2. PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS
 FIJACIÓN
 DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO
 INCLUSIÓN
 CORTE
 TINCIÓN DE LOS CORTES
 MONTAJE
OBSERVACIÓN

3.  OBTENCIÓN DE MUESTRAS
Todas las muestras de tejido, ya sea
obtenidas de materiales quirúrgicos,
necropsias, biopsias deben ser procesadas
adecuadamente para obtener buenos
cortes histológicos.

4.  OBTENCIÓN DE MUESTRAS
Se debe obtener toda la
información
posible
material a procesar.
del

5.  OBTENCIÓN DE MUESTRAS
En caso de ser necesario se debe realizar
un examen y descripción preliminar de los
materiales
y
su
adecuación
correcto procesamiento.
para
un

6.  OBTENCIÓN DE MUESTRAS

7.  FIJACIÓN
Tratamiento del tejido con sustancias
químicas que no solo retardan las alteraciones
hísticas posteriores a la muerte, sino que
conservan la configuración normal del tejido.

8.  FIJACIÓN
Fijador:
Sustancia que detiene en forma rápida los
procesos de autólisis y que, al mismo tiempo,
conserva los tejidos, en lo posible, en el estado
en que se encontraban en la vida.

9.  FIJACIÓN
TIPOS DE FIJADORES
Físicos:
 Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.
 Calor seco: Bacteriología.
 Calor húmedo: Microquímica, Zoología.
 Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los
procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja
de actuar los mismos se reanudan.

10.  FIJACIÓN
TIPOS DE FIJADORES
Químicos:
 Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .
 Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
 Alcoholes (precipitan proteínas).
 Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
 Picratos (precipitan proteínas).

11.  FIJACIÓN
TIPOS DE FIJADORES
Químicos:
 Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más
utilizados. Los tejidos son fijados por uniones
cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los
grupos amino.
La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza
normalmente al 10%, en una solución bufferada.

12.  FIJACIÓN

13.  FIJACIÓN
No debe olvidarse que:
Un defecto de fijación no
puede ser subsanado.
Es inútil hacer un estudio
histológico de un material
mal fijado.

14.  DESHIDRATACIÓN
Se obtiene por medio de un reactivo anhidro
pero ávido de agua:
Alcohol Etílico.
Alcohol Isopropílico.
Alcohol Butílico.
Acetona

15.  ACLARADO
Se debe embeber la pieza con una sustancia
miscible con el alcohol y la parafina:
Xileno.
Tolueno.
Benceno.

16.  INCLUSIÓN
La parafina penetra en los vasos, en los espacios
intercelulares y también en el interior de las células
embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención
de cortes con el micrótomo.

17. Procesador Automático

18. Procesador Automático

19. CONFECCIÓN DEL TACO
Obtención del bloque de parafina de forma
regular, para ser cortado con el micrótomo.

20.  CONFECCIÓN
DEL TACO

21.  CORTE
Micrótomo Rotativo.
Micrótomo de Deslizamiento.
Micrótomo de Congelación.
Crióstato.

22. Micrótomo Rotativo.

23. Micrótomo Rotativo.

24. Micrótomo Rotativo.

25. Crióstato

26. Crióstato

27.  EXTENSIÓN
 Utilizar portaobjetos limpios y
preparados con el adhesivo
adecuado.
 Se realiza en agua tibia (38oC).
 Precaución: el preparado debe
quedar bien extendido y sin
pliegues.
 Rotular.

28.  EXTENSIÓN
 Luego de escurrir el exceso de
agua llevar a estufa (60 °C) no
más de dos horas.

29.  TINCIÓN DE LOS CORTES
Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:
 Colorantes que diferencian los componentes
básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y
eosina).
 Colorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelular.
 Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y
forman depósitos de metales en ellos.

30. Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:
HEMATOXILINA
Actúa como un colorante
BÁSICO que se asocia y tiñe
componentes ÁCIDOS de la
célula como estructuras
aniónicas
(que posean fosfatos, sulfatos
y/o carboxilos ionizados)
- Heterocromatina y nucléolos
- ARN ribosomal,
- Matriz extracelular (por los
sulfatos de los GAGs).
Color: azul o violeta
EOSINA
Colorante ÁCIDO
(predomina densidad de
carga negativa), que se
asocia y colorea estructuras
catiónicas (componentes
BASICOS) del citoplasma y
matriz extracelular
- Filamentos citoplasmáticos.
- Componentes membranosos
intracelulares.
- Fibras extracelulares (por sus
aminoácidos básicos ionizados).
Color: rosado

31.  TINCIÓN DE LOS CORTES
La reacción de los grupos aniónicos con un
colorante básico se denomina BASOFILIA
(que tiene afinidad por lo básico)
La reacción de los grupos catiónicos con un
colorante ácido se denomina EOSINOFILIA
(que tiene afinidad por lo ácido)

32. OBSERVACIÓN
Coloración con
Hematoxilina
Coloración con
Eosina
Coloración
Hematoxilina-Eosina

33. Basófilo
(azul)
Acidófilo
(rosado)