Aula ministrada durante a disciplina de Biologia Molecular de Microrganismos, no Programa de Pós-Graduação em Microbiologia da Universidade Federal de Minas Gerais.
TODAS AS OBSERVAÇÕES SÃO VÁLIDAS PARA REAL TIME!!!!!!!
Concentração normal de K+ no tampão: 50 - 100 mM
BAIXA ESPECIFICIDADE LEVA À FORMAÇÃO DE PRODUTOS INESPECÍFICOS
DICA: DESCONGELAR E VORTEXAR BASTANTE O MgCl2!!
Remoção dos fosfatos beta e gama dos dNTPs para associação à fita de DNA.
It has been reported that increasing the concentration of Mg++ increases the activity of Taq DNA polymerase but at the deprivation of specificity. On the other hand the lesser concentration of Mg++ will lowers the Taq's activity but increases its specificity.
Thermus aquaticus = termofílica Gram Negativa
ENZIMAS ANTIGAS: KLENOW ou T4 DNA Pol
TAQ = MEIA-VIDA DE 40 MINUTOS a 95º C
AUMENTAR A QTDE DE ENZIMA NÃO MELHORA O RENDIMENTO!!!
ERROS DE PIPETAGEM DEVIDO AO GLICEROL!
PROOFREADING = BLUNT
NON-PROOFREADING = OVERHANGING (A)