Mitochondria, ROS, cell culture, anoxia

1. МИТОХОНДРИИ
И ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ
СТРЕСС
Древицкая Татьяна
к.б.н., cт.н.с., Институт физиологии им. А.А.Богомольца, Киев,
Украина

3. Митохондрии в клетке и их функция

4. Функции митохондрий
 Синтез АТФ – «энергетический центр»
клетки (95% синтезируется в мт)
 Участие в метаболизме аминокислот,
липидов, холестерола, стероидов,
нуклеотидов
 Инициация процессов апоптоза
(программируемой клеточной смерти)
 Регуляция экспрессии ядерного генома
 Участие в собственном воспроизведении

5. Свободный радикал -
частица (атом или молекула), имеющая на внешней
оболочке один или несколько неспаренных
электронов.
Радикал может образоваться в результате потери одного электрона
нерадикальной молекулой:
X e− + X+→
или при получении одного электрона нерадикальной молекулой:
Y + e− Y−→

6. Окислительное
фосфорилирование в
митохондриях - главный
источник энергии и свободных
радикалов.
В норме свободные радикалы
необходимы для:
- выполнения сигнальной
функции
- индукции иммунной системы
- мобилизации систем ионного
транспорта
- апоптоза
В норме свободные радикалы в клетке нейтрализуются
собственными антиоксидантными системами, и только когда
возникает или гиперпродукция свободных радикалов,
илинедостаточны силы антиоксидантной защиты – возникают
повреждения ДНК, органелл и мембран клетки

7. Для экспериментов используется первичная
культура, полученная из желудочков 2-х
дневных крыс линии Wistar дня.
КУЛЬТУРА НЕОНАТАЛЬНЫХ
КАРДИОМИОЦИТОВ – модель для
изучения функций митохондрий

8. Использование такой модели
позволяет оценить влияние
различных веществ и факторов на:
- клеточную смерть
- работу генов
- функцию митохондрий
- активность систем свободнорадикальной защиты
- уровень свободных радикалов в клетке

9. Методы и подходы
- выделение и культивирование
неонатальных кардиомиоцитов;
- флуорисцентная микроскопия;
- моделирование аноксии/реоксигенации;
- определение экспрессии генов;
- трансфекция клеток и введение
интерферирующих РНК

10. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:
- флуоресцентная микроскопия;
- выделение ДНК, РНК, хроматина, белков,
митохондрий;
- полимеразно-цепная реакция в режиме реального
времени;
- определение уровня свободных радикалов;
- определение митохондриального потенциала;

11. REAL-TIME PCR

12. Флуоресцентная микроскопия

13. .
КРЫС
Флюоресцентная микроскопия для определения
уровня свободных радикалов
Окраска с помощью DСF
a – контроль
б – моделирование окислительного
стресса при аноксии/реоксигенации

14. .
MitoTracker Red CMXRos – окрашивает
митохондрии с высоким митохондриальным
потенциалом
1. контрольные кардиомиоциты
2-3. использование активаторов митохондриального
дыхания

15. Что может нам сделать наш организм более
подготовленным к таким неблагоприятным
воздействиям, нехватка кислорода или
окислительный стресс?
-отказ от вредных привычек
-здоровое и сбалансированное питание
-употребление преимущественно растительной
пищи, которая содержит витамины и
антиоксиданты
-физическая и умственная нагрузка
- активный отдых, в том числе в горах
- хорошее настроение и приятные эмоции

16. !
Спасибо за внимание!
Спасибо за внимание