Este documento describe una práctica de laboratorio sobre la técnica de electroforesis en gel de agarosa para separar y analizar fragmentos de ADN. Se explica la teoría de la electroforesis y cómo se mueven las moléculas de ADN a través del gel aplicando una corriente eléctrica. Luego, la metodología incluye descargar programas, obtener secuencias de ADN, crear un gel virtual y analizar las muestras. Los resultados son un gel con las cepas bacterianas establecidas. Se concluye que la electro

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
BIOTECNOLOGIA
TEMA:
PRACTICA N° 3: TÉCNICAS MOLECULARES –
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
PRESENTADO POR:
ESPINOZA CASTILLO, KATTYA MERCEDES
DOCENTE:
SOTO GONZALES, HEBERT HERNAN
CICLO:
VII
CODIGO DEL CURSO:
IA-722
Ilo, Moquegua, Perú

2. INDICE
TÉCNICAS MOLECULARES – ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA ................ 2
1. INTRODUCCION ........................................................................................................... 2
2. OBJETIVOS .................................................................................................................... 2
3.1 Objetivo General:........................................................................................................... 2
1.2 Objetivo Específicos: ............................................................................................... 2
3. MARCO TEORICO:........................................................................................................ 2
Electroforesis en gel:............................................................................................................ 2
a. ¿Qué es un gel? ............................................................................................................ 3
b. ¿Cómo se mueven los fragmentos de ADN a través del gel? ...................................... 4
c. Visualización de los fragmentos de ADN:................................................................... 4
4. METODOLOGIA: ........................................................................................................... 4
5. RESULTADOS................................................................................................................ 6
6. CONCLUSIONES ........................................................................................................... 7
7. BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................. 7

3. TÉCNICAS MOLECULARES – ELECTROFORESIS EN
GEL DE AGAROSA
1. INTRODUCCION
En la metodología para conocer el material genético de determinado organismo, se realizan
múltiples procesos, como las llamadas PCR o reacción en cadena de la polimerasa, por lo
que suele suceder que luego de dicho procedimiento se producen muchas copias de una
región blanco de ADN. O tal se produce alguna clonación de ADN tratando de "pegar" un
gen en un plásmido circular de ADN.
Es por eso que se necesita comprobar si la PCR funcionó o si el plásmido contiene el gen
correcto. Para ello existe la electroforesis en gel, que es es una técnica utilizada para separar
fragmentos de ADN (u otras macromoléculas, como ARN y proteínas) por su tamaño y
carga. La electroforesis consiste en aplicar una corriente a través de un gel que contiene las
moléculas de interés. Con base en su tamaño y carga, las moléculas se desplazarán por el gel
en diferentes direcciones o a distintas velocidades, con lo que se separan unas de otras.
2. OBJETIVOS
3.1 Objetivo General:
Analizar el ADN de plásmido intacto y cortado por electroforesis en gel de agarosa en
enzima restrictiva. Además, de determinar el tamaño molecular de la muestra. El problema
de hacer patrones de línea recta de fragmentos de ADN de peso molecular conocido.
1.2Objetivo Específicos:
- Emplear Softwares para la obtención del ADN de determinado organismo
- Aplicar el software Snap Gene para elaborar nuestro gel de agarosa
- Comprender la técnica de Electroforesis.
3. MARCO TEORICO:
Electroforesis en gel:
La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN (u otras
macromoléculas, como ARN y proteínas) por su tamaño y carga. La electroforesis consiste
en aplicar una corriente a través de un gel que contiene las moléculas de interés. Con base en

4. su tamaño y carga, las moléculas se desplazarán por el gel en diferentes direcciones o a
distintas velocidades, con lo que se separan unas de otras.
Todas las moléculas de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa. Debido a esto, la
electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN únicamente por su tamaño. La
electroforesis nos permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN están presentes en una
muestra y cuán grandes son unos con respecto a otros. También podemos determinar el
tamaño absoluto de un fragmento de ADN examinándolo junto a una "escala" estándar de
fragmentos de tamaño conocido.
a. ¿Qué es un gel?
Como su nombre lo indica, en la electroforesis en gel participa un gel: un bloque de material
similar a la gelatina. Los geles para separar ADN suelen estar hechos de un polisacárido
llamado agarosa, que se consigue como hojuelas secas pulverizadas. Cuando la agarosa se
calienta en una solución amortiguadora (agua mezclada con algunas sales) y deja enfriar, se
forma un gel sólido ligeramente blando. A nivel molecular, el gel es una matriz de moléculas
de agarosa que se mantienen unidas por puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros.
En un extremo, el gel tiene muescas en forma de ranuras llamadas pozos, que son donde se
colocarán las muestras de ADN:
Antes de agregar las muestras de ADN, el gel debe colocarse en una cámara. Uno de los
extremos de la cámara se conecta a un electrodo positivo y el otro extremo se conecta a un
electrodo negativo. El cuerpo principal de la cámara, donde se coloca el gel, se llena con
solución amortiguadora con sales que puede conducir la corriente. Aunque tal vez no puedas
verlo en la imagen superior (gracias a mis fabulosas habilidades artísticas), la solución
amortiguadora llena la cámara hasta un nivel en el que apenas cubre el gel.

5. El extremo del gel que tiene los pozos se coloca hacia el electrodo negativo. El extremo sin
pozos (hacia donde migrarán los fragmentos de ADN) se coloca hacia el electrodo positivo.
b. ¿Cómo se mueven los fragmentos de ADN a través del gel?
Una vez que el gel está en la cámara, cada una de las muestras de ADN que queremos
analizar (por ejemplo, cada reacción de PCR o cada plásmido digerido con enzimas de
restricción) se transfiere cuidadosamente a uno de los pozos. Un pozo se reserva para el
marcador de peso molecular, un estándar de referencia que contiene fragmentos de ADN de
longitudes conocidas. Los marcadores de ADN comerciales cubren diferentes intervalos de
tamaños, por lo que trataremos de usar uno con buena "cobertura" en el intervalo de tamaños
en el que esperamos encontrar nuestros fragmentos.
A continuación, se aplica energía eléctrica a la cámara y empieza a fluir corriente a través del
gel. Los grupos fosfato de su esqueleto de azúcares-fosfato le otorgan una carga negativa a
las moléculas de ADN, por lo que comienzan a moverse a través de la matriz de gel hacia el
polo positivo. Cuando el sistema está encendido y pasa corriente por el gel, se dice que el gel
está corriendo
c. Visualización de los fragmentos de ADN:
4. METODOLOGIA:
a. Paso 1: Se inició descargando el programa Snap Gene en nuestras laptops/
computadoras.

6. b. Leímos y comprendimos un articulo “Aislamiento de bacterias con potencial
biorremediador y análisis de comunidades bacterianas de zona impactada por
derrame de petróleo en Condorcanqui – Amazonas – Perú”
c. Descargamos la secuencia de material genético de la página web NCBI, en formato
fasta, para cada una de las cepas bacterianas.

7. d. Insertamos la secuencia descargada en el programa Snap gene, para guardarla con la
extensión del programa y así poder utilizarla posteriormente
e. Abrimos un gel de agarosa con el material genético anteriormente establecido y así
vamos añadiendo cada material genético a nuestro gel de agarosa.
5. RESULTADOS
Obtuvimos un gel de sacarosa con todas las cepas de la bacteria establecida en el articulo.

8. 6. CONCLUSIONES
Factores como la carga, el tamaño y la forma de las moléculas, así como las características
del tampón de electroforesis, la concentración del gel y la potencia eléctrica, tienen un
impacto sobre la movilidad de las moléculas en el gel. Entre las moléculas de masa y forma
molecular semejante, las más cargadas migrarán con mayor rapidez. Por otra parte, distintas
moléculas interactúan en medida distinta con la agarosa. Cuanto menos simple sea la
interacción, más lenta es la migración de las moléculas.
En esta práctica de laboratorio, obtuvimos diversas muestras a la electroforesis mediante gel
de agarosa. Sin embargo, estas moléculas difieren por su estructura, composición química y
carga. Es por ello que es un método eficaz para evaluar el ADN.
7. BIBLIOGRAFIA
- Abbasian, F., Lockington, R., Megharaj, M., Naidu, R. (2016). The Biodiversity
Changes in the Microbial Population of Soils Contaminated with Crude Oil. Current
Microbiology, 72(6), 663-670. https://doi.org/10.1007/s00284-016-1001-4
- Aguilera, F., Méndez, J., Pásaroa, E., & Laffona, B. (2010). Review on the effects of
exposure to spilled oils on human health. Journal of Applied Toxicology, 30(4), 291-
301. https://doi. org/10.1002/jat.1521
- Lane, D. J. (1991). 16S/23S rRNA sequencing In: Stackebrandt E, Goodfellow M,
editors. Nucleic acid techniques in bacterial systematics. 115-175.

9. - Alegbeleye, O. O., Opeolu, B. O., & Jackson, V. A. (2017). Polycyclic Aromatic
Hydrocarbons: A Critical Review of Environmental Occurrence and Bioremediation.
Environmental Management, 60(4), 758-783. https://doi.org/10.1007/s00267- 017-
0896-2.
LINKS DE PLATAFORMAS:
CALAMEO:
- https://www.calameo.com/read/007389715c94b176c4f50
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- https://www.academia.edu/s/39120f13d4?source=link