experiencias de laboratorio

2. Manual de
Prácticas de laboratorio
Biología
TECNOLOGIA MÉDICA
I SEMESTRE_ GRUPO 3
M. Cs. Jacqueline M. Vargas
2016

3. Presentación
El presente manual consta de dos partes, el programa de la parte teórica y las prácticas de
laboratorio, ambas en este curso interactúan reforzándose mutuamente.
En la parte del programa teórico se plantea el temario general, los subtemas que deben
incluirse, así como el tiempo y el nivel al que deberán exponerse los tópicos que lo
integran. También, se plantean las lecturas básicas, consideradas necesarias para
complementar el curso, además de una lista de lecturas adicionales opcionales, si se
requiere profundizar en algún tema específico.
En la segunda parte del manual se exponen detalladamente cada una de las prácticas a
realizar, éstas aunque son sencillas, son representativas y están de acuerdo con el tiempo y
recursos de la ULAP.
El curso de biología celular y molecular, busca bridarles a los alumnos los fundamentos
básicos para comprender y estudiar a la unidad básica de la vida, a la célula, desde el punto
de vista funcional y estructural, así como su interacción con su ambiente. Por otro lado, el
curso involucra el desarrollo de habilidades prácticas para el estudio microscópico y
bioquímico de algunos componentes celulares, como por ejemplo el ADN.
Busca además, que el alumno integre los elementos básicos para su incorporación en los
cursos avanzados de su formación profesional, así como en optativas vinculada al área de
biología celular y molecular, ya que el conocimiento a nivel celular resulta indispensable
para comprender la estructura elemental de todos los individuos.
Los conocimientos y habilidades adquiridos le brindaran las herramientas para realizar
investigación científica, así como para poder preparar informes técnicos en el área, con
responsabilidad y ética profesional.

4. Programa teórico
OBJETIVOS GENERALES:
1. Desarrollarunavisióngeneral yespecialde lacélula,su
estructura,suciclo celularasí comosu división(mitosis).
2. Integrarconocimientossobre losprincipiosyconceptosbásicos
de la biologíacelularylostejidos.
OBJETIVOSESPECÍFICOS:
1. Identificaryreconocerlaestructuracelular,estableciendosu
diferenciación.
2. Identificarlosmecanismosde transporte de energíaintracelular
y como interaccionanconel medioambiente.
3. Reconocerlasfasesde la divisióncelularylos mecanismosde
transmisióngenética.
CONTENIDO:
I. La Célula,Unidadde Vida
A. La Teoría Celular
B. ComposiciónQuímicaasociadaala Célula.
B.1 MoléculasOrgánicas
B.1.1 Carbono,hidrógeno,oxígeno,nitrógeno
C. CélulasProcariotasyEucariotas
C.1 Autótrofos
C.2 Heterótrofos
D. OrganizaciónCelular
D.1 Tamaño y forma
D.2 Estructuras Sub-celulares
D.2.1 Ubicacióny funciones
E. Intercambioentre CélulayMedioAmbiente
E.1 Funciónde la MembranaCelular
E.1.1 Agua-solutos
F. Transporte a travésde laMembrana Celular
F.1 La Bombade Sodio-Potasio
F.2 Transporte ActivoyPasivo
II. La Energíay Materia Viviente

5. A. Flujode Energía
A.1 Oxidación-reducción
A.2 Metabolismo
A.3 Enzimas
A.4 ATP
B. ProducciónIntracelularde ATP
B.1 La Glucosa
B.2 Glucólisisyvíasanaerobicas
B.3 Respiraciónyrendimientoenergético.
B.4 Otra vía catabólica-biosíntesis
III. Genética
A. Antecedentesde laGenética
A.1 Legadode Mendel
B. MeiosisyReproducciónSexual
B.1 NúmeroHaploide
B.2 NúmeroDiploide
B.3 MeiosisyCicloVital
C. Mitosisy Meiosis
D. Genesy Cromosomas
D.1 Conceptosde Gen
D.2 Cromosomas
D.2.1 Mapas Cromosómicos
E. Química de la Herencia
E.1 ANDy ARN,Modelode Watson-Crick
E.2 DNA,Menejode laInformaciónGenética
F. CódigoGenéticoysutraducción
F.1 Genesy Proteínas
F.1.1 Síntesisde proteínas
F.2 ARAN y susfunciones
F.2.1 Tipos
G. GenéticaHumana
G.1 CariotipoHumano
G.2 AnormalidadesCromosomicas
G.3 Herencialigadaal sexo
G.4 Errores innatosdel Metabolismo
G.5 ImportanciaMédicade Técnicasde DNA combinante.

6. Modalidades del proceso de enseñanza aprendizaje
Presentación del profesor de los temas del curso y participación del alumno con
cuestionarios, lectura de artículos y seminarios.
Evaluación
LABORATORIO: 20%
EXÁMENES PARCIALES 30%
SEMESTRAL 35%
CHARLAS 15%_
100%
El alumno que no apruebe alguna de las dos evaluaciones (teórica o laboratorio)
no podrá acreditar el curso.
Reglas del Laboratorio
1. Es indispensable el uso de la bata.
2. No se debe fumar ni ingerir alimentos durante las sesiones.
3. Los equipos de trabajo estarán formados por 4 o 5 alumnos como máximo.
4. El profesor escogerá al azar a un alumno para que exponga la práctica correspondiente a
esa sesión y posteriormente será discutida por todo el grupo.
5. El tiempo límite de tolerancia para entrar al laboratorio será de 10 minutos.
6. El reporte deberá incluir:
- Introducción
-Objetivo
- Material y Método
- Resultados
- Discusión (análisis de resultados)
- Conclusiones
- Bibliografía
7. Para acreditar el Laboratorio se requerirá el 80% de reportes y asistencias, así como
obtener una calificación mínima de 71. (Promedio de reportes y examen final).

12. SEGUNDA PARTE
USO DEL MICROSCOPIO
Microscopía óptica
Se usa para aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos, lo cual permite
observar los detalles estructurales de los microorganismos. Con la microscopía óptica se
pueden lograr aumentos de 100 a 1,000 diámetros y, en algunos casos, hasta 2,000, según el
tipo de luz que se utilice y la forma de iluminar el objeto en estudio o preparación.
Los microscopios ópticos pueden ser de varios tipos, siendo el microscopio óptico de
campo claro, el más utilizado en microbiología. En la microscopía de campo claro, el
campo microscópico está brillantemente iluminado y los objetos en estudio aparecen más
oscuros en el fondo.
El microscopio óptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos
celulares es un microscopio compuesto, el cual está provisto de una fuente luminosa, una
lente condensadora de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que
ayudan a la amplificación de la imagen.
A través de la refracción o reflexión de los rayos luminosos mediante el sistema de lentes
del microscopio, se forma la imagen del objeto, que es más grande que el objeto mismo,
permitiendo el examen de sus estructuras en detalle.
Existen varios aditamentos que utilizados en el microscopio óptico ordinario, aumentan
mucho su rendimiento como instrumento de observación, por ejemplo microscopio en
campo oscuro (ultramicroscopio), microscopio de contraste de fases, microscopio de
fluorescencia, microscopio de luz ultravioleta, microscopio de interferencia, microscopio de
contraste de interferencia diferencial de nomarski.
Amplificación
La capacidad amplificadora de un microscopio compuesto es el producto del aumento
individual de los oculares y los lentes objetivos. Un microscopio típico que se usa en
bacteriología tiene objetivos con poder de resolución de 10X, 40X Y
100X y ocular de 10X, por lo cual es capaz de amplificar la imagen de la muestra
100, 400 Y1000 veces.
En un aumento de 1000X, las bacterias y microorganismos grandes se pueden visualizar
muy bien, pero los virus y muchos de los detalles finos de las estructuras bacterianas no se
pueden ver.
Poder de resolución
La resolución se define como el espacio de máxima aproxirnación entre dos puntos en el
que aún se pueden observar claramente como dos entidades independientes, es decir, es la

13. distancia entre dos entidades estructurales de un objeto en la cual todavía se pueden
observar como estructuras separadas en la imagen amplificada.
El poder de resolución de un microscopio está sujeto a la longitud de onda de la luz y a la
propiedad de las lentes conocidas como la apertura numérica (AN). El límite del poder de
resolución de un microscopio es aproximadamente igual a 0.61/AN, que para un
microscopio óptico es de alrededor de 200 nm (nanómetros). A menor longitud de onda de
la luz y AN de las lentes, será mejor el poder de resolución del microscopio. Por lo tanto,
queda claro que el poder de resolución de los microscopios ópticos se encuentra restringido
por AN que se obtenga de los sistemas de lentes y las longitudes de onda del espectro de
luz visible.
Apertura numérica
Esta expresión, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que entra en un objetivo
desde un punto del campo del microscopio. Tal valor es de suma n importancia, ya que,
como se dijo anteriormente, de él depende el poder de resolución, la propiedad más
importante de un objetivo.
La AN de una lente depende del índice de refracción (N) del medio que llena el espacio
entre el objeto y la parte frontal del objetivo, y del ángulo (¡.¡) de los rayos de luz más
oblicuos que puedan entrar al objetivo. La fórmula para calcular la AN es:
El aire tiene un índice de refracción de 1.0, que limita la resolución que se puede obtener,
pero se puede incrementar la AN poniendo aceite de inmersión entre el espécimen y el
objetivo, aumentando así el poder de resolución del microscopio. El aceite de inmersión
tiene un índice de refracción de 1.5, lo que aumenta considerablemente la AN y esto mejora
el poder de resolución del microscopio.

16. Tercera parte: Tinción simple.
1. Raspar suavemente conunpalillolimpiolacara internade lamejilla.
2. En un portaobjetocoloque unasdosotres gotas de agua y enjuague el palillo,homogenizandoy
extendiendolasgotassobre el porta.
3. Caliente sinque llegue aquemarel dorsode lamano con el portaobjetos.
4. Agregarunas gotas de azul de metileno,dejandoactuarel colorante 2o 3 minutos.
5. Elimine el colorante sobrante ylavandoconaguahasta que no suelte color.
6. Utilizarun cubreobjetoscolocándolosuavemente.
Cuarta parte: Microscopía. Morfología celular.