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MET: Partes                                                                  Microscopio electrónico de barrido
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capturada en una pantalla fosforescente , ubicada en la parte inferior        En el microscopio electrónico de barrido la
de la columna.
                                                                              muestra es recubierta con una capa de metal
                                                                              delgado, y es barrida con electrones
   Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el         enviados desde un cañón. Un detector mide
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   electrónico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las
                                                                              siendo capaz de mostrar figuras en tres
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                                                                                                poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor
                                                                                                que la del medio que las rodea.
                                                                                                Tipo:
                                                                                                 –   centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 g)
                                                                                                 –   super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000
                                                                                                     g a 20000 g)
                                                                                                 –   ultracentrífugas (de 15000 g a 600000 g).
                                                                                                En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la
                                                                                                cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido
                                                                                                a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más
                                                                                                de 100000 rpm), hace que sea necesario hacer un intenso
                                                                                                vacío en la cámara de la centrífuga para evitar el
                                                                                                calentamiento de rotor y muestra.




Centrifugación: coeficientes de                                                                Separación por sedimentación en
sedimentación                                                     Centrifugación diferencial   gradiente de sacarosa

 El coeficiente de sedimentación de una partícula o
 macromolécula se calcula dividiendo su velocidad constante de
 sedimentación (en m/s) por la aceleración aplicada (en m/s2).
 El resultado tiene dimensiones de tiempo y se expresa
 habitualmente en svedbergs (S).
 Los valores de coeficientes de sedimentación no son aditivos,
 debido a que dependen tanto de la masa, como de la forma
 que tenga la molécula. Una partícula formada por la unión de
 dos partículas 5 S no tiene un coeficiente de sedimentación de
 10 S. Por ejemplo, los ribosomas eucarióticos están formados
 por dos subunidades, una 60 S y otra 40 S. Sin embargo, el
 valor final del conjunto del ribosoma no es 100 S, sino 80.

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  • 1. MET: Partes Microscopio electrónico de barrido La MET no explora superficies: el haz de electrones incidente atraviesa la muestra y genera una sombra de la ultraestructura que es capturada en una pantalla fosforescente , ubicada en la parte inferior En el microscopio electrónico de barrido la de la columna. muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el enviados desde un cañón. Un detector mide espécimen, creando una imagen aumentada. Lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz la cantidad de electrones enviados que de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no funcionan con los electrones. arroja la intensidad de la zona de muestra, Sistema de vacío es una parte muy importante del microscopio electrónico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las siendo capaz de mostrar figuras en tres moléculas del aire, se debe hacer un vacío casi total en el interior de dimensiones, proyectados en una imagen de un microscopio de estas características. Placa fotográfica o pantalla fluorescente que se coloca detrás del TV. objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada. Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una computadora.
  • 3. Electroforesis Centrifugación Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras a intensas fuerzas que producen la sedimentación en poco tiempo de las partículas que tienen una densidad mayor que la del medio que las rodea. Tipo: – centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 g) – super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de 2000 g a 20000 g) – ultracentrífugas (de 15000 g a 600000 g). En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción. En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000 rpm), hace que sea necesario hacer un intenso vacío en la cámara de la centrífuga para evitar el calentamiento de rotor y muestra. Centrifugación: coeficientes de Separación por sedimentación en sedimentación Centrifugación diferencial gradiente de sacarosa El coeficiente de sedimentación de una partícula o macromolécula se calcula dividiendo su velocidad constante de sedimentación (en m/s) por la aceleración aplicada (en m/s2). El resultado tiene dimensiones de tiempo y se expresa habitualmente en svedbergs (S). Los valores de coeficientes de sedimentación no son aditivos, debido a que dependen tanto de la masa, como de la forma que tenga la molécula. Una partícula formada por la unión de dos partículas 5 S no tiene un coeficiente de sedimentación de 10 S. Por ejemplo, los ribosomas eucarióticos están formados por dos subunidades, una 60 S y otra 40 S. Sin embargo, el valor final del conjunto del ribosoma no es 100 S, sino 80.