practica 3

1. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LASALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA
Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.
Alumno: Irma Jeanneth Ochoa Toro
Curso: Quinto Paralelo: A
Grupo N03
Fecha de Elaboración de la Práctica: lunes 15 de junio del 2015
Fecha de Presentación de la Práctica: lunes 22 de junio del 2015
PRÁCTICA N° 3
Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR ALCOHOL METILICO
Animal de Experimentación: rata wistar
Vía de Administración: Vía Parenteral.
 OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
 Observar que sintomatología presenta la rata wistar ante la intoxicación por
metanol.
 Realizar las reacciones químicas correspondientes para verificar la presencia de
Etanol.
 MATERIALES:
 Vaso de precipitación 250ml
 Matraz Erlenmeyer 250ml
 Equipo de decisión
 Bisturí
 Balón de destilación
 Tabla de disección
 Panema
 Jeringa de 10ml
 Pipetas
 Funda plástica
 Perlas de vidrio
 Tubos de ensayos
 Mandil
 Lámpara de alcohol
 cocineta
 Mascarilla
 Guantes de látex
 Balanza analítica
 SUSTANCIAS:
 Permanganato de potasio
 Ácido sulfúrico (H2SO4)
 Solución saturada de acido oxálico
 Ácido clorhídrico con. (HCl)
 Cloruro de fenilhidracina 4%
 Nitroprusiato de sodio 2.5%
 Hidróxido de sodio (NaOH)
 Ferricianuro de potasio 5-10%
 Solución sulfúrica de morfina
 leche
 cloruro férrico
 Fushina bisulfatada

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 PROCEDIMIENTO
1. Desinfectar el área de trabajo y previamente tener todos los materiales a utilizarse
limpios y secos.
2. Preparamos la solución problema
3. Administramos 10 ml. de metanol por vía peritoneal
4. Seguidamente se coloca el cobayo en el panema.
5. Observar que sintomatología presenta la rata ante la intoxicación por metanol y
tomar en cuenta el tiempo en que muere.
6. Una vez la rata muerta lo trasladamos a la taba de disección previamente se
coloca una funda sobre la tabla para evitar contaminación alguna
7. Se debe cuidadosamente amarar sus extremidades con ayuda de unas piolas en
los extremos de la tabla para facilitar abrir la rata.
8. Raspamos el área donde se realizara el corte y después con cuidado se procede
abrir al animal .
9. Observamos detenidamente todos los órganos que han sido afectados por la
intoxicación del etanol.
10. Colocando las vísceras afectadas, en un vaso de precipitación, procediendo a
picar lo más fino posible
11. Añadimos un acidulante, previamente preparado (2 gr AC. Tartárico 2% +50ml
H2O destilada y agitamos) en la muestra (vísceras) y en matraz colocamos 20ml
NaOH 0.1N en el cual se recogió los vapores de metanol, emitidos tras la
destilación efectuada.
12. Se arma el equipo de destilación correctamente.
13. Abrimos la llave para que empiece el proceso de destilación por 30 minutos
14. Al terminar el proceso de destilación se procede a realizar las reacciones químicas
pertinentes para la detectar metanol.
15. Una vez concluida la práctica se limpia y desinfecta la área donde se trabajó ya
que puede causar contaminación debido a restos que se hayan regado durante la
práctica, dejar todos los materiales limpios y los reactivos empleados bien
cerrados, ordenados donde corresponde.
Reacciones de reconocimiento:
1. reacción de Schiff
A una pequeña porción de la muestra (1ml) en un tubo de ensayo, se añade i
ml de permanganato de potasio después de mezclar se adiciona una gotas de
acido sulfúrico puro, se deja reposar por tres minutos y agregan algunas gotas
de solución saturada de acido oxálico (hasta decolore la mezcla). La mezcla
adquiere un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle
nuevamente algunas gotas de acido sulfúrico puro. Finalmente se le añade 1
ml de fushina bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce en
intenso color violeta en caso de positivo.

3. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
2. Reacción de Rímini
A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4%, 4
gotas de solución de nitropusiato de sodio al 2.5% recién preparado y 1 ml de
solución de hidróxido de sodio, se produce una coloración azul intensa.
3. con la fenilhidracina
En medio fuertemente acidificado con acido clorhídrico a una pequeña cantidad
de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenilhidracina, 2-4 gotas de
solución de Ferricianuro de potasio al 5-10% y algunas gotas de hidróxido de
potasio al 12% se obtiene una coloración rojo grosella.
4. Reacción de Marquis
toma 1 ml de destilado y se agregan 5 ml de acido sulfúrico concentrado, se
agita luego con una solución sulfúrica de morfina (0.2 gr de cloruro de morfina
en 10 ml de acido sulfúrico concentrado), se obtiene enseguida o después de
algún tiempo un color violeta.
5. con el Acido Cromotrópico.
Con este acido en un medio fuertemente acidificado con acido sulfúrico, el
formaldehido produce una coloración roja después de calentar ligeramente.
6. Reacción de Hehner.
Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, se estratifica
con acido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro
férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500 ml de acido sulfúrico); en caso
positivo, en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta.
 GRÁFICOS:
Preparación del
metanol
Antes de
administración de
metanol
Administración del
metanol (10ml)

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 REACCIONES DE RECONOCIMIENTO:
1) Reacción de Shiff:
Reacción Positivo característico violeta
Muerte de la rata Observación de los órganos
afectados por el tóxico
Trituración de las
vísceras
Colocación de la mezcla en el
balón de destilación
Armado del equipo de
destilación
Disección del animal
con el bisturí
Proceder a la
destilación

5. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
2) Reacción de Rímini:
Reacción negativo marrón
3) Reacción con la fenilhidracina:
Reacción positivo característico Coloración rojo grosella
4) Reacción de Marquis:
Reacción positivo no característico Coloración violeta
5) Con el ácido cromotrópico: Cianurode sodio+ácidosulfúrico.
Reacción positivo no característico rojo

6. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
6) Reacción de Hehner:
Reacción positivo no característico violeta o rojo violeta
 OBSERVACIONES
Hemos observado que al administrar me tanol( 10ml) por vía
intraperitoneal al animal de experimentación, se presentaron las siguientes
manifestaciones:
Ceguera, convulsiones nistagmos, vómitos.
 CONCLUSIONES
Mediante esta práctica observamos cuales son las manifestaciones que se
presentan ante la administración del metanol en la rata de wistar, que órganos
afecta el toxico, los cuales fueron: hinchazón del estómago, vesícula inflamada
y mediante las reacciones de reconocimientos se identificó la presencia del
toxico.
 RECOMENDACIONES
 Conocer y aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio
para evitar posteriormente accidente alguno
 Al momento de administrar la dosis realizarlo en la vía correcta, para
evitar de esta manera provocar embolias.
 Preparar correctamente los reactivos a la concentración requerida en la
práctica y así mismo utilizar pipetas o bulbos para cada reactivo.
 Culminada la práctica se debe dejar el área desinfectada, para evitar
contaminación con las sustancias químicas utilizadas.
 CUESTIONARIO:
¿Cuáles son las características del etanol?
El metanol se puede encontrar en el denominado alcohol de quemar,
compuesto por los alcoholes metílico y etílico. También puede hallarse en
solventes en barnices, tinturas de zapato, limpiavidrios, líquidos
anticongelantes, solventes para lacas etc. Además, los combustibles sólidos
envasados también contienen metanol. También se conoce como alcohol de

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madera porque antiguamente se obtenía a partir de la destilación seca de la
madera.
Toxicocinética del metanol?
 Absorción: Gastrointestinal rápida; piel y pulmones .
 Volumen de distribución: 0,6-0,7 L/Kg.
 Vida Media : 14-20 h en moderada 24-30 h en severas. 30-35 h con
tratamiento con etanol.
 Biotrasnformación: Es metabolizado en el hígado.
 Eliminación: Hígado 90 - 95%, riñón 2-5 %, pulmón 2-5 %
El alcohol de deshidrogenasa oxida al metanol en formaldehido, el cual es
convertido rápidamente por el aldehído deshidrogenasa en ácido fórmico. La
vía dependiente del ácido fólico oxida al ácido fórmico en dióxido de carbono y
agua.
Síntomas por intoxicación de metanol?
Los síntomas pueden abarcar:
Pulmones y vías respiratorias
Dificultad respiratoria, Paro respiratorio
Ojos, Ceguera, Visión borrosa, Dilatación de las pupilas
Corazón y vasos sanguíneos
Convulsiones, presión arterial baja
Sistema nervioso:
Comportamiento agitado, coma, mareo, dolor de cabeza crisis epiléptica
Piel y uñas, uñas y labios azulados
Estómago e intestinos, dolor abdominal (fuerte)
Diarrea, problemas con la función hepática
Náuseas, pancreatitis, vómitos
Fisiopatogenia del metanol
La dosis letal de metanol por vía oral varía entre los 60 y 200 ml. La toxicidad
obedece al metabolismo del alcohol metílico que se convierte en ácido fórmico
y formaldehido, con la propiedad de precipitar las proteínas de las vías
nerviosas causando daño irreparable. Es conocido el efecto lesivo específico
que tiene esta sustancia sobre las células ganglionares de la retina y el nervio
óptico, generando ceguera total, muchas veces de carácter irreversible. El
ácido fórmico produce acidosis metabólica severa.
Su biotransformación se realiza principalmente en el hígado y su eliminación
como ácido fórmico por vía urinaria. En menor porcentaje se elimina por utiliza
la vía entero-hepática.
La administración de alcohol etílico disminuye la toxicidad del metanol, al
bloquear el metabolismo de éste en formaldehido y ácido fórmico, permitiendo
a los riñones excretar el metanol inalterado.

8. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
 GLOSARIO:
Biotransformación.- procesos que tienen lugar en el organismo mediante los
cuales los fármacos son trasformados para ser eliminados. .
Ácidocromotrópico.-Es un compuesto orgánic de fórmula(HO)2C10H4(SO3H)2,
un derivado do naftaleno dissulfonado e diidroxilado.
Concentración sérica.- La concentración es aquella que una sustancia tiene
en el suero sanguíneo de un individuo. si es 60% sería que 60 gramos de
sustancia hay en 100 ml de plasma.
Sustrato.- Es la superficie en la que una planta o un animal vive. El sustrato
puede incluir materiales bióticos o abióticos.
Deshidrogenasa.- Enzima responsable del inicio de las reacciones de oxidación
biológica, en las que se transfieren átomos de hidrógeno
 BIBLIOGRAFIA:
*Nolla Salas, J., Nogué Xarau, S., Marruecos Sant, L., Palomar Martínez, M., &
Martínez Pérez, J. (1995). Intoxicación por metanol y etilenglicol: Estudio de 18
observaciones. Medicina clínica, 104(4), 121-125.
*Peinador, M. V., Prieto, J. S., Cuevas, M. G., Macías, A. G., Aguirre, J.,
Herrero, F., & de Zárate, M. M. O. (1999). Intoxicación mortal por metanol.
emergencias, 11(4), 315-319.
FIRMAS DE RESPONSABILIDAD:
Jeanneth Ochoa ____________________

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ANEXOS
Animal en el cual se experimentó (rata wistar )
Datos de la práctica realizada
Intoxicación Aguda por Metanol en un Varón de 32 Años
Paciente que ingresa en UCI procedente de urgencias por coma arreactivo.
Fumador de 30 cigarrillos diarios, bebedor ocasional. El paciente llevaba un
mes en España; de nacionalidad polaca, y trabajaba en una fábrica con
pinturas y mezclas de disolventes.
Según refieren sus compañeros de trabajo y de domicilio; desde hacía 4 días
presentaba cefaleas y vómitos acompañados de sensación de mareo y
episodios cortos en los que decía que lo veía todo negro. El día del ingreso su
compañero de piso, al llegar a casa después de su turno de ocho horas de
trabajo, encuentra al paciente con bajo nivel de conciencia y movilizando los 4
miembros. Avisan al 112 que encuentra un paciente espástico, arreactivo, con
ojos abiertos y pupilas midriáticas, con una respiración muy dificultosa y
apneas importantes. Proceden a intubarlo y lo trasladan a urgencias,
ingresando al paciente directamente en UCI.
La tensión arterial era de 117/72 mmHg; presión venosa central de 11 cm de
H2O; frecuencia cardiaca de 70 latidos por minuto; 14 respiraciones por minuto;
35 oC y saturación de O2 de 99%; glucemia de 191 mg/dl.
A la exploración física destacar que era un paciente en coma con Glasgow 3
(Ocular 1, motor 1, verbal 1). Las pupilas eran midriáticas y arreactivas.
Presentaba respiración espontánea pero acidótica con un patrón típico de
Kussmaul. Importante espasticidad. Tenía múltiples lesiones por quemaduras y

10. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS”
cicatrices por cortes en muñeca y antebrazo izquierdo, todas ellas antiguas. El
resto de la exploración física era estrictamente normal.
En la analítica de ingreso destacaba una acidosis metabólica muy importante:
pH 6.79 con PCO2 21.8 mmHg; PO2 188 mmHg; HCO3 3.1 mmol/l; BE -28
mmol/l; saturación O2 97.2%. Presentaba un importante desequilibrio iónico: K
6.1 mmol/l; Na 134 mmo/l; Mg 3.4 mg/dl y calcio corregido de 10 mg/dl.
Acidosis láctica con valores de 10.1 mmol/l. Destacar también valores de
amoniaco de 605.6 µg/dl y alteraciones de la función renal; urea 61 mg/dl y Cr
1.8 mg/dl. El resto del hemograma y la bioquímica era normal.
Se realizó una determinación cualitativa de tóxicos en orina resultando
negativa para tetrahidrocannabinol, opiáceos, cocaína, metanfetamina,
benzodiacepinas, antidepresivos tricíclicos y fenciclidina. Se tomaron muestras
para determinación cuantitativa de sangre, jugo gástrico y orina. Se administró
al paciente 0.4mg de naloxona y 0.5 mg de flumacenilo, comenzando con una
crisis focal en extremidad superior derecha y hemifacial derecha. Por lo que se
realiza una TAC craneal que es informada como normal.
En la radiografía de tórax no hay imágenes de condensación y el
electrocardiograma es un ritmo sinusal a 70 latidos por minuto, presentando T
negativa en la derivación III, el resto era normal.
Ante el cuadro clínico presentado previo al ingreso de cefaleas, mareos,
alteraciones visuales, alteraciones digestivas e insuficiencia respiratoria,
acompañada de midriasis arreactiva y acidosis metabólica con anión GAP alto
35.9, y el tipo de trabajo que tenía el paciente se sospecha intoxicación por
metanol; ante la imposibilidad de tener niveles inmediatos en nuestro centro se
decidió iniciar tratamiento precoz con etanol i.v.
Pautamos una primera dosis en bolo de 50cc de alcohol al 96% disueltos en
500 cc de dextrosa al 5% en 30 minutos para 60 kg de peso y posteriormente
una dosis de mantenimiento alta de 81.25 cc/h disueltos en dextrosa al 5%
porque asociamos tratamiento con diálisis convencional durante las 6 primeras
horas; estando el paciente muy inestable hemodinámicamente requiriendo
sobrecarga hídrica por hipotensión y con episodios de taquicardias
supraventriculares; por lo que posteriormente se inició hemodiafiltración
venovenosa continua que fue mejor tolerada por el paciente. Al tratamiento se
asoció reposición vitamínica con piridoxina y 100mg de tiamina cada 8 horas; a
lo que se le añadió ácido fólico a dosis de 50 mg cada 4 horas. También se
aportó bicabonato sódico 1 molar.
Neurológicamente el paciente seguía en coma 24 horas después pero no
estaba espástico, las pupilas eran medias y débilmente reactivas, movilizaba
espontáneamente las manos y los pies, y localizaba con los miembros
superiores al dolor. El paciente tenía respiración espontánea. Se le realizó una
punción lumbar presentando un líquido claro, a presión normal, estéril y sin
celularidad.
A las 36 horas de ingreso se había corregido la acidosis metabólica, el anión
GAP era de 7.6 y el láctico de 1.8 pero el paciente seguía en coma, y comenzó
a realizar movimientos de rotación interna de miembros superiores y extensión
de miembros inferiores; por lo que decidimos repetir la TAC craneal
presentando extensas lesiones hipodensas en ambos hemisferios, y ganglios
basales, especialmente en putámen de forma bilateral, que probablemente
correspondían a lesiones isquémicas. Edema sin efecto masa . Se le realizó un

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fondo de ojo presentando palidez del nervio óptico, sin poder descartar
papiledema. El electroencefalograma fue informado como enlentecimiento
generalizado del trazado de intensidad muy severa. A las 48 horas recibimos el
informe de toxicología con niveles de metanol en sangre de 0.7 gr/l, en orina de
0.7 gr/l y en jugo gástrico de 0.75 gr/l, siendo la dosis letal de 0.4 gr/l. El
paciente falleció al 5to día de ingreso.
Bibliografía:
Santana, L., García Cantón, C., Martínez Cuéllar, S., & Sánchez Palacios, M.
(2007). Intoxicación grave por metanol y tolueno: a propósito de un caso.
Nefrología, 27(4), 517-8.