VIP Listeria Tomado de: Fuente: Biocontrol, http://www.biocontrolsys.com/products/1-2test.html, Consultado en línea: 22/02/2012

1. PRÁCTICA 13: VIP PARA Listeria (Método AOAC Oficial 997.03)
DESCRIPCION GENERAL.
VIP para Listeria es un ensayo de un simple paso con efecto visual que sirve para detectar Listeria
monocytogenes y otras especies de Listeria. Esta técnica del VIP test se la puede realizar en forma
individual o para grupos de varias muestras. La técnica se basa en el desarrollo de un complejo
cromógeno antígeno-anticuerpo en el caso de estar presente la Listeria en la muestra examinada,
lo cual asegura un alto nivel de sensibilidad y especificidad para Listeria.
DIRECCIONES PARA EL USO.
A. Enriquecimiento y preparación de la muestra.
a) Someter las muestras a enriquecimiento, antes de inocular en las unidades de
detección del VIP test. En forma aséptica pesar 25 g de la muestra o pipetear 25 ml y
colocar en 225 ml del caldo modificado de Fraser con cloruro de Litio (mFB+LiCl). Ver
apéndice a) para preparación del medio. Mezclar bien en incubar 28±2 horas a 30ºC.
b) Transferir 1 ml del caldo de cloruro de Litio a 9 ml de BLEB (buffered Listeria
enrichment broth). Ver apéndice b) para la preparación del medio e incubar 24±2
horas a 30ºC.
c) A continuación transferir 1 ml del BLEB incubado a un tubo limpio y calentar a 100ºC
para inactivar durante 5 minutos. Dejar enfriar hasta 25-37ºC antes de colocar en la
placa de detección de Listeria. En este paso se pueden refrigerar los tubos a 2-8ºC
luego de haber sido sometidos a inactivación de 100 grados y guardarlos hasta 4 días
para ser examinados posteriormente.
NOTA: Guardar los tubos originales de BLEB en refrigeración a 2-8ºC. Utilizarlos para la
confirmación de los presuntos positivos (ver sección D).
B. Análisis de la muestra.
a) Abrir la funda sellada y sacar el número adecuado de unidades para detección de
Listeria. Usar 1 unidad por cada muestra. Las unidades que no se utilicen volver a
colocarlas en la funda, sellar y colocar un desecante.
b) Mezclar los tubos con BLEB enfriados, dejar en reposo para que se asienten posibles
partículas del alimento. Transferir 0,1 ml a la unidad de detección de Listeria.
c) Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
C. Lectura de resultados.
a) Comprobar que no exista una línea distinta en la ventana de verificación del test.
Dicha línea debe ser de color oscuro que contrasta con el color blanco del fondo y
debe extenderse a través de la ventana. La ausencia de esta línea de control invalida a
la unidad de detección.
b) Observar la ventana de la muestra. Si no se desarrolla ninguna línea la prueba es
negativa. El desarrollo de una línea tenue en color indica un presunto positivo de la
muestra.
NOTA: Examinar la prueba en un lapso de 10 min. Luego de haber transcurrido este tiempo se
pueden desarrollar líneas tenues de color no específico las cuales deben ser descartadas. La
diferencia en intensidad de colores de las líneas de la prueba y de la ventana de control son
aceptables siempre y cuando esté presente la línea control.

2. c) Se deben correr controles positivos y negativos para familiarizarse con la
interpretación de los resultados.
D. CONFIRMACION.
Las muestras presuntivas positivas deben ser confirmadas con siembra en agares
específicos para Listeria como se describe en las técnicas y métodos de BAM/AOAC o de
la USDA. Luego confirmar con las respectivas pruebas bioquímicas.
E. ALMACENAMIENTO.
Sellar muy bien las unidades que no han sido utilizadas dentro de una funda y con un
desecante para evitar humedad. La línea indicadora de humedad del desecante debe ser
de color azul. Mantener a temperatura ambiente (15-25ºC), no se debe refrigerar.
APENDICES:
a) Caldo modificado de Fraser con cloruro de Litio (mFB+LiCl).
Suspender 55 g del caldo comercial de Fraser en 1 litro de agua desionizada. Agitar
mientras se disuelve completamente. Adicionar 4 g de cloruro de Litio y continuar con
la agitación hasta disolver. Llevar a autoclave a 121ºC durante 15 min. No someter a
mayor temperatura. No adicionar citrato férrico de amonio al caldo. No utilizar el
caldo si se forma un precipitado. En caso suceda la formación de dicho precipitado,
descartar el caldo y preparar como se indica a continuación:
Preparar una solución de LiCl al 45 % disolviendo 45g de LiCl en agua desionizada hasta
completar un volumen de 100 ml. Luego utilizar filtro de 0,2 micras. Adicionar 2 ml de
LiCl estéril a una solución de 225 ml de mFB estéril también. Si se utiliza una solución
comercial de LiCl 8M, colocar 2.65 ml en 225 ml de mFB estéril.
b) BLEB (Buffered Listeria Enrichment Broth).
Suspender 36.1 g de caldo de enriquecimiento de Listeria en 1 litro de agua
desionizada. Adicionar 8.5 g de ácido libre de MOPS y 13.7 g sal de MOPS. Mezclar
bien. Llevar a autoclave.
Fuente:
Biocontrol, http://www.biocontrolsys.com/products/1-2test.html, Consultado en línea:
22/02/2012