3. Nærbillede, der viser gangrænøs mastitis. Den ene kirtel
varm og øm ved berøring. Huden blåligt misfarvet. Sekretet
er blodtilblandet, rødgulligt og klumpet
4. Diagnose
Mastitis (yverbetændelse)
Den kraftige almenpåvirkning tyder på endotoxæmi, som er
en virkning af Gramnegative bakteriers lipopolysaccharid i
cellevæggen.
Der udtages mælkeprøve til bakteriologisk undersøgelse
19. Mange faktorer påvirker hæmningszonens størrelse ved diffusionsmetoden:
Tætheden af inokulum
Lagtykkelsen
Sammensætningen af mediet
pH
Bakteriens vækstrate
Derfor er standardisering nødvendig. Vi benytter:
Konfluerende vækst (ad modum Kirby Bauer)
Müller Hinton agar
pH 7.2
Oxoid resistensbestemmelsesdisks
20. Til hvert hold findes stativ med:
Rør med 5 ml steril 0.9% NaCl (isotonisk saltvand)
Sterilt rør med steril engangspodenål
Steril vatsvaber i papirpakke
Blodagarkultur med bakteriestamme til undersøgelse
En steril Müller Hinton agar plade
En lineal til måling af hæmningsdiameter
Til fælles brug:
En Oxoid dispenser med disks med følgende antibiotika: tetracyclin,
sulfamethoxazol plus trimethoprim, gentamicin, enrofloxacin, penicillin G.
21. Procedure
Med podenål overføres 2 kolonier til 5 ml isotonisk saltvand
Sæt podenålen tilbage i sit glasrør, som fra nu er ”affaldsbeholder”
Vatsvaber dyppes i væsken. Overskud trykkes af mod glasvæggen
Med svaberen spredes på Mueller Hinton agar
Svaberen sættes tilbage i glasrøret (”affaldsbeholderen”)
Oxoid antibiotikumdisks pålægges med dispenser
22. Deponering af antibiotikumtabletter
Ved hjælp af Oxoid dispenser anbringess diskss mediets overflade
De antibiotika som bruges er:
TE30: Tetracyklin
SXT25: Sulfamethoxazol+trimethoprim (TMP)
CN10: Gentamicin
ENR5: Enrofloxacin
P10: Penicillin G
Pladen sættes i varmeskab ved 37°C i 24 timer.
(Efterfølgende udleverer vi plader, der har været inkuberet 24 timer)
23. Måling af hæmningszone og beregning
Der udleveres plader, der har været inkuberet 24 timer ved
37°C. Diameteren i millimeter af hæmningszonerne måles
med lineal.
I skema side 2 aflæses, om bakterien er sensitiv,
intermediært sensitiv eller resistent for de aktuelle
antibiotika.
24. Måling af hæmningsdiameter (mm) med lineal
36 mm diameter
35 mm diameter
Ingen inhibering
14 mm diameter
25. Definitioner
Sensitiv betyder at serumkoncentrationen, der opnås ved
universel behandling med normal terapeutisk dosis er >=
MIC værdien (mindste inhibitive koncentration).
Intermediært sensitiv betyder at serumkoncentrationen, der
opnås ved universel behandling med forøget terapeutisk
dosis inden for acceptable farmakologiske grænser er >=
MIC værdien
Resistent betyder at serumkoncentrationen, der opnås ved
universel behandling med forøget terapeutisk dosis inden for
acceptable farmakologiske grænser er < MIC værdien.
26. Definitions
Susceptible means that the serum concentration achieved
by universal treatment with a normal therapeutic dosage is
>= the MIC value (minimal inhibitive concentration).
Intermediate means that the serum concentration achieved
by universal treatment with an increased therapeutic dosage
within acceptable phamacological limits is >= the MIC value
Resistent means that the serum concentration achieved by
universal treatment with an increased therapeutic dosage
within acceptable phamacological limits is < the MIC value
27. Resultatskema, som udfyldes:
Hæmnings- Sensitiv
zone (mm Intermediær
diameter) Resistent
-------------------------------------------------------------------------
Tetracyklin TE30
Sulfa-TMP SXT
Gentamicin CN10
Enrofloxacin ENR5
Penicillin G P10
28. Resultatskema, som udfyldes:
Hæmnings- Sensitiv
zone (mm Intermediær
diameter) Resistent
-------------------------------------------------------------------------
Tetracyklin TE30 13 R
Sulfa-TMP SXT 0 R
Gentamicin CN10 19 S
Enrofloxacin ENR5 18 I
Penicillin G P10 0 R
29. Beregning af MIC værdi
En tilnærmet MIC værdi kan beregnes ved interpolation på en
graf, som viser sammenhæng mellem hæmnings-diameter og
MIC værdi
30.
31.
32. The end
• Hvis I vil vide mere om bakteriologi:
• www.microbiologyatlas.kvl.dk
– Online fotoalbum
– Bakterie- og svampemorfologi
– Biokemiske reaktioner
– Isolationsmedier
34. Udsnit af tabel på side 2 i øvelsesvejledningen
Fortolkning af zonediameter under standardbetingelser med konfluerende
inokulum i henhold til NCCLS metode (Kirby Bauer), med inokulum =
McFarland 0.5, Mueller-Hinton agar og Rosco NeoSensitabs
Kode Antibiotikum
mm
-------- ---- --------------------------
ENR 30 Enrofloxacin
S10 12 Streptomycin
SXT 0 Sulfonamid + TMP
TE30 22 Tetracyclin
35. Beregning af MIC værdi
En tilnærmet MIC værdi beregnes ved interpolation på en
graf, som viser sammenhæng mellem hæmnings-diameter og
MIC værdi (side 3 og 4 i øvelsesvejledningen)
36.
37.
38. Forventet resultatskema
Hæmnings S=sensitiv MIC
zone I=intermediær værdi
(mm R=resistent (µg/ml)
diameter)
--------------------------------------------------------------------------
Tetracyklin 0 Resistent over 200
--------------------------------------------------------------------------
Sulfonamid 0 Resistent over 4000
--------------------------------------------------------------------------
Streptomycin 14 Resistent 200
--------------------------------------------------------------------------
Ciprofloxacin 28 Sensitiv 0.1
--------------------------------------------------------------------------
39. Journal C 20014 Klebsiella pneumoniae. Resistensbestemmelse, der
viser multiresistens
40. Hæmningsdiametre for Klebsiella isolat, journal C20014
Ampicillin 0 mm Resistent
Cefalothin 27 mmSensitiv
Enrofloxacin 34 mmSensitiv
Penicillin 0 mm Resistent
Spiramycin 18 mmResistent
Streptomycin 20 mmResistent
Sulfonamid 0 mm Resistent
Tetracyclin 0 mm Resistent
TMP-sulfonamid 0 mm Resistent
41. The end
• Hvis I vil vide mere om bakteriologi:
• www.microbiologyatlas.kvl.dk
– Online fotoalbum
– Bakterie- og svampemorfologi
– Biokemiske reaktioner
– Isolationsmedier
42. Procedure
Fremstilling af konfluerende inokulum fra kolonier på
agarmedium
Med podenål overføres 3 (2-5) kolonier til 5 ml 0.9% NaCl
(isotonisk saltvand) og opslemmes heri. Podenålen
deponeres i affaldsbeholder.
Graden af uklarhed (turbiditeten) indstilles således at den
svarer til McFarland standard 0.5. Dette sker ved passende
fortynding med steril 0.9% NaCl (isotonisk saltvand), hvis
uklarheden overstiger McFarland 0.5.
Uklarhed svarende til McFarland 0.5 svarer til et kimtal på
ca.1-2×108 CFU (colony forming units) pr. ml.
44. Procedure
Fremstilling af konfluerende inokulum fra kolonier på
agarmedium
Podenålen står i et sterilt rør
Med podenål overføres ca. 3 kolonier til 5 ml 0.9% NaCl
(isotonisk saltvand) og opslemmes heri.
Podenålen sættes tilbage i røret (affaldsbeholder).
Graden af uklarhed (turbiditeten) indstilles således at den svarer til McFarland
standard 0.5. Dette sker ved passende fortynding med steril 0.9% NaCl (isotonisk
saltvand), hvis uklarheden overstiger McFarland 0.5.
Uklarhed svarende til McFarland 0.5 svarer til et kimtal på ca.1-2×108 CFU
(colony forming units) pr. ml.
45. Podning af Mueller Hinton agar plade
En steril vatsvaber dyppes i inokulum. Overskud af væske i
vatsvaberen fjernes ved at trykke den mod indersiden af
glasset.
En Mueller Hinton agar plade podes ved zig-zag spredning
på hele pladens overflade. Pladen drejes 90 grader og
spredningen gentages på tværs af den foregående retning.
Svaberen sættes tilbage i glasrøret (affaldsbeholder).
46. * Kulturen inkuberes ved 37°C i 24 timer
* Den inkuberede kultur undersøges
* Hæmningsdiameter måles i mm
* Aflæs om sensitiv eller resistent på side 2
* Beregn MIC værdi ved interpolation på
side 3 og 4
