein Modulaire structuur van de EGFR Domein I Domein II Domein III Domein IV 1186 1 165 309 427 618 643 685 953 1045 TM JM

5. Ferguson et al. 2003 Ogiso et al. 2002 Structuur van EGFR ectodomein: Opmerkelijk verschil tussen monomeer en dimeer Monomeer Dimeer

6. Hypothese: EGF binding veroorzaakt conformationele verandering die leidt tot dimerizatie

7. EGF toedienen aan cellen: Receptor activatie en internalisatie EGFR / pTYR / DNA Wiley 2003

8. Hoe wordt de EGFR ge-endocyteerd ?

9. 125 I-EGF internalisatie experiment

10. PBS was 125 I-EGF internalisatie experiment

11. Acid wash, pH 3.8 125 I-EGF internalisatie experiment

12. Cell lysis 125 I-EGF internalisatie experiment

13. Internalization rate = Internalized fraction Surface bound fraction 125 I-EGF internalisatie experiment Time (min) 125 I-EGF internalized/surface

14. Twee routes: clathrine-afhankelijk en clathrine-onafhankelijk EGF Internalized/Surface

15. Twee routes

16. EM-opname van clathrin-coated pits en vesicles: Replica van een ge-vriesdroogd plasmamembraan

17. EM-opname van clathrin-coated pits en vesicles: Replica van een ge-vriesdroogd plasmamembraan

18. EM-opname van clathrin-coated pits en vesicles: Ultra dunne coupe van in plastic-ingebed materiaal

19. De vorming van de clathrin-coated vesicle: Wat gebeurt er? Welke moleculen zijn erbij betrokken?

20. Verzamelen van receptoren: Adaptor Protein-2 complex AP-2 Ear Hinge Trunk 100 kDa 50 kDa 17 kDa  -adaptin  -adaptin       

21. Er bestaan verschillende AP-complexes die op verschillende plaatsen in de cel te vinden zijn Golgi-complex Plasma membrane Golgi-complex             AP-1 AP-2 AP-3

22. Clathrine: zware- en lichte ketens vormen een bal

23. Clathrine vormt een netwerk

24. Het netwerk vormt een bal: Electronen tomografie van een coated vesicle © John Wiley &Sons,Inc Adaptor protein (AP2) complex  chain  chain  adaptin  adaptin Clathrin triskelion Smith et al . (1998) EMBO J . 17, 4943

25. Overzicht van clathrine structuren Marsh and McMahon (1999) Science 285, 215-220

26. Moleculen betrokken bij CCV vorming

27. Moleculen betrokken bij CCV vorming Membrane curvature generation AP2 Clathrin

28. Protein/protein interactions bij CCV vorming: Herkennings motieven     Receptor Yxx  Eps15 DPF Receptor LL L  x  D/E Clathrin AP-2 I EHs II COIL III DPF/UIM Epsin NPF Lipids DPW PIP 2

29. Membrane curvature generation AP2 Clathrin Eps15 Moleculen betrokken bij CCV vorming PIPK epsin

30. Dynamin, een GTPase betrokken bij afsnoering

31. Effect van zuiver dynamin op lipide vesicles

32. Dynamin vormt een ring rondom de nek

33. PIPK Membrane curvature generation AP2 Clathrin Eps15 Intersectin Amphiphysin Epsin Dynamin Endophilin Moleculen betrokken bij CCV vorming

34. Mogelijke rol van actine filamenten

35. Moleculen betrokken bij CCV vorming PIPK Membrane curvature generation AP2 Clathrin Eps15 Intersectin Amphiphysin Epsin Dynamin Endophilin Actin Synaptojanin Auxilin Hsc70