Dokumen tersebut membahas tentang identifikasi dan tes kepekaan antibiotika dengan menggunakan sistem otomatisasi mikrobiologi Phoenix 100. Sistem ini dapat melakukan identifikasi bakteri dan tes kepekaan antibiotika secara simultan dari 100 spesimen dengan cepat dan akurat.

1. TUTOR DIVISI PENYAKIT INFEKSI
IDENTIFIKASI DAN TES KEPEKAAN
ANTIBIOTIKA DENGAN
AUTOMATED MICROBIOLOGY SYSTEM
PHOENIX TM 100
Yuni Setyowati/I.G.A.A. Putri Sri Rejeki
Surabaya, 17 Maret 2011

2. PENDAHULUAN
• Identifikasi(ID) dan Tes Kepekaan
Antibiotika (AST) dengan automated
microbiology system bertujuan untuk
mendapatkan hasil ID/AST dengan lengkap
dan lebih cepat.
• Sistem otomatisasi dalam bidang
mikrobiologi muncul setelah ditemukannya
identifikasi biokimia dengan metode mikro
dan tes kepekaan antibiotika dengan Broth
mikrodilusi.
AST = Antimicrobial Susceptibility Test
2

3. PHOENIX TM 100
• Sistem otomatisasi dalam
bidang mikrobiologi untuk
melakukan identifikasi (ID)
bakteri dan tes kepekaan
antibiotika (AST) secara
kuantitatif dengan Minimal
Inhibitory Concentration
(MIC).
3

4. SPESIMEN
• Spesimen bisa berasal dari darah, pus, urine, faeces
dan cairan tubuh lainnya.
• Spesimen dikultur terlebih dahulu dengan media
yang sesuai untuk mendapatkan koloni
• Prinsip : isolat yang akan di tes berasal dari koloni
murni
• Isolat harus berumur antara 18 – 24 jam
4

5. Perlakuan Spesimen
Pus Darah Urine Faeces
Wadah
Media BACTEC/ Steril Media
Transport BACT ALERT Transport
Positif
Kultur : Kultur : Kultur : Kultur :
Blood Agar Blood Agar Blood Agar SS agar
MacKonkey Agar MacKonkey Agar MacKonkey Agar TCBS Agar
MacKonkey Agar
Koloni
5
Pengecatan Gram

6. Instrumen Phoenix
• Kapasitas 100 panel
• Panel bisa dimasukkan
setiap saat
• Random entry
• Fungsi :
- Inkubasi panel pada
suhu 35oC
- Melakukan pembacaan
dan perhitungan setiap
20 menit sampai 16 jam
(kinetik). 6

7. PANEL ID/AST PHOENIX
• Ada 3 panel ID/AST Phoenix :
1. Panel Gram Positif
2. Panel Gram Negatif
ID
3. Panel Streptokokus
(Strep Panel) AST
Panel Gram Positif 7

8. Panel Phoenix
• Panel ID Phoenix terdiri darI 51
sumuran : 45-46 substrat kering
dan 2 kontrol fluoresen
• Panel AST Phoenix
menggunakan 14-21 jenis
antibiotika yang mengisi 84
sumuran (Satu jenis antibiotika
minimal 3 sumuran untuk
mengetahui MIC nya). Satu
sumuran berisi kontrol
pertumbuhan.
• Panel tidak bisa dibaca secara
manual 8

9. IDENTIFIKASI (ID) PHOENIX
Merupakan modifikasi dari metode klasik yaitu
fermentasi, oksidasi, degradasi serta hidrolisis
berbagai substrat.
Menggunakan substrat kromogenik dan
florogenik maupun substrat sumber karbon
tunggal.
Bisa mengidentifikasi : 200 spesies bakteri Gram
Negatif, 150 spesies bakteri Gram Positif, 40
spesies Streptokokus
9

10. TES KEPEKAAN ANTIBIOTIKA (AST )
PHOENIX
• AST ditentukan dari MIC
menggunakan metode
2,0
two fold dilution
4,0
• MIC (Konsentrasi MIC 8,0
Inhibisi Minimum) : 16,0
Konsentrasi antibiotika 32,0
terendah yang
menghambat
pertumbuhan bakteri
10

11. TES KEPEKAAN ANTIBIOTIKA (AST )
PHOENIX
• Adanya pertumbuhan bakteri ditentukan
dari :
– Turbiditas: pembelahan sel dan
peningkatan jumlah sel
– Indikator Redox: Pengurangan indikator
warna pada AST mengindikasikan adanya
metabolisme bakteri
11

12. PROSEDUR PHOENIX
1. Pembuatan inokulum ID
2. Pembuatan inokulum AST
3. Menyiapkan Panel
4. Inokulasi Panel
5. Memasukkan Panel ke instrumen
12

13. Daftar komponen/alat yang
dibutuhkan:
1. Instrumen Phoenix
2. Panel Phoenix
3. Phoenix ID Broth
4. Phoenix AST Broth
5. Larutan indikator AST Phoenix
6. Tempat inokulasi Phoenix
7. BD Phoenix Spec Nephelometer
8. 25µL pipet dan tip steril
9. Alat yang lain
13

14. I. PEMBUATAN INOKULUM ID
• Konfirmasi hasil
pewarnaan Gram untuk
memilih panel yang
sesuai.
• Beri label pada tabung
Phoenix TM ID Broth.
Ambil koloni murni
dengan ujung lidi kapas
steril dan suspensikan
pada ID Broth.
14

15. Lanjutan PEMBUATAN INOKULUM ID
• Tutup tabung dan
vortex selama 5 detik.
• Sesuaikan densitas
inokulum 0,5
McFarland dengan
menggunakan BD Vortex 5”
PhoenixSpec
Nephelometer (Panel
Gram Positif dan Gram
Negatif boleh
menggunakan 0,25
McFarland)
0,5-0,6 McFarland
15

16. II. PEMBUATAN INOKULUM AST
• Beri label pada tabung
Phoenix AST Broth.
• Tambahkan satu tetes
Indikator AST. Tutup
tabung dan bolak-balik
beberapa kali.
• Pipet 25 µL dari tabung
ID Broth ke tabung
AST Broth. Tutup
tabung dan bolak-balik
beberapa kali.
16

17. III. MENYIAPKAN PANEL
• Buka panel dari
bungkusnya, kemudian
lepaskan desiccant
(pengawet).
• Tulis data pasien pada
bagian bawah panel.
• Letakkan panel pada
tempat inokulasi
dengan lubang diatas
dan bantalan di bawah.
17

18. IV. INOKULASI PANEL
• Masukkan inokulum ID
ke Panel bagian ID.
Biarkan cairan melintasi
jalurnya sebelum
menggerakkan panel.
• Masukkan inokulum AST
ke Panel bagian AST.
Biarkan cairan melintasi
jalurnya sebelum
menggerakkan panel.
18

19. IV. MEMASUKKAN PANEL KE INSTRUMEN
• Panel disimpan di
tempat inokulasi hingga
kelebihan cairan benar-
benar terserap. Panel
harus dalam posisi
vertikal sampai
dimasukkan ke
instrumen.
• Panel dimasukkan dalam
instrumen Phoenix
19

20. Pembacaan dalam Instrumen
• ID : menggunakan sumber cahaya
merah, hijau, biru, dan UV
 AST : diukur turbiditas dan perubahan warna
menggunakan sumber cahaya merah, hijau, dan
biru
 Sinar UV (367 nm), sinar tampak (426 -623 nm)
• Waktu pembacaan instrumen untuk
identifikasi yaitu 2-12 jam
• Waktu pembacaan instrumen untuk AST
maksimal 16 jam
20

21. HASIL IDENTIFIKASI PHOENIX
• Hasil identifikasi organisme akan muncul
pada Formulir Laporan Phoenix dengan
persentase peluang dari basis data Phoenix
berdasarkan profil reaksi substrat.
• Hasil dari masing-masing substrat akan
tampak sebagai +, -, V atau X untuk
masing-masing reaksi.
 ID dikeluarkan jika confidence value sebesar >90%
21

22. HASIL AST PHOENIX
• Hasil MIC dan Hasil Kategori Interpretif
(Sensitif, Intermediate dan Resisten)
ditunjukkan pada masing-masing
antibiotika.
• Pesan khusus akan ditunjukkan ketika
BDXPertTM System mendeteksi hasil yang
memiliki pola resistensi tertentu.
22

23. Contoh print out hasil AST
23

24. Contoh print out hasil ID
24

25. Quality Control
• Quality control dilakukan 1 bulan sekali
• Minimal menggunakan 2 reference strain:
satu strain Gram Positif dan satu strain Gram
Negatif
• Hasil dari QC ada 2:
1. Fail
2. Pass
• Apabila hasil fail > 10 %, maka harus
dilakukan checking.
25

26. Reference strains yang digunakan untuk
Quality Control
PANEL GRAM POSITIF:
Staphylococccus aureus ATCC 29213
Enterococcus faecalis ATCC 29212
PANEL GRAM NEGATIF :
Escherichia coli ATCC 25922
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
26

27. Reference strains yang digunakan untuk
Quality Control
PANEL STREPTOKOKUS:
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
(ID & AST)
Streptococcus agalactiae ATCC 13813
(Khusus ID)
27

28. • Escherichia coli ATCC 25922 (beta-lactamase negative)
• Escherichia coli ATCC 35218 (beta-lactamase positive)
• Staphylococccus aureus ATCC 25923 (beta-lactmase
negative, oxacillin susceptible)
• Staphylococccus aureus ATCC 38591 (beta-lactmase positive)
• Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (untuk aminoglycosides)
• Enterococcus faecalis ATCC 29212 (untuk memeriksa level
thymidine atau thymine pada MHA)
• Haemophilus influenzae ATCC 49766 (untuk cephalosporins)
• Haemophilus influenzae ATCC 10211 (untuk kontrol media)
• Neissseria gonorrheae ATCC 49226
28

29. Kelebihan dan Kekurangan Phoenix
KELEBIHAN
1. Bisa melakukan pemeriksaan ID/AST untuk 100 spesimen dalam
sekali waktu.
2. Tidak perlu proses vakum.
3. Minimal maintenance
KEKURANGAN
1. Tidak bisa dipakai untuk jamur dan anaerob.
2. Untuk beberapa antibiotika yang tidak ada dalam panel
dilakukan TKA manual dengan disc difusi
3. Kesulitan dalam mendeteksi mikroorganisme yang memiliki
pola resistensi baru
29

30. BAGAIMANA PHOENIX MENDETEKSI
RESISTENSI BAKTERI?
BD XPERT SYSTEM :
Mendeteksi pola resistensi bakteri dan
merubah hasil AST sesuai aturan yang
dipakai.
Phoenix BD Xpert bisa disetting menggunakan :
1. CLSI = Clinical and Laboratory Standards Institute
2. DIN = Deutsches Institut Fur Normung
3. lainnya
30

31. 31

32. 32

33. Surabaya, 17 Maret 2011

34. 34

35. Media yang mengandung Esculin
• Listeria Agar Base Oxford Cat 1133
• Listeria Chromogenic Agar Base Cat 1345
• Bile Esculin Agar :
Bile Esculin Agar is used primarily to differentiate
Enterococcus from Streptococcus. Members of the
genus Enterococcus are capable of growing in the
presence of 4% bile (oxgall) and hydrolyzing esculin
to glucose and esculetin. Esculetin combines with
ferric ions to produce a black complex.
35

36. MEDIA KULTUR YANG DISARANKAN
ID/AST Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif
1. Chocolate agar
2. Chocolate agar with 5% Sheep Blood
3. Cystine – Lactose- Electrolyte Deficient (CLED)
4. Mac Conkey Agar (Khusus Gram Negatif)
5. Eosin Methylene Blue (EMB) Agar (Khusus Gram Negatif)
6. Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood
36

37. MEDIA KULTUR YANG DISARANKAN
Untuk ID/AST Streptokokkus :
1. Chocolate agar
2. Columbia Agar with 5% Sheep Blood
3. Columbia Agar with 5% Horse Blood
4. Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood
5. Phenylethanol (PEA) Agar (Gram positif)
6. Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood
37

38. Substrat ID Gram Positif
4MU-BD- 4MU-AD- 4MU-BD- 3-METHYLADIPIC BETA-GENTIOBIOSE
CELLOBIOSIDE GLUCOSIDE GALACTOSIDE ACID
L-ALANINE-AMC ARGININE- COLISTIN THYMIDINE D-SUCROSE
ARGININE-AMC
4MU-BD- GLYCINE-PROLINE- POLYMYXIN B FLOURESCENT MALTOTRIOSE
GLUCOSIDE AMC POSTIVE CONTROL
L-PROLINE-AMC 4MU-BD- D-GLUCONIC ACID FLUORESCENT N-ACETYL-
GLUCURONIDE POSITIVE CONTROL GLUCOSAMINE
L-PYROGLUTAMIC L-LEUCINE-AMC 3-METHYL ALANINE-ALANINE- D-TREHALOSE
ACID-AMC GLUTARIC ACID PNA
L-PHENYLALANINE- 4MU-N-ACETYL-BD - D-FRUCTOSE L-PROLINE-PNA D-TAGATOSE
AMC GLUCOSAMINIDE
L-TRYPTOPHAN- L-ARGININE-AMC IMINODIACETIC VALINE-ALANINE- MALTOSE
AMC ACID PNA
4MU-PHOSPHATE 4MU-PHOSPHATE ALPHA- PNP-AD-GLUCOSIDE DEXTROSE
(with Trehalose) KETOGLUTARIC
ACID
METHIONINE-AMC L-HISTIDINE-AMC D-MANNITOL PNP-PHOSPHATE UREA
ESCULIN NITROCEFIN L-ISOLEUCINE-AMC
38

39. Substrat ID Gram Negatif
L-PHENYLALANINE- LYSINE-ALANINE- MALONATE N-ACETYL- D-FRUCTOSE
AMC AMC GALACTOSAMINE
4MU-N-ACETYL-BD- GLUTARYL-GLYCINE- ALPHA- N-ACETYL- D-GLUCONIC ACID
GLUCOSAMINIDE ARGININE-AMC KETOGLUTARIC ACID GLUCOSAMINE
L-GLUTAMIC ACID- ARGININE- TIGLIC ACID SORBITOL D-MELIBIOSE
AMC ARGININE-AMC
L-TRYPTOPHAN- GLYCINE-PROLINE- FLUORESCENT SUCROSE L-ARABINOSE
AMC AMC POSITIVE CONTROL
L-PYROGLUTAMIC COLISTIN FLUORESENT GALACTURONIC METHYL-B-
ACID-AMC POSTIVE CONTROL ACID GLUCOSIDE
L-PROLINE-AMC POLYMYXIN B L-PROLINE-NA MALTULOSE ORNITHINE
L-ARGININE-AMC D-MANNITOL GAMMA-L- L-RHAMNOSE UREA
GLUTAMYL-NA
ARGININE- CITRATE BIS (PNP) BETA-GENTIOBIOSE ESCULIN
ARGININE-AMC PHOSPHATE
GLYCINE-AMC ACETATE PNP-BD-GLUCOSIDE DEXTROSE
L-LEUCINE-AMC ADONITOL BETA-ALLOSE D-GALACTOSE
39

40. Substrat ID Streptokokus
AMYGDALIN ONP-BD-GLUOSIDE FLUORESCENT L-TRYPTOPHAN- 4MU-PHOSPHATE
POSITIVE AMC
CONTROL
D-GALACTOSE PNP-AD- THYMIDINE L-VALINE-AMC 4MU-AD-
GALACTOSIDE GLUCOSIDE
D-MANNITOL PNP-BD- PULLULAN ARGININE- 4MU-BD-
CELLOBIOSIDE ARGININE-AMC GLUCURONIDE
D-RAFFINOSE PNP-BD- D-TRAHALOSE LYSINE-ALANINE- 4MU-N-ACETYL-BD-
GALACTOSIDE AMC GLUCOSAMINE
D-SORBITOL PNP-AD- D-LACTOSE ASPARAGINE-AMC 4MU-PHOSPHATE
GLUCOSIDE (with trehalose)
D-TREHALOSE PNP-PHOSPHATE LYSINE-AMC L-ARGININE-AMC 4MU-BD-
GALACTOSIDE
DEXTRIN ALANINE-ALANINE- SERINE-TRYOSINE- L-HISTIDINE-AMC ESCULIN
PNA AMC
N-ACETYL- VALINE-ALANINE- L-CITRULLINE-AMC ALANINE-AFC
GLUCOSAMINE PNA
PHENYL L-LYSINE-PNA L-PYROGLUTAMIC 4MU-BD-
GLUCOSIDE ACID-AMC CELLOBIOSIDE
SALICIN FLOURESCENT ISOLEUCINE-AMC 4MU-BD-
POSTIVE CONTROL GLUCOSIDE
40

41. Substrat ID Gram Negatif
Nama Substrat Kode Prinsip
L-PHENYLALANINE-AMC A_LPHET Enzymatic hydrolysis of the amide or
glycosidic bond results in the release of a
4MU-N-ACETYL-BD-GLUCOSAMINIDE A_NAG fluorescent coumarin or 4-
L-GLUTAMIC ACID-AMC A_LGTA methylumbelliferone derivative.
L-TRYPTOPHAN-AMC A_LTRY
L-PYROGLUTAMIC ACID-AMC A_LPYR
L-PROLINE-AMC A_LPROB
L-ARGININE-AMC A_LARGH
ARGININE-ARGININE-AMC A_ARARR
GLYCINE-AMC A_GLYB
L-LEUCINE-AMC A_LLEUH
LYSINE-ALANINE-AMC A_LYALD
GLUTARYL-GLYCINE-ARGININE-AMC A_GUGAH
ARGININE-ARGININE-AMC A_ARARR
GLYCINE-PROLINE-AMC A_GLPRB
41

42. Substrat ID Gram Negatif
COLISTIN C_CLST Resistance to the antimicrobial agents
POLYMYXIN B C_PXB results in a reduction of resazurin based
indicator.
D-MANNITOL C_DMNT
CITRATE C_CIT
ACETATE C_ACT
ADONITOL C_ADO
MALONATE C_MLO
ALPHA-KETOGLUTARIC ACID C-KGA
TIGLIC ACID C_TIG
FLUORESCENT POSITIVE CONTROL FLR_CTL Control to standardize fluorescent substrate
FLUORESENT POSTIVE CONTROL FLR_CTL results.
L-PROLINE-NA N_LPROT Enzymatic hydrolysis of the colorless amide
GAMMA-L-GLUTAMYL-NA N_LGGH substrate releases yellow p-nitroaniline.
42

43. Substrat ID Gram Negatif
BIS (PNP) PHOSPHATE P_BPHO nzymatic hydrolysis of the colorless aryl
PNP-BD-GLUCOSIDE P_BDGLU substituted glycoside releases yellow p-
nitrophenol.
BETA-ALLOSE R_BALL
N-ACETYL-GALACTOSAMINE R_NGA Utilization of carbohydrate results in lower pH
and change in indicator (phenol red).
N-ACETYL-GLUCOSAMINE R_NGU
SORBITOL R_DSBT
SUCROSE R_DSUC
GALACTURONIC ACID R_GRA
MALTULOSE R_MTU
L-RHAMNOSE R_LRHA
BETA-GENTIOBIOSE R_BGEN
DEXTROSE R_DEX
D-GALACTOSE R_DGAL
D-FRUCTOSE R_DFRU
43

44. Substrat ID Gram Negatif
Nama Substrat Kode Prinsip
D-GLUCONIC ACID R_DGUA
D-MELIBIOSE R_DMLB
L-ARABINOSE R_LARA
METHYL-B-GLUCOSIDE R_MBGU
ORNITHINE S_ORN Utilization of ornithine results in pH rise and
change in fluorescent indicator.
UREA S_URE Hydrolysis of urea and the resulting ammonia
change results in pH rise and change in
fluorescent indicator.
ESCULIN T_ESC Hydrolysis of esculin results in a black
precipitate in the presence of ferric ion.
44

45. Substrat ID Gram Positif
Nama Substrat Kode Prinsip
4MU-BD-CELLOBIOSIDE M_BDCELL Hidrolisis enzimatik dari ikatan glikosida dan
amin menghasilkan pelepasan sebuah
L-ALANINE-AMC A_LALT
fluorescent coumarin atau derivat 4-
4MU-BD-GLUCOSIDE M_BDGLU methylumbelliferone.
L-PROLINE-AMC A_LPROB
L-PYROGLUTAMIC ACID-AMC A_LPYR
L-PHENYLALANINE-AMC A_LPHET
L-TRYPTOPHAN-AMC A_LTRY
4MU-PHOSPHATE M_PHOS
METHIONINE-AMC A_META
4MU-AD-GLUCOSIDE M_ADGLU
ARGININE-ARGININE-AMC A_LARGH
GLYCINE-PROLINE-AMC A_GLPRB
4MU-BD-GLUCURONIDE M_BDGLC
L-LEUCINE-AMC A_LLEUH
4MU-N-ACETYL-BD-GLUCOSAMINIDE M_NAG
L-ARGININE-AMC A_LARGH
4MU-PHOSPHATE (with Trehalose) M_PHOT
L-HISTIDINE-AMC A_LHIST 45

46. Substrat ID Gram Positif
COLISTIN C_CLST Resistense pada antimikroba tersebut
POLYMYXIN B C_PXB menghasilkan reduksi dari indikator berbasis
resazurin.
D-GLUCONIC ACID C_DGUA Penggunaan sumber kabon menghasilkan reduksi
3-METHYL GLUTARIC ACID C_3MGA dari indikator berbasis resazurin.
D-FRUCTOSE C_DFRU
IMINODIACETIC ACID C_IMN
ALPHA-KETOGLUTARIC ACID C_KGA
D-MANNITOL C_DMNT
3-METHYLADIPIC ACID C_MAA
THYMIDINE C_THY
FLOURESCENT POSTIVE CONTROL FLR_CTL Kontrol untuk menstandarkan hasil fluoresen dari
FLUORESCENT POSITIVE CONTROL FLR_CTL substrate.
ALANINE-ALANINE-PNA N_ALALH Hidrolisis enzimatik dari substrat amin yang tidak
L-PROLINE-PNA N_LPROT berwarna melepaskan p-nitroaniline yang
berwarna kuning.
VALINE-ALANINE-PNA N_VAALA
46

47. Substrat ID Gram Positif
PNP-AD-GLUCOSIDE P_PAGLU Hidrolisis enzimatik dari glikosida tersubstitusi aryl
melepaskan p-nitrophenol yang berwarna kuning.
PNP-PHOSPHATE P_PHOL
BETA-GENTIOBIOSE R_BGEN Penggunaan dari Karbohidrat menghasilkan pH
yang lebih rendah dan perubahan dalam indikator
D-SUCROSE R_DSUC
(phenol red).
MALTOTRIOSE R_MTT
N-ACETYL-GLUCOSAMINE R_NGU
D-TREHALOSE R_DTRE
47

48. Substrat ID Gram Positif
Nama Substrat Kode Prinsip
D-TAGATOSE R_DTAG
MALTOSE R_MAL
DEXTROSE R_DEX
UREA S_URE Hidrolisis dari urea dan amonia sebagai hasilnya
menyebabkan peningkatan pH dan perubahan
dalam indikator fluoresen.
ESCULIN T_ESC Hidrolisis dari esculin menghasilkan presipitat
berwarna hitam karena adanya ion ferry.
NITROCEFIN L_NCF Hidrolisis enzimatik dari cincin β-lactam
menghasilkan perubahan warna.
48

49. Substrat ID Streptokokus
Nama Substrat Kode Prinsip
AMYGDALIN R_AMY Utilization of carbohydrate results in lower pH
D-GALACTOSE R_DGAL and change in indicator (Phenol red).
D-MANNITOL R_DMTL
D-RAFFINOSE R_DRAF
D-SORBITOL R_DSBT
D-TREHALOSE R_TRE
DEXTRIN R_DXN
N-ACETYL-GLUCOSAMINE R_NGU
PHENYL GLUCOSIDE R_PHG
SALICIN R_SAL
ONP-BD-GLUOSIDE O_BOGLU Enzymatic hydrolysis of the colorless aryl
PNP-AD-GALACTOSIDE P_ADGAL substituted glycoside releases yellow p-
nitrophenol.
PNP-BD-CELLOBIOSIDE P_CELB
PNP-BD-GALACTOSIDE P-GALB
PNP-AD-GLUCOSIDE P_-PAGLU
PNP-PHOSPHATE P_PHOL
49

50. Substrat ID Streptokokus
ALANINE-ALANINE-PNA N_ALALH Enzymatic hydrolysis of the colorless amide
substrate releases yellow p-nitroanilide.
VALINE-ALANINE-PNA V-VAALA
L-LYSINE-PNA N-LLYSB
FLOURESCENT POSTIVE CONTROL FLR_CTL Control to standardize fluorescent substrate
results.
FLUORESCENT POSITIVE CONTROL FLR_CTL
THYMIDINE C_THY Utilization of a carbon source resulting in a
reduction of the indicator (Resazurin based).
PULLULAN C_PUL
D-TRAHALOSE C_TRL
D-LACTOSE C_DLAC
50

51. Substrat ID Streptokokus
LYSINE-AMC M_LYSA Enzymatic hydrolysis of the amide or glycosidic
SERINE-TRYOSINE-AMC M_SETY bond results in the release of a fluorescent
L-CITRULLINE-AMC M_LCTU coumarin or 4-methylumbelliferone
derivative.
L-PYROGLUTAMIC ACID-AMC M_LPYR
ISOLEUCINE-AMC M_LISO
L-TRYPTOPHAN-AMC M_LTRY
L-VALINE-AMC M_LVAL
ARGININE-ARGININE-AMC M_ARARR
LYSINE-ALANINE-AMC M_LYALD
ASPARAGINE-AMC M_APGT
L-ARGININE-AMC M_LARGH
L-HISTIDINE-AMC M_LHIST
ALANINE-AFC M_ALFT
4MU-BD-CELLOBIOSIDE M_BDCEL
4MU-BD-GLUCOSIDE M_BDGLU
4MU-PHOSPHATE M_PHOS
4MU-AD-GLUCOSIDE M_ADGLU
4MU-BD-GLUCURONIDE M-BDGLUC
4MU-N-ACETYL-BD-GLUCOSAMINE M_NAG
51

52. Substrat ID Streptokokus
Nama Substrat Kode Prinsip
4MU-PHOSPHATE (with trehalose) M_PHOT
4MU-BD-GALACTOSIDE M_BDGAL
ESCULIN T_ESC Hydrolysis of esculin results in a black
precipitate in the presence of ferric ion.
52

53. Daftar Antibiotik Panel Gram Positif
Antibiotika Kode Rasio Konsentrasi (µg/mL)
Ampicilin AM 0.125-32
Chloramphenicol C 1-16
Clindamycin CC 0.25-4
Erythromycin E 0.25-4
Gatifloxacin GAT 1-4
Gentamicin GM 4-16
Gentamicin Synergy GMS 500
Levofloxacin LVX 1-4
Linezolid LZD 1-4
Moxifloxacin MXF 0.5-4
Nitrocefin NCF N/A
Nitrofurantoin FM 16-64
Norfloxacin NOR 1-8
Oxacillin OX 0.125-4
Penicillin P 0.125-16
Quinupristin/Dalfopristin SYN 1-4
Rifampin RA 0.5-2
Streptomycin Synergy STS 1000
Tetracycline TE 0.5-8
Trimethoprim/Sulfamethoxazole SXT 0.5/9.5-2/38
Vancomycin VA 1-16 53

54. Daftar Antibiotik Panel Gram Negatif
Antibiotika Kode Rasio Konsentrasi (µg/mL)
Amikacin AN 8-32
Amoxicillin/Clavulanate AMC 4/2 – 16/8
Ampicillin AM 4-16
Aztreonam ATM 1-16
Cefotaxime CTX 2-32
Cefoxitin FOX 4-16
Ceftazidime CAZ 0.5-16
Ceftriaxone CRO 2-32
Cefuroxime CXM 4-16
Cephalothin CF 2-16
Ciprofloxacin CIP 0.5-2
Confirmatory ESBL ESBL -
Gentamicin GM 2-8
Imipenem IPM 1-8
Levofloxacin LVX 1-4
Nalidixic Acid NA 8-32
Nitrofurantoin FM 16-64
Ticarcilin TIC 4-64
Ticarcilin/Clavulanate TIM 2/2 – 64/2
Tobramycin NN 2-8
Trimethoprim/Sulfamethoxazole SXT 0.5/9.5 – 2/38 54

55. Daftar Antibiotik Panel Streptokokus
Antimcrobia Rasio Konsentrasi (µg/mL)
Amoxicillin 0.25 – 4
Cefepime 0.063 - 2
Cefotaxime 0.063 – 2
Ceftriaxone 0.063 – 2
Clindamycin 0.031 - 2
Erythromycin 0.031 - 4
Levofloxacin 0.5 - 4
Linezolid 0.5 - 4
Meropenem 0.063 - 2
Moxifloxacin 0.25 - 2
Penicillin 0.031 - 8
Tetracyclin 0.25 - 8
Trimethoprim/Sulfamethoxazole 0.25/4.75 – 2/38
Vancomycin 0.25 - 16
55

56. Antibiotika yang tidak ada di Phoenix
1. Gram Negatif :
a. Meropenem
b. Doripenem
c. Piperacillin/Taxobactam
d. Sulbactam/Cefoperazone
e. Teicoplanin
f. Ampicilin Sulbactam
2. Gram Positif :
a. Cefoxitin
b. Novobiosin
Untuk antibiotika yang tidak ada dalam Phoenix dilakukan
Tes Kepekaan Antibiotika manual dan pelaporan hasilnya
digabungkan dengan hasil dari Phoenix
56

57. Amikacin Pass
Gentamicin Pass
Tobramycin Pass
Imipenem Pass
Cephalothin Pass
Cefuroxime Pass
Cefoxitin Pass
Ceftazidime Pass
Cefotaxime Pass
Ceftriaxone Fail
Aztreonam Fail
Ampicillin Pass
Ticarcilin Pass
Amoxicillin-Clavulanate Pass
Ticarcilin-Clavulanate Pass
Ticarcilin-Sulfamethoxazole Pass
Nitrofurantoin Pass
Ciprofloxacin Pass
Levofloxacin Pass
Nalidixic Acid Pass
57

58. BD Phoenix™ Resistance Markers
• Staph ß-Lactamase (Nitrocefin test)
• Methicillin Resistance Staphylococcus (based
on Oxacillin Interpretation)
• mecA detection in S. aureus
• VRSA
• Vancomycin Resistant Enterococcus (based on
Vancomycin MIC)
• High Level Aminoglycoside Resistant
Enterococcus (Gentamicin 500 mcg/ml and
Streptomycin 1000 mcg/ml)

59. ESBL
• ESBLs are detected via:
• ESR Confirmatory test (result similar to CLSI
confirmatory test for ESBL)
• ESR confirmatory test is on every Gram Negative
Panel
• ESBL Phenotype test
– Any MIC for Cefotaxime, Ceftriaxone, Ceftazidime,
Aztreonam, or Ceftizoxime >=2, Any MIC Cefpodoxime
>=8

60. ESR Test (Confirmatory ESBL)
Cefpodoxime Ceftazidime Cefepime
Cefotaxime Ceftriaxone Ceftazidime
Clavulanate Clavulanate Clavulanate
Negative Positive
not ESBL ESBL

61. ESBL Screening
VITEK VITEK2 PHOENIX
Sensitivitas 93,1 % 79,3 % 98,3 %
Spesifisitas 95,8 % 95,8 % 95,8 %
Diambil dari The importance of ESBL Screening Test in Rapid Automated
Antimicrobial Susceptibility Testing (AST) ,
http://www.bd.com/ds/technicalCenter/whitepapers/LR704.pdf
61

62. BD Phoenix™ ESR (ESBL) Test
• Positive Percent Agreement (183/189) 96.8%
• Negative Percent Agreement (780/812) 96.1%
• Overall Percent Agreement (963/1001) 96.2%

63. SCREENING ESBL PHOENIX
63

64. Kultur Darah
Darah
Hasil
Positif
BACTEC : KULTUR, ID Positif
screening Pengecatan AST
Phoenix
Negatif
Hasil
Negatif
Negatif: Tidak ada pertumbuhan kuman 64

65. 65

66. 66

67. Swabs
• Sterile cotton swabs or wooden applicator
sticks
• Do not use polyester and calcium alginate
swabs
• In an R&D study, cotton fragments (from
some brands of cotton swabs) produced false
readings
• To evaluate swabs by mimicking inoculation
using a few test swabs (no organisms) in ID
broth and see if a false reading should occur

68. Langkah-langkah untuk mengencerkan broth.
a. Gunakan spidol, tandai level Broth di tabung Phoenix ID
Broth yang sudah diinokulasi
b. Gunakan pipet steril, secara aseptis tambahkan Phoenix ID
Broth segar ke inokulum Hanya Phoenix ID Broth yang boleh
digunakan untuk mengencerkan inokulum
c. Putar tabung dan biarkan 10 detik
d. Letakkan tabung di nephelometer dan ukurlah kembali
turbiditas (kekeruhan) suspensi
e. jika pembacaan lebih besar dari 0,6, ulangi Langkah b-d
68

69. Langkah-langkah untuk mengencerkan broth.
f. jika pembacaan 0,5 – 0,6, lanjutkan ke Langkah e
g. Dengan pipet steril, secara aseptis angkatlah (buang)
kelebihan Broth hingga level orisinal yang ditunjukkan
dengan tanda di tabung yang dibuat dengan spidol (Langkah
a)
h. Buanglah kelebihan Broth untuk menghindari tumpah di
panel. Dan jangan pula terlalu banyak membuangnya karena
panel harus diisi secukupnya
i. Broth kini dapat digunakan untuk menginokulasi Phoenix AST
Broth dan/atau Phoenix Panel
69

70. INTERPRETASI HASIL
1. Jika Identifikasi tidak terbaca :
a. Bakteri tidak ada dalam daftar phoenix
b. Kesalahan teknik
c. Panel rusak
d. Keliru panel
2. Jika Tes Kepekaan Antibiotik tidak terbaca
:
a. Kesalahan teknik
b. Panel rusak
c. Keliru panel
70

71. Inoculum Fluid
• Buffered Saline
• 4.5 mL/tube
• 0.5-0.6 McFarland organism
concentration
71

72. Tempat Inokulasi Phoenix
• Sudut 24o
72

73. Barcode Scanner
Front of Instrument
73

74. Bacterial Growth Curve
• All microorganisms undergo similar growth
patterns.
• Each growth Curve has 4 Phases
– 1 Lag Phase
• occurs immediately after inoculation
• cells do not grow; cells per volume do not increase
74

75. Microbial Growth Curve
# cells / ml
Lag
Time
75

76. Microbial Growth Curve
# cells / ml
Log
Lag
Time
76

77. Microbial Growth Curve
• 2.) Growth Phase
– Exponential Phase
– Log Phase
– During this phase the microbe is growing at the
maximum rate possible.
– Cells per volume increases dramatically
– Most research is performed on cells during log
phase
77

78. Microbial Growth Curve
Stationary
# cells / ml
Log
Lag
Time
78

79. Microbial Growth Curve
• 3.) Stationary Phase
– Growth levels off.
– Cells per volume does not increase or decrease
– Growth Rate = Death Rate
– Due to
• Depletion of Nutrients
• Increase in Waste Products
79

80. Microbial Growth Curve
Stationary
# cells / ml
Log Death
Lag
Time
80

81. Microbial Growth Curve
• 4.) Death Phase
– Death Rate exceeds Growth Rate
– Cells per volume decreases
– Due to:
• Very low concentrations of Nutrients
• Very high concentrations of Waste Products
81

82. Bacterial Growth Curve
82
Figure 6.14

83. Phases of Growth
83
Figure 6.15

84. Turbidity
84
Figure 6.21

85. Turbidity
85
Figure 6.21

86. KOMPONEN NEPHELOMETRI
86

87. PRINSIP NEPHELOMETRI
87

88. Broth Dilution Method
Day 1
128 64 32 16 8 4 2 C1 C2
Add 1 ml of test bacteria
(1*106 CFU/ml) to tubes
containing 1 ml broth and
concentration of
antibiotic (mg/l)
64 32 16 8 4 2 1 C1 C2 Controls:
C1 = No antibiotic, check
Bacterial conc.= 5*105 CFU/ml viability on agar plates
immediately
Incubate 35 oC, o/n
C2 = No test bacteria
88

89. Broth Dilution Method
Day 2
64 32 16 8 4 2 1 C1 C2
Record visual turbidity
Subculture non-turbid tubes
to agar plates (use 0.01 ml
standard loop)
0.01 ml (spread plate), Incubate 35 oC, o/n
MIC = 16 mg/l
Day 3
Determine CFU on plates:
At 16 mg/ = 700 CFU/ml >
0.1% of 5*105 CFU/ml
64 32 16
MBC = 32 mg/l
89

90. • Antimicrobial Susceptibility testing can be down by
three ways:
1. Minimum Inhibitory Concentration (MIC)
2. Disk Diffusion Method
3. Minimum Bactericidal Concentration (MBC)
90

91. 1. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) :
Principle:
 The tube dilution test is the standard method for
determining levels of resistance to an antibiotic.
 Serial dilutions of the antibiotic are made in a liquid
medium which is inoculated with a standardized number
of organisms and incubated for a prescribed time.
 The lowest concentration of antibiotic preventing
appearance of turbidity is considered to be the minimal
inhibitory concentration (MIC).
91

92.  Different concentrations of Gentamycin in Nutrient broth:
Conc. in mcg/ml
0.1 0.2 0.4 0.8 1.6 3.1
Gentamicin, generally considered a bacteriocidal antibiotic, for this
bacterium, has an MIC of 0.8 mcg/ml 92

93.  Different concentrations of Tetracycline in Nutrient broth:
Conc. in mcg/ml
0.1 0.2 0.4 0.8 1.6 3.1 6.3 12.5
Tetracycline, generally considered a bacteriostatic antibiotic, for this
bacterium, has an MIC of 1.6 mcg/ml
93

94. 2. Disk-diffusion Method (Kirby-Bauer Method):
 The disk-diffusion method (Kirby-Bauer) is more suitable for
routine testing in a clinical laboratory where a large number of
isolates are tested for susceptibility to numerous antibiotics.
 An agar plate is uniformly inoculated with the test organism
 A paper disk impregnated with a fixed concentration of an
antibiotic is placed on the agar surface.
 Growth of the organism and diffusion of the antibiotic
commence simultaneously resulting in a circular zone of
inhibition in which the amount of antibiotic exceeds inhibitory
concentrations.
 The diameter of the inhibition zone is a function of the amount
of drug in the disk and susceptibility of the microorganism.
94

95.  This test must be rigorously standardized since zone size is also
dependent on:
 inoculum size,
 medium composition,
 temperature of incubation,
 excess moisture and
 thickness of the agar.
 Zone diameter can be correlated with susceptibility as
measured by the dilution method.
 Further correlations using zone diameter allow the designation
of an organism as "susceptible", "intermediate", or "resistant"
to concentrations of an antibiotic which can be attained in the
blood or other body fluids of patients requiring chemotherapy.95

96.  Using a dispenser, antibiotic-impregnated disks are placed onto the
agar surface.
 As the bacteria on the lawn grow, they are inhibited to varying
degrees by the antibiotic diffusing from the disk.
96

97. Antibiotic/Antimicrobial
• Antibiotic: Chemical produced by a
microorganism that kills or inhibits the growth
of another microorganism
• Antimicrobial agent: Chemical that kills or
inhibits the growth of microorganisms
97

98. Microbial
Sources of
Antibiotics
98

99. Mechanisms of Antimicrobial Action
• Bacteria have their own enzymes for
– Cell wall formation
– Protein synthesis
– DNA replication
– RNA synthesis
– Synthesis of essential metabolites
99

100. Modes of Antimicrobial Action
100

101. Prokaryotic Cell Walls
101

102. JENIS RESISTENSI AB YANG
BERKEMBANG SEKARANG
1. Methicillin-Resistant Staphylococcus
aureus (MRSA):
– Dikode oleh gen mecA  perubahan
pada PBP2.
– Mencegah ikatan AB (gol. Beta lactam)
secara efektif.
– Prosedur lab. Untuk mendeteksi MRSA:
• Kultur: direct plating/ broth enrichment.
• Oxacillin/methicillin susceptibility tests
102

103. JENIS RESISTENSI AB YANG
BERKEMBANG SEKARANG
2. Extended-Spectrum -Lactamase
Producing Organisms (ESBL):
• Sering oleh E.coli dan K.pneumoniae.
• Faktor resiko:
1. penggunaan kateter idwelling dengan terapi
antibiotika (seperti ceftazidime),
2. pembedahan intra-abdominal
3. ventilasi mekanis.
• ESBLs menghidrolisa sebagian besar antibiotika -
lactam kecuali carbapenems dan cephamycins
(cefoxitin, cefotetan, dan cefmandole)
103

104. JENIS RESISTENSI AB YANG
BERKEMBANG SEKARANG
3. Resisten terhadap Fluoroquinolone
• Mekanisme: melalui salah satu mekanisme
utama yaitu: perubahan dari target
antibiotika dan perubahan penembusan
antibiotika untuk mencapai target
104

105. 105

106. 106

107. 107

108. ISTILAH
• Inoculation is the placement of something that
will grow or reproduce, and is most commonly
used in respect of the introduction of a serum,
vaccine, or antigenic substance into the body of a
human or animal, especially to produce or boost
immunity to a specific disease.
• The microorganism used in an inoculation is
called the inoculant or inoculum.
• Primary isolate, a pure microbial or viral sample
that has been obtained from an infected
individual
• Broth is a liquid preparation
108

109. SPESIMEN PUS
109

110. KONDISI KLINIS & PENYEBAB TERSERING
Tabel 1. Kondisi klinis dan mikroorganisme yang ditemukan
dari spesimen (WHO, 2003)
NO SPESIMEN MIKROORGANISME YG DITEMUKAN
1 R. peritoneum Enterokokus, Bacteroides fragilis & Clostridia
2 Abses Kokus Gram (+) & Batang Gram (-)
3 Kelenjar limfe Stafilokokus, Streptokokus & Enterokokus (Khusus anak : M.
tuberkulosis)
4 Kulit & Abses & luka infeksi : Stafilokokus, bila luka terbuka dpt
subkutan Streptokokus β-hemolitikus
5 Luka bakar Derajat 2 & 3 : Stafilokokus & Pseudomonas aeruginosa
6 Eksudat Bakteri, jamur atau virus. Dapat infeksi campuran aerob &
anaerob.
Dari rongga pleura: Pneumokokus, Streptokokus, H. influenza &
Streptokokus anaerob, batang Gram (-) anaerob/ M.
tuberkulosis.
110

111. Tabel 2. Mikroorganisme yg tdp pd luka infeksi & abses
Kokus Gram (+) Mikroba anaerob Batang Gram (-) Mikroba aerob
Fakultatif fakultatif
Staphylococcus Bacteroides sp Proteus sp Pseudomonas sp
aureus Clostridium sp Enterobacteriaceae Candida sp
Streptococcus Peptococcus sp lain Mycobacterium sp
pyogenes Peptostreptococcus sp Eschericia coli Actinomyces sp
Enterococcus B. anthracis
Neisseria spp Nocardia sp
(Prihatini, 2006)
111

112. PENGAMBILAN & PENGIRIMAN
Spesimen Pus
RS dg Lab
1. Dgn tehnik steril, aspirasi 5 ml pus
2. Kirim dlm wadah steril atau Swab kapas
3. Celupkan dalam Amies transport medium, segera kirim.
Puskesmas ke Lab.
1. Kumpulkan pd swab kapas,
2. Masukkan dlm Amies transport medium.
3. Buat hapusan.
4. Kirim ke lab seblm 6 jam.
Chessbrough, 1994
112

113. Tabel 3. Penanganan spesimen untuk analisis bakteri
Spesimen Persiapan Jenis & jumlah Wadah Informasi klinik Keterangan
Luka Bersihkan Pus, biopsi Semprit atau Gigitan hewan,
superfisial permukaan luka swab dg media trauma, waktu
dg alkohol 70% transpor (MT) pengiriman
Luka bakar, Bersihkan Untuk kultur Wadah steril Debridement
ulkus permukaan luka kuantitatif & Punch
dekubitus dg alkohol 70% dibuat lubang biopsy utk
luka 3-4 mm evaluasi
dekubitus
Luka dalam, Bersihkan dan Bila mungkin Semprit atau Waktu
abses tertutup dekontaminasi pus diambil > 1 wadah anaerob pengiriman,
ml lokasi
Jaringan, Pembedahan 5-10 mm3 atau Wadah steril dg
pembedahan / aspirat MT
biopsi
(Isenberg, 1998)
113

114. 2. Kultur Spesimen
• Rutin : Blood Agar Plate(BAP), neomycin blood agar (NBA),
MacConkey (MC) dan cooked meat medium (CM).
• Inokulasi spesimen pd 2 BAP, NBA, MC & CM :
– Inkubasi-I pd BAP& MC sec. aerob pd 35-37oC semalam.
– Inkubasi-II pd BAP&NBA sec.anaerob pd 35-37oC,48 jam.
– Inkubasi pd CM pd 35-37oC , 72 jam.
• Jk diduga tuberkulosis : Lowenstein Jensen medium.
(Chessbrough, 1994)
114

115. 4. Pemeriksaan dan Pelaporan Kultur
Rutin : BAP, NBA, MC
Koloni yang mungkin tumbuh :
– Staphylococcus aureus
– Streptococcus pyogenes
– Clostridium perfingens
– Pseudomonas aeruginosa
– Proteus spp.
– E. coli
– Enterococcus
– Bacterioides
– Anaerobic cocci
(Chessbrough, 1994)
115

116. Gambar 1. Blood Agar Plate (Bailey& Scott’s, 2007)
116

117. Gambar 4.
Pertumbuhan batang Gram negatif pada Mac Conkey. (Bailey& Scott’s, 2007)
117

118. SKEMA KULTUR
SPESIMEN PUS
MEDIA PEMISAH (CLED,MC,BA)
inkubasi 37oC 18-24 jam
PENGECATAN GRAM
GRAM POSITIF GRAM NEGATIF
BATANG
BATANG : KOKUS KOKUS
Tak UJI OKSIDASE UJI OKSIDASE
berspora UJI KATALASE UJI KATALASE POSITIF : NEGATIF :
: Listeria POSITIF : NEGATIF : Pseudomonas Enterik
Berspora STAFILOKOKUS BLOOD AGAR, UJI OKSIDASE
Plasma Koagulase inkubasi 37oC,18-24 j POSITIF : Gula-gula: Gula-gula:
: Bacillus
(+): S. aureus STREPTOKOKUS Neisseria TSI, LIM, SC. TSI, LIM, SC.
Plasma Koagulase HEMOLITIK Inkubasi 37oC, Inkubasi
(-) S. epidermidis α hemolisis sebagian 18-24 j 37oC, 18-24 j
(-) Mikrokokus β lisis sempurna
 tidak hemolisis
Lihat tabel
TKA
reaksi bakteri
TKA TKA TKA
118

119. BahanPemeriksaan
SKEMA
Botol Media TPB
KULTUR DARAH Inkubasi 37oC 24 jam
Ada pertumbuhan kuman Tak ada pertumbuhan kuman
Media pemisah (CLED, MC, BA, NA, Inkubasi lagi
ENDO) Inkubasi 37oC 18-24 jam sampai hari ke-5
Pewarnaan Gram
Gram Positif Gram Negatif
Batang Coccus Coccus Batang
Tak berspora Berspora Uji katalase Uji katalase Uji oksidase Uji oksidase Uji oksidase Uji oksidase
listeria bacillus positif negatif negatif positif positif negatif
Manitol agar Inkubasi Blood agar Inkubasi Neisseria Pseudomonas Enterik
37oC 18-24 jam 37oC 18-24 jam
Gula Gula-gula Media
Streptococcus Optochin (+)/S TSI, LIM, SC
Staphylococcus Warna koloni -gula differensial
(streptococcus
kuning emas: pneumonia)
Inkubasi
Staph, Aurius Hemolitik Optochin (-)/R 37oC 18-24
TKA Gula-gula
Koagulase positif Kuning jeruk: a Hemolisis (steptococcus yang lain) jam TSI, LIM, SC
Koagulase negatif Staph, Citrus sebagian Bacitrachin (+)/S
b Lisis sempurna (steptococcus bhemolitic) Inkubasi
Putih: Staph,
Albus g Tidak hemolisis Grup A - Bacitrachin (-)/R Lihat tabel rx bakteri 37oC 18-24
TKA (steptococcus bhemolitic jam
selain grup A)
TKA TKA
119

120. BahanPemeriksaan
SKEMA
Botol Media TPB
KULTUR DARAH Inkubasi 37oC 24 jam
Ada pertumbuhan kuman Tak ada pertumbuhan kuman
Media pemisah (CLED, MC, BA) Inkubasi lagi
Inkubasi 37oC 18-24 jam sampai hari ke-5
Pewarnaan Gram
Gram Positif Gram Negatif
Batang Coccus Coccus Batang
Tak berspora Berspora Uji katalase Uji katalase Uji oksidase Uji oksidase Uji oksidase Uji oksidase
listeria bacillus positif negatif negatif positif positif negatif
Katalase Katalase -if staphylococcus Neisseria: N.meningitidis Fermentasi
streptococcus
Enterobacte
positif N.gonorrhoeae glukosa riaceae
Lactobacillus, (E.coli,
Erysipelothrix •Hemolitik a Shigella,
motility (S. Pneumonia-sensitif optosin, Positif Negatif dll.)
Hemolitik S. Viridan- resisten optosin)
Koagulase
a Hemolisis •Hemolitik b
Koagulase +if negatif sebagian (S. Pyogenes-sensitif bactracin
Positif b Lisis sempurna S. Agalactiae-resisten Bactracin) Pseudomonas
listeria g Tidak hemolisis •Non hemolitik Compylobacter
S. aureus
(enterococcus)=S. Non hemolitik Vibrio
Aeromonas
Negatif s. Epidermidis
corynebacterium s. saprophyticus
120

121. Vitek 2 compact
• Instrumen otomatis untuk
identifikasi bakteri,yeast,
tes sensitivitas antibiotik.
• Memiliki kapasitas 30 tes
( masing-masing 30 tes
untuk identifikasi dan
atau sensitivitasantibiotic)
dalam satu waktu.
121

122. Prosedur kerja kultur darah dengan vitek 2 :
Masukkan sampel darah secara
aseptik ke dalam botol media,
kocok dengan pelan
Masukkan dalam inkubator pada
suhu 35 -37⁰C,6-10 jam, alat akan
memberikan tanda jika ada
pertumbuhan kuman. Bila sampai
waktu tersebut tak ada
pertumbuhan kuman, tunggu
sampai 3 hari.
122

123. Gambar. Inkubator Bact/ Alert
123

124. Prosedur kerja kultur darah dengan vitek 2 :
Bila didapatkan pertumbuhan kuman,
lakukan sub kultur dengan media blood agar,
Mac Conkey dan CLED, kemudian inkubasi
Setelah 24 jam, lihat hasilnya, lakukan
pengecatan Gram untuk menentukan jenis
kuman Gram negatif atau Gram positif.
Setelah itu kita identifikasi dan lakukan TKA
( tes kepekaan antimikroba) dengan alat
vitek 2
124

125. Persiapan sampel :
• Siapkan 2 tabung untuk membuat isolate bakteri
catatan : 2 tabung untuk setiap isolate
• Tiap tabung diisi dengan 3 ml larutan NaCl 0,45%, pH 5,0
• Ambil koloni bakteri, buat suspensi larutan NaCl sampai
homogen pada tabung 1
• Ukur kekeruhan dengan menggunakan alat Densichek,
dengan cara:
– Tabung yang akan diukur dibersihkan terlebih dahulu bagian
luarnya dengan tissue
– Masukkan tabung ke lubang pengukuran pada densichek putar
360⁰ selama 2 detik
– Angka hasil pengukuran akan muncul dalam satuan Mc Farland
125

126. Tabel. 2. KEKERUHAN SUSPENSI YANG DIGUNAKAN UNTUK
INOKULASI KARTU
PRODUK Mc Farland Turbidity
Range
GN 0,50 -0,63
GP 0,50 -0,63
YST 1,80 -2,20
BCL 1,80 -2,20
126

127. Persiapan sampel :
• Jika kekeruhan kurang maka tambahkan koloni
bakteri
• Jika kekeruhan berlebih, maka ambil sejumlah
volume inokulum dan encerkan dengan
menambahkan larutan NaCl
• Untuk tes sensitivitas antibiotik, ambil inokulum dari
tabung pertama ke tabung kedua.
– Kuman Gram negative ambil 145 µL
– Kuman Gram positif ambil 280 µL
127

128. Persiapan sampel :
• Letakkan kartu vitek 2 sesuai dengan urutan identifikasi
dan sensitivitas
• Untuk kuman Gram negatif, kartu identifikasi kuman
menggunakan GN
• Untuk kuman Gram negatif , kartu sensitivitas kuman
menggunakan :
– AST N 13
– AST N 14
– AST N045
– AST N048
128

129. Persiapan sampel :
• Untuk kuman Gram positif, kartu identifikasi kuman
menggunakan GP
• Untuk kuman Gram positif, kartu sensitivitas kuman
menggunakan AST P-536
• INGAT : -Kartu vitek untuk identifikasi berpipa warna
biru
-Kartu vitek untuk tes sensitivitas antibiotik
berpipa warna abu-abu
• Masukkan ke dalam alat vitek, tunggu hasilnya
129

130. 130

131. IDENTIFIKASI dan TKA
• Identifikasi dengan VITEK 2 COMPACT ini paling cepat
3 jam.
• Perlu waktu kira-kira 5-7 jam untuk organisme yang
tumbuhnya lambat.
• Untuk tes kepekaan antimikroba (TKA), perlu waktu
sampai 15 jam, dengan rata-rata waktu 9 jam.
131

132. PHOENIX vs VITEK2
PHOENIX VITEK2
Waktu untuk 3 – 12 jam 2-6 jam
Identifikasi
Waktu untuk AST 5.5-15.5 jam 3-16 jam
Proses -Tidak perlu pemvakuman -Butuh pemvakuman
-AST memakai indikator -AST tidak memakai
indikator
Jumlah panel 100 30,60,120
Panel ID & AST jadi satu panel ID & AST Panel
terpisah
Memasukkan Random Entry Tidak bisa random
Panel entry
Jamur dan Tidak bisa Bisa
anaerob 132

133. PHOENIX PERFORMANCE
CORRECT ID CORRECT ID N
SPECIES LEVEL GENUS LEVEL
BATANG GRAM NEGATIF 96.9% 98.4 % 12246
KOKUS GRAM POSITIF 93,6 % 12899
133

134. REDOX INDICATOR
A redox indicator (also called an oxidation-reduction indicator) is
an indicator that undergoes a definite color change at a specific
electrode potential.
There are two common type of redox indicators:
1.metal-organic complexes (Ex. phenanthroline)
2.true organic redox systems (Ex. Methylene blue)
134

135. 135

136. 136

137. Custom Breakpoint Set-up
DTG
Code
137

138. Phoenix BDXpert
• Manual: panels invoking the rule go to Needs
Attention
– user must make decision to use or not use the rule
on the panel
• Automatic: rule used without user
intervention
138

139. BDXpert Rule Configuration
139

140. Needs Attention
140

141. BDXpert Rule Review
141

142. AST Results
0.5
142

143. Special Messages
143

144. Phoenix ID Taxa ..Comparison
Phoenix Vitek Microscan 140
82
79
70
65 40 50 46
40
Enterobacteriaceae Non Enterobacteriaceae Gram Positives
144

145. TCBS AGAR
• Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar
(TCBS Agar) is used for the selective isolation
of cholera vibrios and Vibrio parahaemolyticus
from a variety of clinical and nonclinical
specimen.
145

146. STREPTOKOKUS
• Gram positif, non motile, katalase negatif
• Kelompok bakteri ini heterogen
• Kebanyakan fakultatif anaerob, tapi bisa
tumbuh secara fermentatif walaupun dengan
adanya oksigen.
• Karena kebutuhan nutrisinya yang kompleks,
Blood agar sering digunakan untuk
mendapatkan isolat.
Microbiology by Strohl, WA 2001 hal 145
146

147. McFarland standard
• Standar 0.5 McFarland dibuat dengan
cara mencampur 0.05 mL 1.175% barium
chloride dihydrate (BaCl2•2H2O) dengan
9.95 mL of 1% sulfuric acid (H2SO4).
• Pencampuran tersebut menghasilkan
barium sulfate precipitate  kekeruhan
pada larutan
• 0,5 McFarland =1,5 x 108 CFU/mL.
147

148. 0,25 McFarland
Jika menggunakan inokulum 0,25
McFarland, Sumuran A17 dihitamkan
Diambil dari http://www.bd.com/ds/technicalCenter/whitepapers/lr884.pdf
148

149. BARCODE
149

150. BARCODE
150

151. BARCODE
151

152. DAFTAR PUSTAKA
1. Instrumen Icon BD Phoenix User’s Training Manual
2. Panel Inoculation BD Phoenix User’s Training Manual
3. BD PhoenixTM System : Quick Reference Guide, USA
4. Laboratory Procedure BD Phoenix TM NMIC/ID Panels
5. Laboratory Procedure BD Phoenix TM NMIC/ID Panels
6. Laboratory Procedure BD Phoenix TM NMIC/ID Panels
152