LA TECNICA HISTOLOGICA

LA TECNICA HISTOLOGICA
DANIEL BAGATOLI TECNICO PARAMEDICO
2020

 CONCEPTO:
Es la ciencia que estudia los tejidos.
HISTOLOGIA
TEJIDO
CELULAS
 BREVE RESEÑA HISTÓRICA:
 1819 . MAYER: (1787-1865) acuñó la palabra HISTOLOGÍA.
 1864 . KLEBS: Inclusión en la Parafina.
 1866 . HISS: Micrótomo “Era de la Histología con la utilización del
Micrótomo”.
 SIGLO XX: Desarrollo de la ANATOMIA MICROSCOPICA.

La Técnica Histológica es una serie de
procedimientos al que se somete a un tejido orgánico
para ser observado al microscopio óptico. Se aplica a
tejidos muertos.
APLICACIONES: Principalmente en la MEDICINA y
la BIOLOGIA.
Analiza tejidos para Dg. Histopatológico preciso, que
no se logra con la Biopsia.
Se utiliza para ver los causales de muerte.
Y para el estudio comparado de tejidos animales
(Biología).

1. INMEDIATO (BIOPSIA
QUIRURGICA) - IN
VIVO.
 TECNICAS:
1. FROTIS SANGUINEO
2. POR PUNCION (sangre y
líquidos corporales).
3. POR ASPIRACION (Quistes)
4. POR RASPADO - Área
amigdalar
5. HISOPOS DE DACRON
(Mucosa Bucal) Saliva de la
mucosa oral.
6. ABSORCION (Papel de filtro).
7. Por CONGELACION (N2
líquido a 195°C, durante la
congelación se sumerge en
SACAROSA AL 30%. Evita en
cristalización. IMPRONTA
CITOLOGICA.
8. POR ESCISION (Sacabocados
o punch en piel a nivel
superficial).
9. POR INCISION
10. POR ENDOSCOPIA
2. MEDIATO
(NECROPSIA O POST
MORTEM)
LA TECNICA HISTOLOGICA Métodos de estudio:

TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.
• PASOS:
1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Diafanización o aclaramiento
5. Inclusión
6. Formación del Taco
7. Obtención de cortes
8. Hidratación
9. Tinción
10. Deshidratación
11. Montaje definitivo.

1. OBTENCION DE LA
MUESTRA:
 Del individuo recién muerto.
 Para evitar la autólisis.
 Tamaño de la muestra
entre 2 a 3 cm de largo.
 Anotación de datos en la
planilla correspondiente.
 Colocar el material en
cápsulas de PETRI.
 Rotulación pertinente de la
muestra.
2) FIJACION DE LA MUESTRA
 Se trata a la muestra con sustancias
químicas como el FORMOL o el
LIQUIDO DE BOUIN (ácido pícrico
mas formol al 49%).
 CUALIDADES DE UN BUEN
FIJADOR:
1. Actúa con rapidez.
2. Alto poder de penetración.
3. Conservar la estructura del Tejido.
4. Aumenta la dureza del tejido
5. No producir retracción del Tejido.

• FIJADOR:
 Es una sustancia que
mantiene a la célula lo
más parecida a cuando
estaba viva.
 PRECAUCIONES:
1. Relación Vt/Vf = 10 a 20
veces.
2. No debe flotar ni
depositarse en el fondo.
3. De 6 a 24 hs de fijación.
 Los fijadores actúan
como oxidantes.
• TIPOS DE FIJADOR:
 FISICOS:
1. DESECACION
2. CONGELACION
 QUIMICOS:
1. SIMPLES.
2. COMPUESTOS (Mezclas de
líquidos).
a) LIQUIDO DE FLEMING (Osmio –
Cromo – Acido Acético).
b) LIQUIDO DE ZENKER (Bicromato
y Ácido Acético).
c) LIQUIDO DE BOUIN (Ácido
Pícrico y Formol al 40%).

3. DESHIDRATACION:
Es el proceso que se utiliza
para sacar el H2O del interior
de las células, porque nuestro
organismo está compuesto por
un 70% de ella.
 Se utiliza Alcohol Etílico en
grado creciente (en forma
gradual)
 70/75/80/85/90/95/100%
 Nunca directamente al
100%
4. DIAFANIZACION O
ACLARAMIENTO:
Es el proceso en el cuál
se saca la grasa de la
muestra.
Se utiliza BENZOL o
XILOL.
Se disuelve la grasa.

5). INCLUSION:
 Para M.O. se utiliza Parafina.
 Para M.E. se utiliza Resina
Plástica.
 PASOS:
1. Viene en forma sólida o en bloque.
2. Se coloca en un Vaso de
precipitado
3. Estufa a 60°C.
4. Disolución de la parafina.
5. La parafina ocupa el lugar del
agua.
6. Estufa (Renovación de parafina
cada dos hs.).
7. MANTIENE LA FORMA DE LA
MUESTRA.
6). CONFECCION DEL TACO:
 PASOS:
a) Saco la parafina de la estufa.
b) Formación del Taco.
c) Se vuelca en un molde (Barra de
Leuckart).
d) Solidificación.
e) Rotulación del molde.
f) Inclusión de la muestra en la para-
fina semifluida (se acomoda la
muestra con una pinza de acuerdo
al corte que voy a mirar, longitu-
dinal o transversal).
g) Desmoldo con una espátula ca-
liente, formo el taco, que tiene un
aspecto de pirámide truncada de
base mas ancha. Luego se pega a
un taco de madera.

7) OBTENCION DE CORTES:
Para realizar el corte se
utiliza el Micrótomo.
TIPOS:
1. DE DESLIZAMIENTO (cuchilla
móvil).
2. MINOT (Cuchilla fija). Taco
prendido y muestra libre. Se
desplaza la muestra para el
corte.
3. CRIOSTATOS, Se utiliza en la
Sala Operatoria.
4. ULTRAMICROTOMO, se lo
utiliza para el M.E.
5. MICROTOMO DE
CONGELACION O CRIOSTATO
• Tiene la ventaja de obtener
cortes muy rápidos.
8) HIDRATACION:
a) Al CORTE se lo coloca
sobre el PORTAOBJETOS
(se lo pega con Albúmina de
Meyer).
b) DESPARAFINAR: Con Xilol
que diluye la parafina.
c) HIDRATACION: En alcohol
de grados decrecientes
d) 100/90/80/70/65°

9) COLORACION:
 Se la utiliza para
distinguir las estructuras
de las células.
 Se utilizan colorantes,
porque tiene mayor
poder de penetración.
 COLORACION DE
RUTINA: Se utiliza la
coloración de
Hematoxilina/Eosina
(H/E), para observar el
núcleo y el citoplasma.
 CLASIFICACION DE LOS
COLORANTES:
1. NATURALES:
a) ANIMAL…..CARMIN
b) VEGETAL…HEMATOXILINA
2. ARTIFICIALES:
a) ANILINA
b) EOSINA
 La Eosina (colorante ácido) actúa
tiñendo el citoplasma celular de color
rosado.
 La Hematoxilina (colorante básico)
actúa tiñendo de oscuro el núcleo
celular.
 La coloración de GIEMSA, es neutra
y da un color diferente al citoplasma
y al núcleo.

Métodos de coloración:
 De rutina: H/E.
 Coloraciones especiales
 Coloraciones Histoquímicas.
Pasos:
 Coloración c/ Hematoxilina
 Lavado con agua.
 Viraje de color.
 Coloración c/ Eosina.
 Lavado con agua.
 Viraje de color.
 Observación de lo hecho.
 OK. Montaje del Preparado.
COLORACIONES
ESPECIALES.
GIEMSA, para Frotis
sanguíneo.
Tricrómica de Masson,
para las fibras colágenas
les da color azul.
Coloración de GRAM,
Coloración que tiñe de
azul a las bacterias
(GRAM +) o de rosado
(GRAM -).

COLORACIONES
HISTOQUIMICAS:
 Se las utilizan porque muestran
moléculas que no se distinguen
con H/E.
 FUELGEN: Para ADN. Trata al
tejido con HCl diluido, luego se
agrega el reactivo de Schiff.
 PAS: Acido peryódico de Schiff.
Se utiliza para observar las
células caliciformes. Tiñe a los
mucopolisacáridos.
 SUDAN III: Tiñe células
adiposas de rojo escarlata.
 SUDAN IV: Tiñe a los lípidos de
color negro.
TECNICA HISTOLOGICA.

10) DESHIDRATACION Y
ACLARAMIENTO DEL
MATERIAL COLOREADO:
 Alcoholes decrecientes.
11) MONTAJE FINAL:
 Colocación del cubreobjeto
sobre el portaobjeto.
 Se toma el portaobjeto con
los dedos índice y pulgar
por los lados, para evitar
que la grasa de la mano
contamine la muestra.

PASOS DEL MONTAJE
FINAL:
 Una gota de Albúmina
de Meyer o Bálsamo de
Canadá.
 Adherencia al
cubreobjeto.
 Colación lenta e impedir
que se forme burbujas
de aire.
 Colocación en Estufa.
 Secado del porta y
cubreobjeto (Muestra)
TECNICA HISTOLOGICA PARA
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA.
 Cortes de espesor de 1mm.
 Fijación con Glutaraldehido o tetróxido de
Osmio.
 Deshidratación.
 Inclusión en resina epoxi.
 Cortar con Ultramicrótomo (cuchilla de
diamante o de vidrio)
 Recepción de los cortes en agua.
 Luego se coloca en la rejilla de cobre
recubierta.
CENTRIFUGACION DIFERENCIAL:
 Esta técnica se utiliza para obtener y
observar fracciones puras de un
determinado componente celular
(Mitocondrias, núcleos, citoesqueleto, etc)

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