Este documento describe los pasos del proceso de congelación y descongelación de semen bovino y porcino. Explica que la congelación de semen ha contribuido al mejoramiento genético del ganado a través de la inseminación artificial. Luego detalla los pasos de la colección del semen, su evaluación, dilución, llenado de pajillas, congelación y almacenamiento en nitrógeno líquido, así como el proceso inverso de descongelación para la inseminación. También cubre los materiales y protocol
1. Año del fortalecimiento de la soberanía nacional
”INSTITUTO DE EDUCACIÓN SUPERIOR TECNOLOGICO PUBLICO
“JORGE BASADRE GROHMAN”
“Madre de Dios, capital de la biodiversidad del Perú”
TEMA: CONGELACIÓN Y DESCONGELACIÓN
DE SEMEN
PROGRAMA EDUCATIVO: PRODUCCION AGROPECUARIA
UNIDAD DIDACTICA: TECNICAS DE MEJORAMIENTO ANIMAL
DOCENTE: YOBANA ESTHER DIAZ AGÜERO
INTEGRANTES:
• Fernando Chosec Revilla
• Evelyn Rivera Salazar
• David Pillaca Mitma
• Nayda Quispe Chura
4. ● La inseminación artificial (IA) ha contribuido enormemente al mejoramiento genético del
ganado bovinode carne y leche en los últimos 50 años. El semen congelado en pajillas
francesas de 0.5 ó 0.25 ml ha sido la unidad universalmente aceptada para el
almacenamientoy la transferencia de genética bovinaa los ganaderos. Este artículo es una
revisión de los pasos generales efectuados para la congelacióno crio preservación de semen
bovinoen pajillas, comenzando con la colección del semen de toro, hasta el almacenamiento
final del mismo en tanques con nitrógeno líquido.
INTRODUCCIÓN
5. COLECCIÓNDELSEMEN
● Colección de semen con
vagina artificial (VA)
● Colecciónde semenusando
masajetransrectal
● Esta técnica requiere de
dos persona par efectuar
el masaje rectal, la otra
para colectar el semen.
Este método es casi el único
utilizado en los centros de IA,
por razonesprácticas y
porque produceeyaculados
más fisiológicamente
parecidosa los naturales.
Colecciónde semenpor
electro eyaculación
este método,consiste en
estimulaciones rítmicas,
pulsos eléctricos muy
leves
en la próstata y vesículas
seminalespara que el
animal presenteerección
y eyaculación.
6. volumen densidad
Es conveniente que cuando se
colecta el semen sea depositado
en un frasco graduado,
para así poder tener el dato
inmediato del volumen de semen
colectado. Se debe de considerar
que el volumen puede variar entre
2 y 12 ml, dependiendo de
diferentes factores
La densidad es la cantidad de
esperma por unidades de volumen,
depende de diferentes factores
biológicos.Varía dependiendo de
su consistencia, acuosa,lechosa,
lechosa-cremosa, cremoso. De
acuerdo a su consistencia, la
densidad es descrita como muy
buena REGULAR, buena y MALA.
EVALUACIÓN DEL SEMEN
MOTILIDAD INDIVIDUAL
Es necesario diluir el semen
con Citrato de Na al 2.92%,
colocar una gota gruesa DE
semen, de
aproximadamente 30 ó 40
microlitros; Se toman
clasificadores para calificar
la motilidad individual de los
espermatozoides
como MB = 80-100% de
células móviles, B = 60-79%,
R = 40-59%, P = menos de
40%
7. El proceso de congelamiento, después de
realizar la evaluación del semen
recolectado, comienza a partir de
cálculos de concentración espermática
y número de pajillas a utilizar. Se
considera que cada pajilla debe de
contener al menos 20 millones de
espermatozoides cada una, Para
comenzar el proceso de congelamiento,
el semen ya diluido primero tiene que ir
bajando de temperatura hasta llegar a
5°C en un lapso de 2 horas. Después del
llenado, las pajillas se sellan
manualmente con polvo sellante a base
de cloruro de polivinilo, selladores
térmicos o selladores por ultrasonido,
esferas metálicas o de vidrio,
dependiendo del equipo utilizado.
PROCESO DE CONGELACION DEL SEMEN
8. Proceso de descongelación del semen
● En esta parte se lleva la descongelación del embrión a
temperatura ambiente para poder hacer la inserción del
embrión con ayuda de unos materiales sofisticados de
higiene impecable q no pueden ser tocados,
● Se trata de una varilla larga donde se Coloca al embrión
en la punta, luego
● Se coloca una funda plástica q sirve Para facilitar la
movilidad de la varilla Y mantenerla intacta de ensuciarse
Luego se introduce el brazo en el Recto para usarla de
guía y con la Otra mano se introduce la varillaMetálica y
se da la guía y Palpación del útero para la Colocación del
embrión .
● Después se usan las 2 manos para encontrar el sitio
adecuado parece fácil pero es riguroso y trabajoso,
después se saca la varilla luego de haberla colocado se
abre el cepo,
● .
10. introduccion
La criopreservación o congelación seminal, se puede definir como la congelación y
almacenamiento de espermatozoides con fines reproductivos, durante largos
periodos de tiempo, frenando procesos de envejecimiento y degeneración celular,
manteniendo su viabilidad y funcionalidad a bajas temperaturas (-196°C) (Jiménez et
al., 2014).
Durante el proceso de crio preservación, hay un gran número de factores que pueden
afectar a nivel estructural y/o funcional la capacidad fecundante de los espermatozoides
de verraco, por lo que todavía no existe un método de criopreservación espermática
universalmente aceptado, que logre las tasas de criosupervivencia y fecundación
artificial esperadas. Es por ello, que las células se tienen que exponer a diluyentes con
agentes crioprotectores permeables y no permeables, que eviten la formación de
cristales de hielo y el daño de la membrana plasmática, sin embargo, los crioprotectores
pueden igualmente tener efectos diversos sobre los espermatozoides, lo cual limita su
función (Restrepo et al., 2009; Jiménez et al., 2014).
11. MATERIALES
Pajillas de 0.5 o 0.25 ml.
Primer diluyente (Diluyente A), 0.76 g de Dextrosa, 4 ml de yema de huevo, 0.2
ml de Gentamicina y 20 ml de Agua destilada (cbp).
Segundo diluyente (Diluyente B) 0.76 g de Dextrosa, 4 ml de yema de huevo, 0.2
ml de Gentamicina, 20 ml de Agua destilada (cbp) y 0.6 ml de Glicerol.
Potenciómetro.
Centrifuga.
Bortex.
Tubos de Falcón.
Gasas.
Refrigerador.
Hielera de unicel.
Nitrógeno líquido.
Tanque de nitrógeno líquido.
12. el protocolo de congelación se puede realizar con pajillas de 0.5 ml o 0.25 ml.
Es necesario preparar el mismo día de la congelación, dos diluyentes para almacenamiento del semen
(diluyente de refrigeración (A) y diluyente de congelación (B)) siguiendo la fórmula del cuadro 1
Protocolopara congelar sêmen de cerdo
13. Protocolo para congelar semen de cerdo
selección
cuidadosa de los verracos
“buenos congeladores” y
calidad de las dosis
seminales
Diluyentes para
congelación
• sustancias energéticas ( glucosa, fructosa,
lactosa)
• crioprotector (glicerol)
• proteínas (yema de huevo o leche)
• Aditivos (detergente sintético Amino-Na-Lauryl
Sulfato conocido como Orvus
• Es paste-OEP)
• Presión osmótica: alrededor de 400 mOsm/Kg
Recogida de
la fracción
sobre 100 cc de diluyente
comercial (BTS, MR-A) y después
se completa a dilución 1:2 con
diluyente a 32 ºC
Periodo de equilibrado
El espermatozoide de verraco precisa
recubrirse de una capa proteica que actúe
como agente crioprotector en el momento de
la congelación, para lo cual es preciso de 3-4
h (1h a 22-23 ºC y 2 h a 15 ºC)
01
03
02
04
14. Centrifugación y
dilución
congelación
Para proceder a la dilución es preciso
eliminar total o parcialmente el plasma
seminal . Para ello se centrifuga 10 minutos
(3 min.) a 800 g (2.400 g) en centrífuga
refrigerada a 15 ºC y después se elimina el
sobrenadante
■ Ha de ser rápida, con el fin de pasar el
punto crítico en el menor tiempo
posible
■ Para ello el semen a 5 ºC debe dejarse
caer sobre nieve carbónica o incidir
sobre el mismo vapores de nitrógeno
líquido (a unos 5 cm sobre el nitrógeno
líquido)
■ para posteriormente almacenarse en
nitrógeno líquido
05 06
15. Presentación (envase) descongelación
En pajuelas de 0,25-0,5-5-6 ml o en
envases planos plásticos (pet-flat bags)
congelados en vapores de nitrógeno
líquido con capacidad de 2,5-5 ml.
■ La Tª y el tiempo de descongelación es
determinante para la viabilidad y capacidad
de fecundación de los espermatozoides
■ Ha de realizarse rápidamente,
introduciéndose las dosis directamente
desde el nitrógeno líquido al baño María a
42 ºC (50 ºC, 37 ºC) durante 40-45 (12, 30)
segundos y a continuaciónverter el
contenido sobre 60-70 ml (80, 30) de
diluyente de refrigeración (mejor
específico) (tipo ACROMAX,MR-A THAW®,
BTS) a 15 ºC (37 ºC)
■ Hay que seguir rigurosamente las
instrucciones indicadas por el fabricante de
la dosis
07 08
16. PASOS PARA EL LLENADO DE LA PAJILLAS
a. Colocar la pajilla dentro de la muestra de congelación y absorber con la boca desde el extremo donde está el algodón
de la pajilla.
b. Es importante intentar nunca tocar el centro de la pajilla con los dedos, ni formar burbujas de aire en la pajilla.
c. Una vez que la pajilla se llene, con ayuda del peine hacer la burbuja que separe el sello de alcohol polivinílico y la
muestra espermática.
d. Sellar la pajilla con alcohol polivinílico, para cerciorarse de que esté bien sellado, se sugiere que en la parte del sello se
coloque un poco de agua y se vuelva a poner alcohol polivinílico, es importante siempre limpiar alrededor del sello de la
pajilla con las sanitas.
e. Mantener las pajillas a 5°C hasta terminar el empajillado.
f. Situar las pajillas en los gobeletes que se almacenaron a 5°C, es importante nunca llenar por completo los gobeletes,
siempre dejando de 2 a 3 espacios vacíos.
