Este documento describe un protocolo para la extracción de ADN de sangre periférica utilizando el método CTAB. El protocolo implica la lisis celular y nuclear, precipitación de proteínas y ADN, y posterior purificación e hidratación del ADN aislado. El objetivo era extraer ADN de una muestra de sangre y comprender el proceso de aislamiento de ácidos nucleicos. Al aplicar el método, se observó la transformación del pellet y la obtención final de ADN en forma de grumos blanquecinos.

1. PRACTICA DE BCM 1
EXTRACCIÓN DE DNA DE SANGRE PERIFÉRICA
Bustos Claudia, Cango Andrea, Chalán Lucía, Espinosa Sofía, Vargas Vanessa.
Paralelo: “A”
Introducción:
El DNA, está constituido por dos cadenas de nucleótidos, formando una doble hélice, a manera de
escalera enrollada, su estabilidad se debe a la formación de puentes de hidrogeno, además existe la
presencia de enlaces entre bases nitrogenadas (A-T; G-C) y enlaces disulfuro. El modo de replica es
semiconservativo.
La extracción del DNA tiene gran importancia en los procesos para el diagnóstico de enfermedades y
los trastornos genéticos. Extracción de DNA de sangre periférica se denomina “CTAB”, dentro de la
cual se destruye membranas nucleares, se liberan ácidos nucleídos para luego extraerlo con
cloroformo y la precipitación del DNA con etanol al 70%.
Objetivos:
 Extracción de sangre para observar el DNA.
 Aplicar tecnología propia para esta clase de purificación.
 Observar en DNA en su estado propio.
Materiales y Métodos:
Primerio de debe obtener una muestra de sangre periférica en un tubo con anticoagulante.
Se colocó 300ul de muestra, a la cual se le adiciona 900ul de “Cell Lysis Solution”, se homogeniza e
incuba a 37ºC por 10 minutos, posteriormente se centrifuga a 13000 rpm por 45 segundos.
Se elimina el sobrenadante en un tacho, quedando un pellet blanquecino en el fondo, se adicionó
300ul de “Nuclei Lysis Solution” con una micro pipeta y se mezcló para incubarlo por 30 min a 37°C.
Seguidamente se adicionó 130ul de “Protein Precipitation Solution” y se mezclo hasta observarse la
formación de grumos. Luego se realizo una centrifugación a 13000 rpm por 3 minutos y transferencia
del sobrenadante a un nuevo tubo que contenía 300ul de Isopropanol frió.
Una segunda centrifugación a 13000 rpm por 2minutos fue realizada para eliminar el sobrenadante
y se adicionó 200ul de etanol al 70%, una última centrifugación a 13000 rpm por 2 minutos,
eliminando también en sobrenadante.
Se abrió el tubo “ependorf” y se lo tapo con parafina, haciéndole unos pequeños agujeros, se dejó
evaporar el etanol, utilizando la plancha calentadora por aproximadamente 15 a 20 minutos.
La Rehidratación con 50ul de DNA rehydration Solution para proceder a invertir suavemente. Incubar
por una hora a 65°C o dejarlo toda la noche a 4°C.

2. RESULTADOS:
Se observaron cambios dentro de la coloración del pellet blanquecino a un pellet marrón luego de
realizada la primera centrifugación.
La deshidratación de la muestra dio lugar para observar la gran cantidad de agua que encontramos
en nuestro organismo.
Se observó la formación de la hebra de DNA posterior a múltiples eliminaciones de sobrantes.
Finalmente se obtuvo la molécula de ADN, la cual presentaba características a simple vista de ser
pequeña, como grumos color blanquecino-amarillento.
CONCLUSIONES:
Se cumplió cabalmente con los objetivos planteados, extraer nítidamente DNA de una muestra de
sangre periférica.
Se comprendió la utilización del aislamiento de DNA llamado “CTAB”, como también el manejo de
instrumental para esta clase de prácticas como micro-pipetas las cuales nos permiten obtener
cantidades exactas.
Los conceptos aprendidos en clase pudieron ser aclarados, tales como los de lisis celular (ruptura de
membranas), utilización de buffers, centrifugación, baño maría entre otras.
BANCO DE PREGUNTAS:
*¿Qué reactivos podría contener la solución de lisis celular y por qué? Anote al menos 2.
Lo contiene el cloruro de magnesio, sacarosa, 10mM Tris-HCl (pH 7.5) 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), las
cuales forman un tapón con las células generando desestabilización osmótica, para que se hinchen y
se estallen las membranas celulares.
*¿Qué función tiene la solución de lisis nuclear y la de precipitación de proteínas?
La “Nuclei Lysis Solution” actúa en la membrana nuclear rompiendola y liberando los ácidos nucleicos
y la “Protein Precipitation Solution” solvata inicia la precipitación.
*Para precipitar se usa el alcohol isoamílico, ¿Se podría utilizar etanol puro. Si o No?
No porque el etanol, lo que hace es rehidratar
* El ADN tiene una estructura especial, describa las características más importantes
La estructura del ADN está definida por la "secuencia" de las bases nitrogenadas en la cadena de
nucleótidos, la cual contiene la información genética del ADN, la unión de las bases se realiza
mediante puentes de hidrógeno.

3. Busque otro protocolo que se pueda aplicar para la extracción de ADN que requiera la preparación de
reactivos, y menciónelo brevemente.
Método comercial InstaGene Matrix: para extraer DNA a partir de sangre entera, en reacciones de
PCR. En un tubo Eppendorf se agrega solución de Lysis Buffer (pH: 7.9) y sangre entera. Luego de
varios lavados y centrifugaciones con este buffer, se descarta el sobrenadante y se agrega el
InstaGene Matriz al pellet obtenido. Por último, se realizan dos incubaciones, una a 70ºC y otra a
95ºC. Las muestras son guardadas a -20ºC hasta la realización de la técnica de PCR, digestión con
endonucleasas de restricción, southern blot o Dot blot.
BIBLIOGRAFIA:
*Londoño J. 2010. Biología Molecular del gen. Norma Editores. México
Daintiht J., Tootill M. 2005. Diccionario de Biología, Clave del éxito. Ediciones Izansa. *Buenos Aires-
Argentina
*Trujillo B. 2001. Métodos biológicos del genoma humano. Resident S.A. USA
* El portal de la Salud:
www.elportaldelasalud.com,