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MARCADORES
 TUMORALES

GENETICA Y BIOLOGICA MOLECULAR
    ADRIANA MARIA GIL ZAPATA.
Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
MARCADORES TUMORALES

Sustancia generalmente de carácter
proteico producidas por tejidos tumorales.
 Lo ideal es que sean sensibles y
capaces de detectar a los enfermos con
cáncer, evitando los falsos negativos.
MARCADOR TUMORAL
• Biomolecula o proceso biologico que
  puede ser medido y que es sintetizado o
  liberado por las celulas cancerosas como
  respuesta a un proceso tumoral maligno.
• Marcado tumoral ideal: especificidad
  100%: especifico del tumor.
• Sensibilidad 100%: Dx etapas tempranas.
CONCEPTOS
Son sustancias antigénicas que pueden
ser dosables en tejidos, orina y sangre.
Pueden elevarse en condiciones
benignas.
Algunos no son específicos de un tipo
particular de cáncer.
No se elevan en todos los portadores de
cáncer
CONCEPTOS
• Especialmente en etapas tempranas de
  la enfermedad
• Los niveles se miden para programar la
  terapia y seguimiento
• Su disminución es signo favorable del
  tratamiento
• Control de recaída
INDICACIONES
Screening: Muy pocos

Diagnóstico: Frecuente en pacientes
          sintomáticos
Evaluación de Tto médico quirúrgico: lo más
  usado
CLASIFICACIÓN
    MARCADORES TUMORALES SEGÚN SU ESTRUCTURA
   TIPO DE MARCADOR                    EJEMPLO

                            Fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina,
       ENZIMAS             creatincinasa, deshidrogenasa láctica,
                                 enolasa neuroespecífica,…
                            Gonadotropina coriónica humana,
      HORMONAS,
                             catecolaminas (y metabolitos),
NEUROTRANSMISORES Y SUS
                                  serotonina y ácido 5-
     METABOLITOS
                                 hidroxindolacético,…
                                 α-fetoproteína, antígeno
                          carcinoembriónico, antígeno específico
      PROTEÍNAS
                                  de la próstata, ferritina,
                          inmunoglobulinas, CA19-9, CA15-3,…
 RECEPTORES CELULARES            Estrógeno y progesterona
   ÁCIDOS NUCLEICOS                        DNA
ANTÍGENO PROSTÁTICO
        ESPECÍFICO (PSA)
DIAGNÓSTICO:
• Tacto rectal:
• PSA
• Biopsia: para determinar si una masa
  sospechosa es CA de próstata
  examinar      microscópicamente     una
  muestra del tejido tomado del área.
PSA
CARACTERISTICAS:

 – Glucoproteina 28.4KDa.
 – células de acini prostático normal, hiperplasia
   y cáncer de prostata
 – valores de referencia: hasta 4 ng/ml
PSA
INDICACIONES:
  – Screening CA. Prostata:         PSA    +   Tacto      rectal,
    Sensbilidad:96%

  – Diagnostico:
     • Hasta 4 ng/ml     se considera normal
     • > 4 hasta 10 ng/ml Sospechoso ( Adenoma
                      prostático ó prostatitis)
     • > 10 ng/ml Gran probabilidad de ser CA. Próstata

  – SEGUIMIENTO:
     • A las 6 semanas postquirúrgico se hace no detectable
     • aumento: recurrencia ó metastasis
PSA
• 200.000 casos anuales.
• Segundo       cáncer     más
  mortífero en hombres.
• Aparece sobre los 60 años.
• Normalmente se detecta
  cuando el tumor ya está muy
  avanzado y es de difícil
  curación. Si e detectase a
  tiempo, las posibilidades de
  sobrevivir son muy altas
TECNICAS INMUNOQUIMICAS
• Técnicas de laboratorio que aplican las
  propiedades de la reacción antígeno- anti
  cuerpo para medir compuestos, enzimas
  entre otros.
• ANTIGENO (Ag)
   Material que estimula la formación de
  anticuerpos. Es un Inmunógeno. Epitope.
TECNICAS INMUNOQUIMICAS
ANTICUERPO (Ac)
Proteínas tipo gamaglobulinas, formadas
por dos cadenas pesadas y dos livianas.
Cada cadena posee una región constante y
una variable (le confiere el carácter único
al Ac, por allí se une al Ag)
Inmunoglobulinas (paratopo )
Hay 5 tipos: Ig M, Ig G, Ig A, Ig E, Ig D.
UNION ANTIGENO _ ANTICUERPO
TECNICAS INMUNOQUIMICAS
REACCIONES AG - AC:
La unión Ag-Ac es no covalente,
intervienen fuerzas como:

Atracción electrostática
Fuerzas de Van der Waals
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Interacciones hidrofóbicas
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CARACTERISTICAS UNION AG-AC:
La especificidad de la reacción es 100%
       Ag + Ac         Ag - Ac
a. Afinidad
b. Heterogeneidad de la respuesta
c. Avidez
d. Reactividad cruzada
Es Reversible
Serologìa: el estudio de las reacciones Ag,Ac.
Caracteristicas unión Ag-Ac
Afinidad
 Es la suma de todas las fuerzas atractivas y
  repulsivas entre un sitio de unión de ese
  anticuerpo y el correspondiente epitopo.
Avidez
 Es la fuerza con la que el Ac multivalente se une a
  un Ag multivalente. Aunque depende de las
  afinidades individuales de cada uno de los
  determinantes individuales de ese antígeno, su
  valor es mucho mayor que la suma de afinidades.
CLASIFICACION DE LOS
            INMUNOENSAYOS
La reacción Ag – Ac es indetectable in vitro.
  Requiere una segunda reacción o fase
  indicadora, que permite clasificarlas en:
•   Neutralización
•   Inmunoensayos de precipitación
•   Inmunoensayos por aglutinación
•   Fijación del complemento
•   Inmunonefelometría
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ELISA
DETECCION PSA
                                                       A ntígen os



   1                   +




                           A n ticu erpos
                                                                         P rim er co m plejo A c-A g
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                                       E xceso d e anticuerp os m arcados

                                                                                  C o m p lejo "sandw ich " A c-A g-A c*
ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las
placas ELISA se preparan recubriendo los pocillos con
las soluciones en las que se sospecha se encuentra el
antígeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican
la presencia de antígeno en la solución analizada


ELISA indirecto: Las placas ELISA se preparan de una
forma idéntica a la anterior. Los controles positivos y
negativos son los mismos. El sistema de detección
emplea dos anticuerpos : uno primario contra el
antígeno, y uno secundario marcado contra el primario
ELISA sandwich (ensayo de captura de antígeno y
detección mediante inmunocomplejos).

el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno se lava el
exceso de anticuerpo, se aplica la muestra donde se
encuentra el antígeno, que será retenido en el pocillo al ser
reconocido por el primer anticuerpo.

Después de un segundo lavado se elimina el material no
retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo
anti-antígeno marcado.

Cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la
base y un segundo anticuerpo, que lo marca. Este ensayo
tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la
amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
          Sandwich ELISA
            Antigen Test




                           Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
           Sandwich ELISA
               Antigen Test




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                              Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
           Sandwich ELISA
               Antigen Test




      Add Specimen




                              Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
            Sandwich ELISA
                 Antigen Test




      Add Specimen
      Containing Ag




                                Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
             Indirect ELISA
                   Antibody Test




      (Specimen)




                                   Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
Daría todo lo que sé,
por la mitad de lo que ignoro.
                             René Descartes

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Maracadores Tumoral Gy Bm 2010 Pdf

  • 1. MARCADORES TUMORALES GENETICA Y BIOLOGICA MOLECULAR ADRIANA MARIA GIL ZAPATA. Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
  • 2. MARCADORES TUMORALES Sustancia generalmente de carácter proteico producidas por tejidos tumorales. Lo ideal es que sean sensibles y capaces de detectar a los enfermos con cáncer, evitando los falsos negativos.
  • 3. MARCADOR TUMORAL • Biomolecula o proceso biologico que puede ser medido y que es sintetizado o liberado por las celulas cancerosas como respuesta a un proceso tumoral maligno. • Marcado tumoral ideal: especificidad 100%: especifico del tumor. • Sensibilidad 100%: Dx etapas tempranas.
  • 4. CONCEPTOS Son sustancias antigénicas que pueden ser dosables en tejidos, orina y sangre. Pueden elevarse en condiciones benignas. Algunos no son específicos de un tipo particular de cáncer. No se elevan en todos los portadores de cáncer
  • 5. CONCEPTOS • Especialmente en etapas tempranas de la enfermedad • Los niveles se miden para programar la terapia y seguimiento • Su disminución es signo favorable del tratamiento • Control de recaída
  • 6. INDICACIONES Screening: Muy pocos Diagnóstico: Frecuente en pacientes sintomáticos Evaluación de Tto médico quirúrgico: lo más usado
  • 7. CLASIFICACIÓN MARCADORES TUMORALES SEGÚN SU ESTRUCTURA TIPO DE MARCADOR EJEMPLO Fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina, ENZIMAS creatincinasa, deshidrogenasa láctica, enolasa neuroespecífica,… Gonadotropina coriónica humana, HORMONAS, catecolaminas (y metabolitos), NEUROTRANSMISORES Y SUS serotonina y ácido 5- METABOLITOS hidroxindolacético,… α-fetoproteína, antígeno carcinoembriónico, antígeno específico PROTEÍNAS de la próstata, ferritina, inmunoglobulinas, CA19-9, CA15-3,… RECEPTORES CELULARES Estrógeno y progesterona ÁCIDOS NUCLEICOS DNA
  • 8. ANTÍGENO PROSTÁTICO ESPECÍFICO (PSA) DIAGNÓSTICO: • Tacto rectal: • PSA • Biopsia: para determinar si una masa sospechosa es CA de próstata examinar microscópicamente una muestra del tejido tomado del área.
  • 9. PSA CARACTERISTICAS: – Glucoproteina 28.4KDa. – células de acini prostático normal, hiperplasia y cáncer de prostata – valores de referencia: hasta 4 ng/ml
  • 10. PSA INDICACIONES: – Screening CA. Prostata: PSA + Tacto rectal, Sensbilidad:96% – Diagnostico: • Hasta 4 ng/ml se considera normal • > 4 hasta 10 ng/ml Sospechoso ( Adenoma prostático ó prostatitis) • > 10 ng/ml Gran probabilidad de ser CA. Próstata – SEGUIMIENTO: • A las 6 semanas postquirúrgico se hace no detectable • aumento: recurrencia ó metastasis
  • 11. PSA • 200.000 casos anuales. • Segundo cáncer más mortífero en hombres. • Aparece sobre los 60 años. • Normalmente se detecta cuando el tumor ya está muy avanzado y es de difícil curación. Si e detectase a tiempo, las posibilidades de sobrevivir son muy altas
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  • 21. TECNICAS INMUNOQUIMICAS • Técnicas de laboratorio que aplican las propiedades de la reacción antígeno- anti cuerpo para medir compuestos, enzimas entre otros. • ANTIGENO (Ag) Material que estimula la formación de anticuerpos. Es un Inmunógeno. Epitope.
  • 22. TECNICAS INMUNOQUIMICAS ANTICUERPO (Ac) Proteínas tipo gamaglobulinas, formadas por dos cadenas pesadas y dos livianas. Cada cadena posee una región constante y una variable (le confiere el carácter único al Ac, por allí se une al Ag) Inmunoglobulinas (paratopo ) Hay 5 tipos: Ig M, Ig G, Ig A, Ig E, Ig D.
  • 23. UNION ANTIGENO _ ANTICUERPO
  • 24. TECNICAS INMUNOQUIMICAS REACCIONES AG - AC: La unión Ag-Ac es no covalente, intervienen fuerzas como: Atracción electrostática Fuerzas de Van der Waals Puentes de hidrógeno Interacciones hidrofóbicas
  • 25. TECNICAS INMUNOQUIMICAS CARACTERISTICAS UNION AG-AC: La especificidad de la reacción es 100% Ag + Ac Ag - Ac a. Afinidad b. Heterogeneidad de la respuesta c. Avidez d. Reactividad cruzada Es Reversible Serologìa: el estudio de las reacciones Ag,Ac.
  • 26. Caracteristicas unión Ag-Ac Afinidad Es la suma de todas las fuerzas atractivas y repulsivas entre un sitio de unión de ese anticuerpo y el correspondiente epitopo. Avidez Es la fuerza con la que el Ac multivalente se une a un Ag multivalente. Aunque depende de las afinidades individuales de cada uno de los determinantes individuales de ese antígeno, su valor es mucho mayor que la suma de afinidades.
  • 27. CLASIFICACION DE LOS INMUNOENSAYOS La reacción Ag – Ac es indetectable in vitro. Requiere una segunda reacción o fase indicadora, que permite clasificarlas en: • Neutralización • Inmunoensayos de precipitación • Inmunoensayos por aglutinación • Fijación del complemento • Inmunonefelometría • Inmunoensayos: ELISA, RIA, etc.
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  • 30. ELISA
  • 31. DETECCION PSA A ntígen os 1 + A n ticu erpos P rim er co m plejo A c-A g S up erficie só lida I I I + I 2 I I E xceso d e anticuerp os m arcados C o m p lejo "sandw ich " A c-A g-A c*
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  • 33. ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las placas ELISA se preparan recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el antígeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican la presencia de antígeno en la solución analizada ELISA indirecto: Las placas ELISA se preparan de una forma idéntica a la anterior. Los controles positivos y negativos son los mismos. El sistema de detección emplea dos anticuerpos : uno primario contra el antígeno, y uno secundario marcado contra el primario
  • 34. ELISA sandwich (ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos). el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno se lava el exceso de anticuerpo, se aplica la muestra donde se encuentra el antígeno, que será retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un segundo lavado se elimina el material no retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo anti-antígeno marcado. Cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la base y un segundo anticuerpo, que lo marca. Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo.
  • 35. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sandwich ELISA Antigen Test Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
  • 36. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sandwich ELISA Antigen Test Add Specimen Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
  • 37. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sandwich ELISA Antigen Test Add Specimen Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
  • 38. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sandwich ELISA Antigen Test Add Specimen Containing Ag Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
  • 39. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Indirect ELISA Antibody Test (Specimen) Adapted from Kuby Immunology, 4th Edition
  • 40. Daría todo lo que sé, por la mitad de lo que ignoro. René Descartes