tinciones

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CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS Y MICROSCOPICAS DE
BACTERIAS, METODOS DE TINCION.
ALBA NELLY
ASTRID MONTES
DAHYANA ENRIQUEZ
MICHAEL ALZATE
Santiago de Cali, 2022-05-01
UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA
Michael.Alzate00@usc.edu.co

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INTRODUCCION
De manera general, se denomina tinción al proceso y resultado de teñir, en el área de la Microbiología. Se trata de una técnica
empleada en los laboratorios con el objetivo de optimizar la visión de aquello que se observa a través de un microscopio, por lo
tanto, consiste en aplicar un colorante al material en estudio para que resulte más simple detectar determinados microorganismos.
Las tinciones serán siempre uno de los aspectos más importantes y el primer paso para la detección de microorganismos, pues
una vez identificadas podremos observar cada una de sus características, como morfología (cocos, bacilos, etc.) y agrupación
(tétradas, cadenas,etc.), así como su clasificación (Gram positivos, Gram negativos, etc.), Por lo tanto, el primer paso en toda
determinación de microorganismos es realizar una correcta tinción.
Una de las características más importante de las bacterias es su morfología, definida por el tamaño, la forma y la estructura.
Existen bacterias en forma redondeada denominadas cocos, en forma cilíndrica, denominadas bacilos y una tercera morfología
como son las que tienen forma de espirales, denominadas espirilos. A su vez cada categoría puede clasificarse con base a diferentes
arreglos.
Estas características pueden determinarse al realizar un análisis, cumpliendo las diferentes técnicas para obtenerlo. Las células
no teñidas son prácticamente transparentes,pero pueden observarse almicroscopio de luz haciendo preparaciones entre lámina y
laminilla o con microscopios especiales como, por ejemplo: de contraste de fases o de campo oscuro.
Cuando se dispone de un microscopio de luz, se pueden teñir las bacterias para facilitar su visualización. Si se tiñe una muestra
del cultivo extendida y fijada en una lámina portaobjeto con un colorante dado, las células van adquirir el color del colorante
añadido y podrá observarse la forma, tamaño y el arreglo de las mismas. Este tipo de coloración se conoce con el nombre de
coloración simple.
Para obtener mayor información sobre la morfología y composición química de las bacterias, debe recurrirse a tinciones
diferenciales que involucran el uso de varios reactivos y éstas pueden diferenciarse con base al color que retienen. Ej. Tinción de
Gram y Tinción de Ziehl Neelsen.

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1. OBJETIVOS
 Conocer el mecanismo básico y ventajas de una
tinción.
 Conocer la morfología de las colonias bacterianas.
 Aprender conceptos básicos relacionados a:
 Definición del colorante.
 Clasificación química.
 Características del colorante
 Tinción simple
 Tinción diferencial
 Tinción especial
 Identificar característicasenlas bacteriasen estudio en
base a las diferentes tinciones.
ESPECÍFICOS
- Qué soluciones de utilizan para cada coloración
- Que tipos de tinciones encontramos.
- Que características microscópicas y
macroscópicas de bacterias existen.
2. INTRODUCION
3. METODOLOGIA
Para elestudio de las características macroscópicas y
microscópicas de bacterias, así con métodos de tinción se
realizaron los siguientes ensayos.
TINCION SIMPLE
En un portaobjetos añadir una gota de medio de cultivo
bacteriano en la que se preparó una fina extensión de un frotis,
luego con la ayuda de un mechero encendido se flameó el
cubreobjetos por la parte opuesta de la muestra por 1 minuto,
fijándola al calor.
El frotis se cubrió con 1 gota de azul de metileno por 1 minuto
y luego se retiró el colorante mediante un suave lavado con
agua destilada sobre el portaobjetos para no desprender la
muestra, y dejamos secar.
Procedimos a examinar en el microscopio comenzando con
10x, 40x para enfocar, y luego continuamos con el objetivo de
100x. añadimos 1 gota de aceite de inmersión, esto con el fin
de no rayar el lente y determinar la forma, distribución y
coloración de las bacterias.
TINCION DE GRAM
En un portaobjetos se preparó un extendido fino de una colonia
bacteriana y se dejó secar al ambiente.
Se procedió a fijar con la ayuda de un mechero,pasando de 3 a
4 veces sobre la llama. Colocamos esta muestra sobre un
soporte de tinción y se cubrió con cristal violeta durante 1
minuto, luego se retiró el colorante con agua destilada.
Seguidamente se adiciono lugol a la muestra durante 1 minuto
y se realizó un lavado como en el paso anterior, posteriormente
se retiró el colorante de las células con alcohol - etanol
goteando por 10segundos sobre el portaobjetos, hasta que las
gotas de etanol salieron casi incoloras.
Las células Gram- pierden el colorante violeta y las Gram +
seguirán violetas.
Por último, se agregó safranina como colorante de contraste,y
se lavó como en los pasos anteriores con agua, este colorante
solo marcaron las células Gram- .
Se realizaron observaciones microscópicas en 4x hasta 40x y
en 100x usando aceite de inmersión para determinar cuáles
bacterias observadas eran Gram- y cuales eran Gram + .
TINCION DE ESPORAS.
4.ANÁLISIS DE RESULTADOS

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Se realizó el procedimiento de acuerdo como lo
indico la guía de laboratorio, lo cual arrojo
resultados positivos ya que se presentaron
crecimientos en las diferentes cajas y formas de
siembra.
Siembra por método de estría
Imagen No. 3 siembra en estría B. Subtilis
Siembra en agar MacConkey
Imagen No. 4 siembra de E. coli en Agar MacConkey
Siembra masiva en Agar nutritivo
Imagen No. 5 siembra en masivo S. Aureus
Siembra en profundidad por vertido en placa.
Imagen No.5 y 6 siembra en profundidad E. coli diluciónes
Siembra en superficie.

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Imagen 7 y 8 . siembra en superficie.
CONCLUSION.
La utilización de medios de cultivos es de gran
importancia en la industria de alimentos, nos permite
conocer las condiciones en las cuales se desarrolla los
microorganismos tales como bacterias, hongos, algas,
levaduras, etc.
La esterilidad es uno de los requisitos necesarios que
deben cumplir los medios de cultivos para que se dé el
crecimiento adecuado de las bacterias.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado
correcto de acidez o
alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de
todo microorganismo contaminante
En los diferentes medios de cultivo se encuentran
numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos
de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos
fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del
medio y para detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a identificarlos.
El suero y la sangre completa se añaden para promover
el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.

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