El documento presenta una introducción al antibiograma, describiendo que es una herramienta clínica que determina la respuesta de microorganismos a antimicrobianos in vitro. Explica conceptos claves como el antibiograma, concentración inhibitoria mínima y categorías clínicas. Luego describe métodos convencionales como el de difusión y automatizados, así como conceptos de interpretación y lectura interpretada del antibiograma.

1. INTERPRETACION DEL
ANTIBIOGRAMA
VICTOR HUGO SEGURA LOPEZ
MR PATOLOGIA CLINICA
ENERO 2017

2. INTRODUCCION
• Herramienta de la actividad clínica diaria
• Determina in vitro la respuesta a uno o var
ios antimicrobianos
• Primer escalón en el reconocimiento de los
mecanismos de resistencia
Se basa en datos
Microbiológicos
Farmacodinamicos

3. CONCEPTOS CLAVES
1. Antibiograma: Técnica in vitro en la cual bajo d
eterminadas condiciones estandarizadas, un micr
oorganismo es expuesto a un antimicrobiano, an
otándose el efecto observado tras un periodo d
e incubación. HERRAMIENTA*
2. Concentración Inhibitoria Mínima (MIC): Conc
entración de un antimicrobiano a la cual se inhi
be el crecimiento de una UFC(Unidad Formador
a de Colonia)de un microorganismo. PUNTOS D
E CORTE (Categorías de tratamiento)*

4. CONCEPTOS CLAVES
• Categorías Clínicas
1. Sensible o Susceptible (S): El microorganismo es
inhibido cuando se utilizan las concentraciones
del antibiótico recomendado de acuerdo al sitio
de infección.
2. Intermedio(I): La respuesta puede ser menos pre
decible que en aislamientos susceptibles. Esta ca
tegoría podría ser eficaz en sitios donde se alca
ncen concentraciones altas del antibiótico.
3. Resistente(R): Aislamiento que no son inhibidos
por las concentraciones del antibiótico que se al
canzan habitualmente en el organismo

7. OBJETIVOS

9. CIM Y CBM
S/C S/C
S/C S/C S/C S/C
AB AB AB AB AB CONTROL
SIN AB
C/C C/C
C/C C/C C/C
C/C

10. MÉTODOS - ANTIBIOGRAMA

11. Métodos Antibiograma
– Difusión: Habitualmente cualitativos. Atendiendo al halo de inhibición qu
e aparece alrededor del disco, se clasifican los microorganismos como se
nsibles (S), intermedios (I) o resistentes (R) según sea la eficacia obtenida
por el agente amtimicrobiano frente al microorganismo.
– Sistema Epsilon-Test: Método de antibiograma por difusión que en lugar
de discos utiliza tiras de papel graduadas con valores de CMI e impregn
adas con un antibiótico en forma de gradiente de concentración. La inter
sección del halo de inhibición con la tira de papel indica la CMI del micr
oorganismo para dicho antibiótico

12. Métodos Antibiograma
– Dilución: Es un estudio cuantitativo. Se emplean u
na serie de tubos con distintas concentraciones de
agente antimicrobiano (4-128 g/ml). Se observa el
crecimiento de los microorganismos mediante la ap
arición de turbidez, o el cambio de color del indica
dor incorporado al medio.

13. MÉTODO DE DIFUSIÓN
PRINCIPIO DEL MÉTODO

14. Método de Difusión en Disco
(Baeur-Kirby)
• Es el mas difundido.
• Prueba la inhibición o resistencia de los microorganism
os, enfrentándolos con los medicamentos que se encu
entran impregnados en pequeños discos.

15. Medio de cultivo utilizado
Mueller Hinton
• Su reproducibilidad aceptable.
• Baja concentración de inhibid
ores, condición crítica para ev
aluar sulfonamidas, trimetopri
m y tetraciclina.
• El crecimiento satisfactorio de
patógenos no exigentes.
• Existir ya gran experiencia en
estudios de susceptibilidad.

17. Inoculación de la placa
• Con un hisopo estéril
en tres direcciones in
ocule toda la placa (gi
ros de 60°).

18. Aplicación de sensidiscos
separación: los
discos deben de
estar separados24
mm (del centro de un
sensidisco al otro
más cercano).
Cantidad: 12
unidades en placas
de 150mm y 5
unidades en placas
se 100mm.
Cultivo en 24 – 48
Horas

20. Lectura e interpretación de los resultado
s
Categorías de interpretaron:
Sensible: El microorganismo
presenta un gran área de inhibición
causada por el fármaco. 95% éxito
Intermedio: Se presenta un halo de
inhibición mas reducido.
Resistente: Presenta muy poco o
casi nada de halo.

22. Medición de los halos
Después de incuba las placas
del antibiograma se procederá
a la lectura de este.
Se usa una regla y se mide el
radio del halo de inhibición
partiendo de desde donde está
el disco de antibiótico hasta
donde se inhibió el crecimiento.
La longitud obtenida después
se compararán con estándares
que nos dirán si el
medicamento será efectivo o
no en el tratamiento.

25. Antibiótico Resistente Intermedia Susceptible
Ampicilina ≤ 13 14 - 16 ≥ 17
Amikacina ≤ 14 15 – 16 ≥ 17
Sulfisoxasol ≤ 12 13 - 16 ≥ 17
Gentamicina ≤ 12 13 – 14 ≥ 15
Cloranfenicol ≤ 12 13 - 17 ≥ 18
Ceftriaxona ≤ 12 14 – 20 ≥ 21
Ciprofloxacin
a
≤ 15 16 - 20 ≥ 21
Tetraciclina ≤ 14 15 - 18 ≥ 19
Acido
Nalidixico
≤ 13 14 – 18 ≥ 19
Estrptomicina ≤ 11 12 – 14 ≥ 15
anamicina ≤ 13 14 - 17 ≥ 18
Trimetroprim/
Sulfametoxas
ol
≤ 10 11 – 15 ≥ 16

27. METODOS CONVENCIONALES
• Los métodos convencionales o fenotípicos, a su vez pueden ser:
• a)Cuantitativos: permiten conocer la CIM de un antimicrobiano frent
e a un determinado microorganismo (en ug/ml), lo que es de gran u
tilidad al momento de definir las dosificaciones, especialmente en pa
cientes críticos. Existen métodos cuantitativos de referencia o Gold st
andard (ya sea micro o macro dilución en caldo y/o dilución en agar
) y aquellos que no son de referencia (E-test, Just-One), pero que fac
ilitan de manera importante la realización de antibiograma por CIM
en la práctica diaria a la vez que da flexibilidad respecto de a qué an
timicrobianos estudiar la CIM y a cuáles no.
• b)Cualitativos (difusión en disco o Kirby Bauer), que a través de la
medición de un halo en mm permite correlacionar con la CIM y entr
egar una categoría de Susceptible, Intermedio o Resistente frente a c
ada antimicrobiano.
• c)De screening y punto de corte, permiten separar cepas con algún
mecanismo de resistencia específico, de aquellas que no lo poseen.
Para esto, existen diversos agares cromógenos o de screening, que c
ontienen una concentración de antimicrobiano que constituye el pun
to de corte para identificar las cepas resistentes.

28. METODOS AUTOMATIZADOS
• Los métodos automatizados disponibles son:
• a)Microdilución rápida (métodos comerciales fenotípicos: Vitek, Phoe
nix, Microscan). Estos métodos, al igual que la identificación automati
zada, consisten en paneles con pocillos miniaturizados que contienen
diferentes concentraciones de antimicrobianos, según los puntos de c
orte que permiten diferenciar cepas resistentes de cepas intermedias
o sensibles. Estos paneles o tarjetas contienen antimicrobianos definid
os para los distintos grupos de microorganismos (bacilos, cocáceas, le
vaduras, gram positivo, gram negativo), se ingresan al equipo respecti
vo, el cual mediante turbidimetría establece las CIM de cada cepa. Ac
tualmente estos equipos cuentan con softwares de interpretación o re
glas de experto, para informar resultados coherentes de susceptibilida
d. Estos equipos permiten realizar la identificación (ya sea bioquímica
o por MALDI) y estudio de susceptibilidad en forma integrada.
• b)PCR (métodos comerciales genotípicos), que detectan presencia de
genes de resistencia conocidos, o bien,
• c)La detección de perfiles proteómicos mediante MALDI-TOF post e
xposición a un determinado antimicrobiano.

29. Método Automatizado:
Este método se basa en micro
diluciones sobre micro tubos. El
crecimiento bacteriano se va a
observar por la turbidez o
fluorescencia de los micro tubos.
Es útil para examinar una gran
cantidad de muestras

31. CONCEPTOS
• Interpretación de ATB: Donde se realiza la categorización clínica, es
decir, definir como sensible, intermedio o resistente un resultado del a
ntibiograma en función de los valores de CMI o de halos de inhibició
n establecidos por diferentes comités nacionales e internacionales**, y
que diariamente realizan los laboratorios de microbiología.
• Lectura Interpretada de ATB: La lectura interpretada del antibiogram
a es una práctica habitual en el laboratorio de microbiología como co
mplemento de la interpretación o de la categorización clínica de los r
esultados de sensibilidad. Consiste en el reconocimiento fenotípico de
los mecanismos de resistencia y permite, a partir de éste, la inferencia
de fenotipo inicial. Asimismo, condiciona la modificación de las categ
orías clínicas y la deducción de los valores de sensibilidad de antimicr
obianos no incluidos en el antibiograma.
• **CLSI, ECAST, MENSRA, etc.

33. LECTURA INTERPRETADA
DE ANTIBIOGRAMA
• Es un análisis fenotípico de los
resultados de las pruebas de s
ensibilidad, fundamentado en
el conocimiento de los mecani
smos de resistencia y en su ex
presión fenotípica

34. Lectura Interpretada del Antibiograma:
Puntos Importantes
1. Identificación correcta de la bacteria
2. Conocimiento de las resistencias naturales
3. Identificación de las resistencias adquiridas
4. Conocimiento de la Epidemiologia local
5. Utilización de los ATB marcadores de resistenc
ia*
6. Utilización de Técnicas confirmatorias

35. IDENTIFICACION GRAM POSITIVOS
Cocos Gram Positivos
Catalasa
Staphylococcus Streptococcus Enterococcus
Coagulasa
S. Aureus
S.
pseudointermediu
s S. epidermidis
S. Saprofiticus
S. Hominis
S. Haemolyticus
S. lugdunensis
S. Viridans
S. pneumoniae
S. Pyogenes
S. agalactiae
Enterococcus sp

36. ESTRUCTURA PARED GRAM POSITIVOS

37. IDENTIFICACION GRAM NEGATIVOS
Bacilos Gram Negativos
Fermentación de Azucares
E. Coli
Klebsiella spp
Enterobacter spp
Citrobacter spp
Serratia marcescens
Pseudomona aeuroginosa
Acinobacter baumannii
Burkholderia cepacia
Edwardsiella corrodense
Stenotrophomonas maltophilia
Oxidasa
Pseudomona
aeuroginosa
Burkholderia cepacia
Acinobacter baumannii
Stenotrophomonas
maltophilia

38. ESTRUCTURA PARED GRAM NEGATIVOS

39. Diferencia en la estructura celular
Principal factor que contribuye para diferencias en mecanismos de
resistencia

49. BIBLIOGRAFIA
• http://new.paho.org/hq/dmdocuments/2011/Guia_inside_LR.pdf
• http://appswl.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=80
000504&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=51&ty=35&acc
ion=L&origen=apccontinuada&web=www.apcontinuada.com&lan=es&fi
chero=v7n4a404pdf001.pdf&anuncioPdf=ERROR_publi_pdf
• http://www.revclinesp.es/es/interpretacion-del-antibiograma-eleccion-de
l/articulo/13053735/
• http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologi
a-clinica-28-articulo-lectura-interpretada-del-antibiograma-enterobacteri
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• http://www.elsevier.es/es-revista-revista-medica-clinica-las-condes-202-a
rticulo-nuevas-tecnologas-en-diagnstico-microbiolgico-S0716864015001
510
• http://www.sefh.es/53congreso/documentos/ponencias/ponencia774.pdf