2. DEFINICION
• Las enzimas de restricción, también conocidas como
endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces
fosfodiéster del material genético a partir de una
secuencia que reconocen. Las mismas permiten cortar
ADN de hebra doble, donde reconocen secuencias
palindrómicas (secuencias que se leen igual en ambas
direcciones).
3. CORTE ESPECÍFICO DEL
ADN
Las enzimas de restricción al cortar DNA pueden producir
dos tipos de cortes:
• Abruptos: cortan en un sólo punto.
• Cada enzima de restricción reconoce una secuencia
específica de nucleótidos y corta en ese punto cada
una de las cadenas de ADN.
4. • Cohesivos o pegajosos: cortan a manera escalonada en
dos puntos diferentes
• Los extremos libres que quedan se llaman extremos
pegajosos, porque pueden unirse a otros fragmentos de
ADN que hayan sido cortados por la misma enzima de
restricción.
5. Actuación de las enzimas de restricción.
Son extraídas de organismos
procarióticos (bacterias), donde
actúan como un mecanismo de
defensa, para degradar
material genético extraño que
entre en la célula. Las
bacterias tienen la capacidad
de metilar su ADN, lo cual sirve
para distinguir entre el ADN
extraño y el ADN propio
6. TIPOS
• Tipo I: Una sola enzima (multimérica que posee 3
subunidades) reconoce la secuencia específica de ADN,
métila y restringe. Pero la restricción no ocurre en el sitio
de reconocimiento, sino que es al azar y en sitios
distantes al de reconocimiento.
• Tipo II: La restricción ocurre en el sitio de reconocimiento.
Estas enzimas tipo II son las utilizadas en genética
molecular puesto que permiten romper el ADN en sitios
específicos, y así, recuperar secuencias conocidas.
7. • Tipo III: Es similar al sistema tipo I, utilizan una enzima
oligomérica que realiza todas las actividades
enzimáticas, y rompen el DNA 25-27 bp, más allá del
sitio de reconocimiento.
• Ejemplo:
8. MAPA DE RESTRICCIÓN
• Un patrón de ADN generado mediante electroforesis que
se produce después de cortar con una enzima de
restricción. La representación de una molécula de ADN, ya
sea circular o lineal, donde se indiquen los sitios de
restricción que poseen, se denomina mapa de restricción.
9. Tamaño de los fragmentos de
restricción
Los fragmentos generados a través de la digestión por
enzimas de restricción pueden ser analizados con la técnica
de electroforesis agarosa.
10. NOMENCLATURA
• 1º. Tres letras que corresponden al nombre científico del
microorganismo (ej. Escherichia coli (Eco); Haempphilus influenzae
(Hin) )
• 2º. La cepa o estirpe si la hubiese (ej. EcoR, aislada de la cepa
RY13 de E. coli )
• 3º. En números romanos, un número para distinguir si hay más de
una endonucleasa aislada de esa misma especie. No confundir con
el tipo de enzima de restricción.
• 4º. Todas deberían llevar delante una R de restricción o un M de
metilasa según la función de la enzima, pero generalmente se
omite.
11. Nomenclatura Ejemplo Corresponde a:
E Escherichia Género de la bacteria
co coli Especie de la bacteria
R RY13 Cepa de la bacteria
I
La primera enzima
identificada
Orden de identificación de la
enzima en la bacteria
Enzima Origen Bacteriano Sitio de Reconocimiento Resultado del Corte
EcoRI Escherichia coli 5'GAATTC 3'CTTAAG
5'---G AATTC---3' 3'---
CTTAA G---5'
BamHI
Bacillus
amyloliquefaciens
5'GGATCC 3'CCTAGG
5'---G GATCC---3' 3'---
CCTAG G---5'
DpnI*
Diplococcus
pneumoniae
CH3 | 5'GATC 3'CTAG | CH3
CH3 | 5'---GA TC---3' 3'-
--CT AG---5' | CH3
