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- 1. FRECUENCIA DE GENOTIPOS DE ALTO RIESGO DEL VIRUS PAPILOMA HUMANO DETECTADOS MEDIANTE REACCION DE CADENA POLIMERASA EN MUJERES DE 21 A 70 AÑOS, PROCESADAS EN EL LABORATORIO LLONTOP CAJAMARCA PERU 2021 AL 2022 UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO SEGUNDA ESPECIALIDAD DE BIOLOGIA MOLECULAR Y GENETICA ALUMNOS: Lic. Marco Eduardo Bermeo Tesen Lic. Manuel Eduardo Chepe Pinglo
- 2. GENERALIDADES DEL VIRUS DEL PAPILOMA HUMANO • Virus ADN - doble cadena circular - 8000 pares de bases ( 8 genes y 1 Región RNC) - Sin envoltura pero con una cápside proteica icosaédrica con 72 capsómeros • Familia Papovaviridae que afecta células escamosas del epitelio del tracto genital bajo, oral y nasal • 200 genotipos del VPH - 30 :causantes de infecciones anogenitales - Son clasificados como alto y bajo riesgo • Carcinogénicos (alto riesgo): 16-18-31-33-35- 39-45-51-52-56-58-59-67-68- 73- 82 • Probablemente carcinogénicos: 26-53 y 66. • Bajo riesgo: 6- 11- 40-42- 43- 44- 54-55- 57- 61-62-64-69- 70-71- 72- 81- 83-84 y CP6108. (9, 16)
- 3. DIAGNÓSTICO • Los miembros de la familia VPH no se pueden cultivar in vitro; por lo tanto la detección de VPH depende estrictamente de análisis moleculares de la secuencia de ADN del virus • Tres tipos de métodos de hibridación de ácidos nucleicos usados para detectar el VPH: las sondas directas de ácidos nucleicos (Southern Blot), métodos de amplificación de blanco (PCR) y la amplificación de la señal de hibridación (Captura de híbridos)
- 4. • PCR en tiempo real que detecta simultáneamente el ADN codificante para las oncoproteínas E6/E7 de 13 tipos de VPH de alto riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, y 68) más el VPH 66 XPERT HPV (CEPHEID) • GeneXpert de Cepheid (Sunnyvale, California) • Diseñado para usarse con muestras cervicales recolectadas en PreservCyt con un dispositivo similar a una escoba o una combinación de cepillo / espátula endocervical
- 5. • PCR Real Time • La Base • La Válvula • El cuerpo • El tubo de reacción • Las perlas de reacción
- 6. • Ingreso de muestra • Embolo baja al tubo central y la válvula gira a la primera posición • Embolo aspira muestra y la válvula rota a una nueva posición • El Embolo baja empujando la muestra hacia una área activa • A través del filtro se activa una bocina sónica
- 7. • La bocina sónica da energía para romper las células y liberar material genético • El material genético liberado se empuja hacia la cámara de perlas de reacción y son mezclados por el embolo para disolver las perlas • La muestra preparada se introduce en el tubo de reacción, donde se da la amplificación • Los LED iluminan la solución con hasta 10 colores diferentes (Mas brillante mas presencia de ADN objetivo)
- 8. • Amplificación del ADN diana por PCR y detección simultánea • El ADN diana se marca y se amplifica con una sonda que tiene una etiqueta fluorescente • Las sondas utilizadas en la tecnología Xpert se llaman "Molecular Beacons” • El producto acumulado se controla y mide a través de la fluorescencia detectada • Más de una diana puede ser amplificado y detectado (multiplex) y cada diana se marca con diferentes colores
- 9. • Unión de sondas con su diana en la prueba Xpert: El fluoróforo reportero se encuentra apagado por acción del supresor cuando la sonda se encuentra inactiva, solamente al unirse a su diana se genera el híbrido que libera la molécula fluorescente, lo que resulta en la emisión de fluorescencia
- 10. Estuvo conformado por 105 muestras de hisopado de cérvix uterino que se tomaron en el Laboratorio Llontop Cajamarca del 2021 al 2022. Estuvo conformado por 105 mujeres que acudieron al Laboratorio Llontop Cajamarca del 2021 al 2022, a quienes les tomaron muestras de hisopado de cérvix uterino en el medio de transporte respectivo para el procesamiento de la prueba de detección de ADN de Virus del Papiloma Humano de alto riesgo, mediante la metodología de reacción en cadena de polimerasa.
- 11. RECOLECCION DE LA MUESTRA Las muestras de cuello uterino recolectadas en la solución PreservCyt se han validado para su uso con el Xpert HPV Assay. TRANSPORTE DE LA MUESTRA Solucion de PreservCyt se pueden transportar a 2-30°C. ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA Se pueden almacenar hasta 6 meses después de la fecha de colección.
- 12. Gen Xpert HPV-Detección de ADN Proceso de la muestra-PCR en tiempo real Parámetros a seguir
- 13. Reporte Negativo Reporte Positivo
- 14. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022 TABLA N° 1. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo según resultado en mujeres que acudieron a Laboratorio Llontop-Cajamarca. Durante los años del 2019 - 2020 se solicitaron 105 solicitudes de ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo de ellos salieron positivos 26 (24.76%).
- 15. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022 TABLA N° 2. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo según serotipo en mujeres que acudieron al Laboratorio Llontop-Cajamarca. Durante los años 2019 - 2020, de los 26 (24.76%) pacientes que salieron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo positivos, por serotipo la mayor frecuencia fue de otros tipos de alto Riesgo con 18 (17.14%) y con menor frecuencia HPV 16 con 3 (2.86%), HPV 18-45 con 1 (0.95%). Se tuvo doble reacción HPV 18-45 con otros tipos de alto Riesgo con 3 (2.86%) y HPV 16 con otros tipos de alto Riesgo con 1 (0.95%).
- 16. RESULTADOS: PERIODO 2021-2022 TABLA N° 3. Frecuencia de pacientes que se le solicitaron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo según serotipo y edad en mujeres que acudieron al Laboratorio Llontop-Cajamarca. Durante los años 2019 - 2020, de los 26 (24.76%) pacientes que salieron ADN Papiloma Virus Humano de alto riesgo positivos, el rango de edad con mayor frecuencia fue de 31 a 40 años de edad con 11.43%.
- 17. Obtén la vacuna contra el papiloma humano. Usa condón.