Successfully reported this slideshow.
Aida Giol Castro, Ignasi Solé Clua, Manel Queral Martínez
Tutors: Julia Lorenzo i Javier García
IBB: Departament d’enginye...
 1. Introducció
 2. Cèl·lules Hela
 3. Preparació de portaobjectes per comprovar la internalització de
NPs en cèl·lules...
 Càncer: Conjunt de patologies relacionades amb la divisió
descontrolada de cèl·lules d’un teixit.
 Tumor: Massa amorfa ...
 Una nanopartícula càpsula amb fàrmacs
a l’interior d’un tamany que oscil·la entre
80-120nm de diàmetre.
 Ddiàmetre més...
 Cisplatí i doxorrubicina  fàrmacs per combatre les cèl·lules
tumorals.
 Objectiu  Veure si encapsulant aquests fàrmac...
 Cèl·lules de cultiu cel·lular utilitzades en investigació científica
 Pertanyen a Henrietta Lacks (HeLa)
pacient de càn...
Nivell 2 de seguretat biològica
Bany tèrmic 37ºC Netejar en PBS i
tripsinitzar
Centrifugar a 1400 rpm
Preparar les
càpsules de Petri
amb cobreobjectes
1,5...
Tota la nit incubadora 20 μl NPs doxo+cis 2 plaquetes
1 plaqueta control
2 h incubadora
Aspirar medi
Posem 1ml PBS, agitem...
15min. congelador
Traiem metanol
Posem 0,5ml PBS Dissolució 1:500
Dapi+PBS (1,5 ml total)
Aspirem PBS i
afegim 0,5ml
disso...
MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA
•NPs cis (50 μg/ml)
•NPs cis + doxo (50μg/ml)
(10 μg/ml)
3h incubadora
Raigs ultraviolats
 esterilitzar
Posar el marcador Hoescht
MICROSCOPI CONFOCAL
Cèl·lules sobrants
del dia anterior
Netejar en PBS i
tripsinitzar Centrifugar a
1400 rpm
Preparem una
dissolució 1:13
Pipe...
150 μg/ml24 h
0,5 μg/ml 30 μg/ml
0,5 μg/ml 30 μg/ml
125 μg/ml 250 μg/ml
0,5 μg/ml 125 μg/ml
N e u ro b la s to m a c e lls
0 1
1
1
2
7
5
4
1
0
8
1
8
8
2
6
9
5
3
8
0
2 0
4 0
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
D O X O -C P P s C o ...
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals
Prochain SlideShare
Chargement dans…5
×

Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals

68 vues

Publié le

Dins del Projecte Argó, hem treballat durant dos setmanes a l'IBB (UAB) fent diferents experiments utilitzant nanopartícules i cèl·lules Hela.
Ha estat una gran experiència endinsant-nos en la nanobiologia, un món fascinant i que encara amaga moltes incògnites

Publié dans : Sciences
  • Soyez le premier à commenter

  • Soyez le premier à aimer ceci

Efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals

  1. 1. Aida Giol Castro, Ignasi Solé Clua, Manel Queral Martínez Tutors: Julia Lorenzo i Javier García IBB: Departament d’enginyeria de proteïnes i proteòmica Programa Argó 2016
  2. 2.  1. Introducció  2. Cèl·lules Hela  3. Preparació de portaobjectes per comprovar la internalització de NPs en cèl·lules Hela  4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi confocal  5. Proves de citotoxicitat en NPs amb cisplatí i/o doxorrubicina ◦ 5.1 Gràfiques IC50
  3. 3.  Càncer: Conjunt de patologies relacionades amb la divisió descontrolada de cèl·lules d’un teixit.  Tumor: Massa amorfa de cèl·lules , símptoma del càncer. ◦ Benigne ◦ Maligne (Metàstasi)
  4. 4.  Una nanopartícula càpsula amb fàrmacs a l’interior d’un tamany que oscil·la entre 80-120nm de diàmetre.  Ddiàmetre més gran que les partícules de fàrmac + elevada electronegativitat  Aconsegueix superar les defenses i els filtres del cos  NPs contra el càncer  Venes i capil·lars defectuosos en un tumors  Coàguls, major concentració de NPs en cèl·lules cancerígenes (menys danys a les cèl·lules no tumorals)
  5. 5.  Cisplatí i doxorrubicina  fàrmacs per combatre les cèl·lules tumorals.  Objectiu  Veure si encapsulant aquests fàrmacs, s’augmenta l’eficiència en vers els fàrmacs lliures. Doxorrubicina Cisplatí
  6. 6.  Cèl·lules de cultiu cel·lular utilitzades en investigació científica  Pertanyen a Henrietta Lacks (HeLa) pacient de càncer cèrvix-uterí  Línia de cèl·lules tumorals molt duradora i prolífera
  7. 7. Nivell 2 de seguretat biològica
  8. 8. Bany tèrmic 37ºC Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a 1400 rpm Preparar les càpsules de Petri amb cobreobjectes 1,5 ml dissolució / càpsula
  9. 9. Tota la nit incubadora 20 μl NPs doxo+cis 2 plaquetes 1 plaqueta control 2 h incubadora Aspirar medi Posem 1ml PBS, agitem i aspirem Posem 500 μl metanol/càpsula  fixar les cèl·lules al cobreobjectes
  10. 10. 15min. congelador Traiem metanol Posem 0,5ml PBS Dissolució 1:500 Dapi+PBS (1,5 ml total) Aspirem PBS i afegim 0,5ml dissolució Dapi+PBS 15min. agitador Traiem Dapi+PBS, netejem amb PBS i ho aspirem Posar els cobreobjectes del fons de les plaquetes en un portaobjectes
  11. 11. MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA
  12. 12. •NPs cis (50 μg/ml) •NPs cis + doxo (50μg/ml) (10 μg/ml) 3h incubadora Raigs ultraviolats  esterilitzar
  13. 13. Posar el marcador Hoescht MICROSCOPI CONFOCAL
  14. 14. Cèl·lules sobrants del dia anterior Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a 1400 rpm Preparem una dissolució 1:13 Pipeta multicanal sembrem les cèl·lules 96 pouets  (200μl) 60medi+cèl·lules+fàrmac 36 medi
  15. 15. 150 μg/ml24 h
  16. 16. 0,5 μg/ml 30 μg/ml
  17. 17. 0,5 μg/ml 30 μg/ml
  18. 18. 125 μg/ml 250 μg/ml
  19. 19. 0,5 μg/ml 125 μg/ml
  20. 20. N e u ro b la s to m a c e lls 0 1 1 1 2 7 5 4 1 0 8 1 8 8 2 6 9 5 3 8 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 D O X O -C P P s C o n c e n tra tio n (P t  M ) Cellviability(%) N e u ro b la s to m a c e lls 0 1 1 1 2 7 5 4 1 0 8 1 8 8 2 6 9 5 3 8 0 2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 P tIV C o n c e n tra tio n (P t  M ) Cellviability(%) IC50 > 500 µMIC50 ~ 7 µM Pt- 175 ng/ml Doxo

×