1. Reacción en cadena de la polimeras
1. La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica de
diagnóstico molecular muy sensible, capaz de revelar tan sólo una copia
de ADN en una mezcla compleja del mismo.
2. La reacción en cadena de la polimerasa, ya más conocida como PCR,
es una técnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de
veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades
de ADN.
El producto que se obtiene al finalizar la reacción es una gran cantidad de un
fragmento génico con alto grado de pureza Por su alta sensibilidad, esta
técnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una célula
somática o un espermatozoide.
Entre las aplicaciones médicas de la PCR cabe destacar su aporte al desarrollo
de nuevas estrategias de diagnóstico. Permite detectar agentes infecciosos
como los virus de las hepatitis B y C o regiones del genoma del virus de la
inmunodeficiencia humana (HIV).
Aplicaciones:
Secuenciación de ADN fósiles
Identificación de especies y Control de cruzas entre animales
Diagnóstico prenatal/Diagnóstico pre implantación:
Detección de mutaciones
2. Esta técnica permite multiplicar pequeñas cantidades de ADN entre cientos de
miles y millones de veces. El tramo destinado a reproducirse puede tener
desde cincuenta hasta más de dos mil nucleótidos de longitud. El segmento de
ADN que sirve de molde para la realización del proceso.
Metodología
La muestra se calienta, en el primer paso, hasta lograr la separación de las dos
cadenas que constituyen el ADN "desnaturalización". En el segundo paso, la
temperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de cada una de dos
cadenas cortas de nucleótidos (oligonucleótidos) con cada una de las hebras
separadas del ADN molde. En tercer lugar, una enzima ADN polimerasa
extiende los primers, en el espacio comprendido entre ambos, sintetizando las
secuencias complementarias de las hebras del ADN molde.
Al cabo del primer ciclo de tres reacciones (desnaturalización, apareamiento,
extensión) el tramo de ADN elegido se ha duplicado y el doble de su cantidad
original se encuentra disponible para ser nuevamente replicado en un segundo
ciclo.
Desnaturalización ocurre en una temperatura de 95º consiste en la separación
de una cadena de ADN.
Apareamiento 60º es la unión de los primers específicos a las cadenas
complementarias En este caso, la temperatura y el tiempo van a depender de 3
factores relacionados con los oligonucleótidos: la composición de bases, el
tamaño y la concentración.
Extensión de 72º la polimerasa sintetice ADN hacia el extremo 5prima - 3prima
usando nucleótidos libres.
3. Para replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio, de la ADN
polimerasa de la bacteria Escherichia coli
Conceptos:
Qué es la E. coli y de dónde viene?
E. coli es un tipo de fecales coliformes que se encuentran comúnmente en los
intestinos de animales y seres humanos. E. coli es la abreviación de
Escherichia coli. La presencia de E. coli en el agua es un fuerte indicio de la
reciente contaminación por aguas residuales o desechos de animales. Las
aguas residuales pueden contener muchos tipos de organismos que causan
enfermedades.
¿Qué son los coliformes fecales?
Los coliformes fecales son bacterias que se asocian con desechos humanos o
animales. La presencia de coliformes fecales en el agua pueden no ser
directamente perjudiciales, y no indica necesariamente la presencia de las
heces, sin embargo, sí indica una mayor probabilidad de patógenos dañinos en
el agua.
Enfermedad: La infección a menudo causa diarrea severa con sangre
y calambres abdominales , a veces la infección causa diarrea sin sangre.
Oligonucleótidos
Un oligonucleótido es una molécula compleja formada a su vez por
varios nucleótidos, cada uno de los cuales está compuesto por una base
nitrogenada, un hidrato de carbono y un grupo fosfato.
Secuencia lineal de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster, habitualmente
no mayor de 50 nucleótidos.
4. Fosfodiéster
Es un tipo de enlace covalente que se produce entre un grupo hidroxilo (OH-)
en el carbono 3' y un grupo fosfato.
Thermus aquaticus, denominada también Thermophilus aquaticus, es
una bacteria termófila que vive en la proximidad de manantiales de agua
caliente descubierta por danés Christian Gram.
Es una bacteria gram-negativa, aerobia y heterótrofa, se denominan bacterias
Gram negativas a aquellas bacterias que NO se tiñen de azul oscuro
o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el
nombre de "Gram-negativas" o también "gran negativas".
Una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de
color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o
rojo o grosella.
