Teste rPCR pentru subtipurile ABCDE, A si J de ALV. Test multiplex PCR clasic pentru Mycoplasma meleagridis si M. iowae.

1. INTALNIREA TRIMESTRIALA AINTALNIREA TRIMESTRIALA A
SOCIETATII MEDICILOR VETERINARI IN PATOLOGIA AVIARASOCIETATII MEDICILOR VETERINARI IN PATOLOGIA AVIARA
SI A ANIMALELOR MICI DIN ROMANIASI A ANIMALELOR MICI DIN ROMANIA
ACADEMIA DE STIINTE AGRICOLE SI SILVICE ‘GHEORGHE IONESCU SISESTI”ACADEMIA DE STIINTE AGRICOLE SI SILVICE ‘GHEORGHE IONESCU SISESTI”
AULA MAGNAAULA MAGNA
BucuBucurrestiesti 0303 octombrieoctombrie 20120133
DIAGNOSTICULDIAGNOSTICUL
LEUCOZELOR AVIARE SI ALLEUCOZELOR AVIARE SI AL
MICOPLASMOZELOR SPECIFICE CURCILORMICOPLASMOZELOR SPECIFICE CURCILOR
PRIN TESTE PCRPRIN TESTE PCR
Virgilia PopaVirgilia Popa11
, Daniela Botus, Daniela Botus11
, Jenica Bucur, Jenica Bucur22
, Vlad Mihai Duma, Vlad Mihai Duma33
,,
Marian CulcescuMarian Culcescu11
, Niculai Poparlan, Niculai Poparlan11
11
SN Institutul Pasteur SA,SN Institutul Pasteur SA, 22
SC Farmavet SA,SC Farmavet SA, 33
CMV BrasovCMV Brasov

2. COMPLEXULCOMPLEXUL
LEUCOZELOR AVIARELEUCOZELOR AVIARE
 Leucozele aviare - grup de boli infectioase virale, in generalLeucozele aviare - grup de boli infectioase virale, in general
enzootice, cu evolutie lenta si simptomatologie polimorfaenzootice, cu evolutie lenta si simptomatologie polimorfa
 leucoze leucemiceleucoze leucemice - afecteaza elementele figurate ale sangelui- afecteaza elementele figurate ale sangelui
 leucoze aleucemice -leucoze aleucemice - induc formatiuni tumorale in diferite organeinduc formatiuni tumorale in diferite organe
si tesuturisi tesuturi
 produc pierderi prin scaderea productiei de oua sau mortalitate siproduc pierderi prin scaderea productiei de oua sau mortalitate si
imunosupresieimunosupresie
 Agenti cauzali – virusuri ARN anvelopate din genulAgenti cauzali – virusuri ARN anvelopate din genul
AlpharetrovirusAlpharetrovirus, familia, familia RetroviridaeRetroviridae

3. RETROVIRUSURIRETROVIRUSURI
FamiliaFamilia GenGen SpeciiSpecii GazdaGazda
sRNA-RT virussRNA-RT virus
RetroviridaeRetroviridae
AlpharetrovirusAlpharetrovirus Avian sarcoma leukosis virusAvian sarcoma leukosis virus
Rous sarcoma virusRous sarcoma virus
VertebrateVertebrate
BetaretrovirusBetaretrovirus Mouse mammary tumor virus JaagsiekteMouse mammary tumor virus Jaagsiekte
sheep retrovirussheep retrovirus
VertebrateVertebrate
DeltaretrovirusDeltaretrovirus Human T-lymphotropic virus (HTLV-1, HTLV-2)Human T-lymphotropic virus (HTLV-1, HTLV-2)
Bovine leukemia virusBovine leukemia virus
VertebrateVertebrate
EpsilonretrovirusEpsilonretrovirus Walleye epidermal hyperplasia virusWalleye epidermal hyperplasia virus VertebrateVertebrate
GammaretrovirusGammaretrovirus Murine leukemia virus. Abelson murineMurine leukemia virus. Abelson murine
leukemia virus. Friend virus. Feline leukemialeukemia virus. Friend virus. Feline leukemia
virus. Koala retrovirus. Xenotropic murinevirus. Koala retrovirus. Xenotropic murine
leukemia virus-related virus.leukemia virus-related virus.
VertebrateVertebrate
LentivirusLentivirus HIV. Simian immunodeficiency virus. FelineHIV. Simian immunodeficiency virus. Feline
immunodeficiency virus. Puma lentivirusimmunodeficiency virus. Puma lentivirus
Equine infectious anemia. BovineEquine infectious anemia. Bovine
immunodeficiency virus. Caprine arthritisimmunodeficiency virus. Caprine arthritis
encephalitis virus. Visna virusBovineencephalitis virus. Visna virusBovine
immunodeficiency virusimmunodeficiency virus
VertebrateVertebrate
SpumavirusSpumavirus Simian foamy virus. Human foamy virusSimian foamy virus. Human foamy virus VertebrateVertebrate
MetaviridaeMetaviridae MetavirusMetavirus Saccharomyces cerevisiae Ty3 virusSaccharomyces cerevisiae Ty3 virus FungiFungi
ErrantivirusErrantivirus Drosophila melanogaster gypsy virusDrosophila melanogaster gypsy virus NevertebrateNevertebrate
PseudoviridaePseudoviridae PseudovirusPseudovirus Saccharomyces cerevisiae Ty1 virusSaccharomyces cerevisiae Ty1 virus FungiFungi
HemivirusHemivirus Drosophila melanogaster copia virusDrosophila melanogaster copia virus NevertebrateNevertebrate
DsDNA-RT virusDsDNA-RT virus HepadnaviridaeHepadnaviridae Hepatitis B virusHepatitis B virus
CaulimoviridaeCaulimoviridae

4. RETROVIRUSURIRETROVIRUSURI
-- noua molecula de ADN este incorporatanoua molecula de ADN este incorporata
in genomul celulei gazda prin actiuneain genomul celulei gazda prin actiunea
integrazei, iar ADN-ul retroviral incorporatintegrazei, iar ADN-ul retroviral incorporat
este denumiteste denumit provirusprovirus
- virusuri transformante / non-virusuri transformante / non-
transformantetransformante
- transmitere la progenitransmitere la progeni
- genomgenom ARN mono-catenar, organizat similar unui ARN mesagerARN mono-catenar, organizat similar unui ARN mesager
(ARNm)(ARNm)
- replicareplicarere in celula gazda prin revers-transcriptie (transcriere inversa)in celula gazda prin revers-transcriptie (transcriere inversa)::
ARN → ADN→ ARN → proteineARN → ADN→ ARN → proteine
- transcrierea ARN catre ADN nu beneficiaza de procesul natural detranscrierea ARN catre ADN nu beneficiaza de procesul natural de
corectie care se petrece in timpul transcrierii normale de la ADN la ARNcorectie care se petrece in timpul transcrierii normale de la ADN la ARN
→ aparitia mutantelor→ aparitia mutantelor

5. ALVALV
(avian leukosis viruses)(avian leukosis viruses)
-diferente antigenice la nivelul anvelopei viralediferente antigenice la nivelul anvelopei virale →→ 1010
subgrupuri: A, B, C, D, E, F, G, H, I si Jsubgrupuri: A, B, C, D, E, F, G, H, I si J
ssubgrupurile A - Eubgrupurile A - E == virusuri asociate leucozei limfoide sivirusuri asociate leucozei limfoide si
sarcomului aviarsarcomului aviar
 subgrupurile F - Isubgrupurile F - I == virusuri de la alte specii de pasarivirusuri de la alte specii de pasari
decat cele crescute industrialdecat cele crescute industrial
 subgrupul Jsubgrupul J == virusuri asociate leucozei mieloide sauvirusuri asociate leucozei mieloide sau
asa-numita leucoza Jasa-numita leucoza J
19891989 Marea BritanieMarea Britanie,, efective de gaini rase greleefective de gaini rase grele
1997-981997-98 ““leucozaleucoza J”,J”, pierderi enormepierderi enorme in industriain industria
avicola mondialaavicola mondiala
2002 si in efective de pasari2002 si in efective de pasari ddestinate productiei de ouaestinate productiei de oua

6. COMPLEXUL LEUCOZELOR AVIARECOMPLEXUL LEUCOZELOR AVIARE
Cercetari in RomaniaCercetari in Romania
 Laboratorul de virusuriLaboratorul de virusuri
tumorale aviare (LVTA):tumorale aviare (LVTA):

Dr. Ionel Victor PatrascuDr. Ionel Victor Patrascu

Dr. Petru StiubeDr. Petru Stiube

Prof. Dr. Toma ComanProf. Dr. Toma Coman

Prof. Dr. Valer TeusdeaProf. Dr. Valer Teusdea

Prof. Dr. Sofia ComanProf. Dr. Sofia Coman

Dr. Dinu MihailescuDr. Dinu Mihailescu

Dr.Elena TuschakDr.Elena Tuschak

Dr. Norbert TuschakDr. Norbert Tuschak
 Laboratorul de PatologieLaboratorul de Patologie
Aviara (LPA):Aviara (LPA):

Dr. Ovidiu SicoeDr. Ovidiu Sicoe

Dr. Eleonora TipuritaDr. Eleonora Tipurita
 LaboratorulLaboratorul Central SanitarCentral Sanitar
Veterinar de Diagnostic (LCSVD)Veterinar de Diagnostic (LCSVD)::

Dr. Eleonora MicuDr. Eleonora Micu

Dr. Andaluza SachelarieDr. Andaluza Sachelarie

Dr. Eugenia AvramDr. Eugenia Avram
 FMVFMV BucurestiBucuresti::

Prof.Prof. Dr.Dr. Doina DanesDoina Danes
 FMV Cluj NapocaFMV Cluj Napoca::

Dr. Emil OnetDr. Emil Onet

7.  considerata pana de curand strict specifica curcilorconsiderata pana de curand strict specifica curcilor
 in ultimii ani a fost izolata si de la pui de gaina si pasari rapitoare (vultur, soim,in ultimii ani a fost izolata si de la pui de gaina si pasari rapitoare (vultur, soim,
bufnita)bufnita)
 epifita a cailor respiratorii si urogenitaleepifita a cailor respiratorii si urogenitale
 transmiterea verticala prin ou se datoreaza contaminarii pe cale venerica atransmiterea verticala prin ou se datoreaza contaminarii pe cale venerica a
oviductului prin intermediul materialului seminal al masculiloroviductului prin intermediul materialului seminal al masculilor
 transmiterea orizontala este realizata direct si indirect, pe cale aerogena sau intransmiterea orizontala este realizata direct si indirect, pe cale aerogena sau in
urma vaccinarilor, sexarilor, inseminarilor artificialeurma vaccinarilor, sexarilor, inseminarilor artificiale
 in crescatoriile traditionale sau de agrement boala este cunoscuta cain crescatoriile traditionale sau de agrement boala este cunoscuta ca
„sindromul gatului rasucit” (torticolis, „crookneck” sau „wryneck”).„sindromul gatului rasucit” (torticolis, „crookneck” sau „wryneck”).
 produceproduce
 imunosupresieimunosupresie
 la curcile tinere, cu varsta de pana in 2 luni,la curcile tinere, cu varsta de pana in 2 luni,
• aerosaculita infectioasa a curciloraerosaculita infectioasa a curcilor
• pneumoniepneumonie
• sinuzitesinuzite
• slaba imbracare in peneslaba imbracare in pene
• probleme locomotorii, prin perturbarea osteogenezei in urma carenteiprobleme locomotorii, prin perturbarea osteogenezei in urma carentei
de biotina si arginina, consumate de M.meleagridis in timpul dezvoltariide biotina si arginina, consumate de M.meleagridis in timpul dezvoltarii
embrionare a curcilor,embrionare a curcilor,
 la adultela adulte
• scaderi importante ale productiei de ouascaderi importante ale productiei de oua
• pierderi in incubatie prin mortalitate embrionara.pierderi in incubatie prin mortalitate embrionara.
MYCOPLASMA MELEAGRIDISMYCOPLASMA MELEAGRIDIS

8.  considerata specifica curcilorconsiderata specifica curcilor
 izolata si de la puii de gaina si pasari salbaticeizolata si de la puii de gaina si pasari salbatice
 se transmite vertical si orizontal, similar altor micoplasmese transmite vertical si orizontal, similar altor micoplasme
 diversitate antigenica mai bogata, perioade mai lungi dediversitate antigenica mai bogata, perioade mai lungi de
supravietuire in mediu si rezistente la mai multesupravietuire in mediu si rezistente la mai multe
substante antimicrobiene decat alte micoplasmesubstante antimicrobiene decat alte micoplasme
 induceinduce
 imunosupresieimunosupresie
 mortalitate embrionara in ultima perioada de incubatiemortalitate embrionara in ultima perioada de incubatie
 scaderi ale procentului de ecloziunescaderi ale procentului de ecloziune
 sindroame de malabsorbtiesindroame de malabsorbtie
 aerosaculiteaerosaculite
 tenosinovite exudativetenosinovite exudative
 condrodistrofii si deformari ale vertebrelor sicondrodistrofii si deformari ale vertebrelor si
membrelormembrelor
MYCOPLASMA IOWAEMYCOPLASMA IOWAE

9. TESTE PCR ALVTESTE PCR ALV
ABCDE, A,ABCDE, A, JJ
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF082080

10. TESTE PCR ALVTESTE PCR ALV
ABCDE, A,ABCDE, A, JJ
http://biotools.umassmed.edu/bioapps/primer3_www.cgi

11. TESTE PCR ALVTESTE PCR ALV
ABCDE, A,ABCDE, A, JJ
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

12. TESTE PCR ALVTESTE PCR ALV
ABCDE, A,ABCDE, A, JJ
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

13. Complexul virusurilor leucozelor aviare.Complexul virusurilor leucozelor aviare.
rPCR Sybr Green pentru virusul ALV-J.rPCR Sybr Green pentru virusul ALV-J.
Curba de disociere. Probele de splina siCurba de disociere. Probele de splina si
folicul plumifer sunt pozitive (Tm 79.10,folicul plumifer sunt pozitive (Tm 79.10,
79.60, 79.60)79.60, 79.60)
1
2
3
4
5
6
166bpComplexul virusurilor leucozelor aviare. Gel-electroforeza deComplexul virusurilor leucozelor aviare. Gel-electroforeza de
confirmare post rPCR ALV-J. Linia 1: martor negativ (NTC) – NFWconfirmare post rPCR ALV-J. Linia 1: martor negativ (NTC) – NFW
(Promega); linia 2: martor specificitate (SNC), – NDV-cDNA(Promega); linia 2: martor specificitate (SNC), – NDV-cDNA
(negativ ALV-J); linia 3: proba 6532/2013 -splina (pozitiv –ALV-J,(negativ ALV-J); linia 3: proba 6532/2013 -splina (pozitiv –ALV-J,
amplicon 166bp); linia 4: proba 6532/2013 -folicul plumiferamplicon 166bp); linia 4: proba 6532/2013 -folicul plumifer
(pozitiv – ALV-J, amplicon 166bp); linia 5: martor pozitiv - ATCC-(pozitiv – ALV-J, amplicon 166bp); linia 5: martor pozitiv - ATCC-
VR335-cDNA (pozitiv –ALV-J, amplicon 166bp); linia 6: standardVR335-cDNA (pozitiv –ALV-J, amplicon 166bp); linia 6: standard
ADN – PCR Marker (Sigma)ADN – PCR Marker (Sigma)
TESTE PCR ALVTESTE PCR ALV
ABCDE, A, JABCDE, A, J
 Extracţie ADNExtracţie ADN (probe din teren, produse comerciale non-ALV): QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen).(probe din teren, produse comerciale non-ALV): QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen).
 Extractie ARNExtractie ARN (tulpini virale de referinta ATCC, produse biologice comerciale non-ALV):(tulpini virale de referinta ATCC, produse biologice comerciale non-ALV):
QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen).QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen).
 RT-PCRRT-PCR: in cazul tulpinilor de referinta ATCC si produsele biologice non-ALV, cu amorsa: in cazul tulpinilor de referinta ATCC si produsele biologice non-ALV, cu amorsa
pd(N)6pd(N)6 -- illustra Ready to Go RT-PCR Beads (GE Healthcare).illustra Ready to Go RT-PCR Beads (GE Healthcare).
 PCRPCR ALV-ABCDEALV-ABCDE si Asi A pentru gena envpentru gena env (gp85)(gp85) : amorse Mohammadi: amorse Mohammadi et al.et al. 2008;2008; PCRPCR ALV-JALV-J::
amorse Popa V (amorse Popa V (date nepublicatedate nepublicate));; amestec de amplificare 2x Brilliant II Sybr Green qPCRamestec de amplificare 2x Brilliant II Sybr Green qPCR
Master Mix, Agilent; amplificator spectrofotometric Mx3005P, Stratagene.Master Mix, Agilent; amplificator spectrofotometric Mx3005P, Stratagene.
 Martor pozitivMartor pozitiv:: Avian retrovirusAvian retrovirus A, B, C (ATCC-VR-335, ATCC-VR-658, ATCC-VR-772).A, B, C (ATCC-VR-335, ATCC-VR-658, ATCC-VR-772). MartorMartor
negativnegativ: apa ultrapura PCR sterila (Promega).: apa ultrapura PCR sterila (Promega). Martori specificitate amorseMartori specificitate amorse: ILT: ILT,, IBV si NDVIBV si NDV
(produs(produsee comercialcomercialee).).
 Program de amplificareProgram de amplificare -- ABCDE si A: 94oC, 5min. - 1x; 94oC, 30sec.+60oC,1mim.ABCDE si A: 94oC, 5min. - 1x; 94oC, 30sec.+60oC,1mim.
+68oC,2mim. - 40x; 68oC, 10mim.+25oC,1mim., 1x+68oC,2mim. - 40x; 68oC, 10mim.+25oC,1mim., 1x;; curba de disocierecurba de disociere -- MxPro v01/2007 (95oC,MxPro v01/2007 (95oC,
1 min, 55oC, 30 sec. si rampa la 95oC, cu date colectate in toate punctele acesteia). Program1 min, 55oC, 30 sec. si rampa la 95oC, cu date colectate in toate punctele acesteia). Program
de amplificarede amplificare –– JJ:: 94oC,10min.- 1x; 94oC, 30sec.+52oC,1min.+72oC,2mim., 40x; 72oC,10mim.94oC,10min.- 1x; 94oC, 30sec.+52oC,1min.+72oC,2mim., 40x; 72oC,10mim.
+25oC-1mim., 1x, urmat de gel-elctroforeza si curba de disociere de confirmare a reactiilor si+25oC-1mim., 1x, urmat de gel-elctroforeza si curba de disociere de confirmare a reactiilor si
implicit, a ampliconilor obtinuti.implicit, a ampliconilor obtinuti.

14. 1 2 3 4 5 6
7
424bp
216bp
189bp
427bp
TESTE PCRTESTE PCR
MYCOPLASMA MELEAGRIDIS / M.IOWAEMYCOPLASMA MELEAGRIDIS / M.IOWAE
 Extracţie ADN : lizat termic, din culturi de 1 ora pentru probele din teren si tulpinile deExtracţie ADN : lizat termic, din culturi de 1 ora pentru probele din teren si tulpinile de
referinta (Ramirezreferinta (Ramirez et alet al. 2006. 2006;;
 EEtapa de preimbogatire, 1h, la 37oCtapa de preimbogatire, 1h, la 37oC ((Mycoplasma Synoviae Medium Base (Mycoplasma Synoviae Medium Base (HimediaHimedia),),
suplimentat cu 10% ser de porc inactivat la 56suplimentat cu 10% ser de porc inactivat la 56oo
C, 100000 UI% penicilina G si 0.025% acetat deC, 100000 UI% penicilina G si 0.025% acetat de
taliu, filtrat succesiv prin filtru Millipore de 0.22 um si 0.1 umtaliu, filtrat succesiv prin filtru Millipore de 0.22 um si 0.1 um))..
 AmorseAmorse -- secventa 16s ARNr: Boylesecventa 16s ARNr: Boyle et alet al. 1995 (amplicon. 1995 (amplicon M. meleagridisM. meleagridis 424 bp; amplicon424 bp; amplicon M.M.
iowaeiowae 427 bp)427 bp);; secventa P34 – 75 asecventa P34 – 75 a M. meleagridisM. meleagridis, Popa V (, Popa V (date nepublicatdate nepublicate;e; amplicon 189amplicon 189
bp)bp) ;; spi1 aspi1 a M. iowaeM. iowae, Popa V (, Popa V (date nepublicate;date nepublicate; amplicon 216 bp).amplicon 216 bp).
 Amestec de amplificare: illustra PuReTaqTM Ready-To-Go PCR Beads (Amestec de amplificare: illustra PuReTaqTM Ready-To-Go PCR Beads (GE HealthcareGE Healthcare),),
suplimentat cu 0.5mM MgCl2.suplimentat cu 0.5mM MgCl2.
 Amplificator iCyler (Amplificator iCyler (BioradBiorad).).
 Program de amplficareProgram de amplficare :: 95oC, 5 min – 1x; 95oC, 45 sec + 60oC, 45 sec + 72oC, 15 min – 35 x;95oC, 5 min – 1x; 95oC, 45 sec + 60oC, 45 sec + 72oC, 15 min – 35 x;
72oC, 10 min – 1x; 4oC, 10 min – 1x, utilizat pentru testari pe amestecuri din tulpinile martor72oC, 10 min – 1x; 4oC, 10 min – 1x, utilizat pentru testari pe amestecuri din tulpinile martor
sisi pepe probe din teren cu amestec de amorseprobe din teren cu amestec de amorse, format multiplex PCR, format multiplex PCR (amorse pentru 16s rRNA(amorse pentru 16s rRNA
MM + amorse pentru spi1 MI sau amorse pentru 16s rRNA MI + amorse pentru secventa P34-MM + amorse pentru spi1 MI sau amorse pentru 16s rRNA MI + amorse pentru secventa P34-
75 MM).75 MM).
 Martori pozitiviMartori pozitivi:: Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis (NCTC(NCTC 1015310153),), Mycoplasma iowaeMycoplasma iowae (NCTC(NCTC 10185).10185).
 Martor negativMartor negativ: apa ultrapura PCR sterila (Promega).: apa ultrapura PCR sterila (Promega).
 Martor specificitate amorseMartor specificitate amorse M. gallisepticumM. gallisepticum A5969.A5969.
Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis NCTC 10153 siNCTC 10153 si M. iowaeM. iowae NCTC 10185. Gel-NCTC 10185. Gel-
electroforeza post amplificare multiplex PCR – testari varianteelectroforeza post amplificare multiplex PCR – testari variante
tehnice: MM+Mi-spi1 (liniile 1-3) si MI+Mm-P34-75 (liniile 5-7). Liniile 1tehnice: MM+Mi-spi1 (liniile 1-3) si MI+Mm-P34-75 (liniile 5-7). Liniile 1
si 5:si 5: Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis (pozitiv MM-amplicon 424bp, negativ(pozitiv MM-amplicon 424bp, negativ
Mi-spi1, pozitiv Mm-P34-75-amplicon 189bp, negativ MI); liniile 2 si 6:Mi-spi1, pozitiv Mm-P34-75-amplicon 189bp, negativ MI); liniile 2 si 6:
Mycoplasma iowaeMycoplasma iowae (negativ MM, pozitiv Mi-spi1-amplicon 216bp,(negativ MM, pozitiv Mi-spi1-amplicon 216bp,
negativ Mm-P34-75, pozitiv MI-amplicon 427bp); liniile 3 si 7: mixnegativ Mm-P34-75, pozitiv MI-amplicon 427bp); liniile 3 si 7: mix
Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis++ Mycoplasma iowaeMycoplasma iowae (negativ MM, pozitiv Mi-(negativ MM, pozitiv Mi-
spi1- amplicon 216bp, pozitiv Mm-P34-75- amplicon 189bp, pozitiv MI-spi1- amplicon 216bp, pozitiv Mm-P34-75- amplicon 189bp, pozitiv MI-
amplicon 427bp); linia 4: standard ADN – PCR Marker (Sigma).amplicon 427bp); linia 4: standard ADN – PCR Marker (Sigma).

15. REZULTATEREZULTATE
Categoria zootehnica /Categoria zootehnica /
alte specificatiialte specificatii
VarstaVarsta
ProbaProba
Cod / tipCod / tip
ALVALV
AA A,B,C,D,EA,B,C,D,E JJ
RRGRRG 28 saptamani28 saptamani 868/2012 - folicul plumifer, MDV+868/2012 - folicul plumifer, MDV+ ++ ++ ++
RRGRRG 28 saptamani28 saptamani 870/2012 - folicul plumifer , MDV+870/2012 - folicul plumifer , MDV+ -- -- ++
Rasa rustica - masculRasa rustica - mascul adultadult 6532/2013 – splina, MDV-6532/2013 – splina, MDV- ++ ++ ++
Rasa rustica - masculRasa rustica - mascul adultadult 6532/2013 - folicul plumifer, MDV-6532/2013 - folicul plumifer, MDV- ++ ++ ++
RURU 23 saptamani23 saptamani 15293-1 /2004 - splina MDV+15293-1 /2004 - splina MDV+ -- -- ++
ATCC-VR-335ATCC-VR-335 // Martor pozitiv AMartor pozitiv A ++ ++ ++
ATCC-VR-658ATCC-VR-658 // Martor pozitiv BMartor pozitiv B ?? ++ ++
ATCC-VR-772ATCC-VR-772 // Martor pozitiv CMartor pozitiv C ?? ++ ++
Originea probelor si rezultatele examenelor rPCROriginea probelor si rezultatele examenelor rPCR
pentru detectia virusurilor leucozelor aviare (ALV)pentru detectia virusurilor leucozelor aviare (ALV)

16. REZULTATEREZULTATE
Originea probelor si rezultatele examenelor PCR pentru detectiaOriginea probelor si rezultatele examenelor PCR pentru detectia
Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis (MM) si(MM) si Mycoplasma iowaeMycoplasma iowae (MI)(MI)
CategoriaCategoria
zootehnica / altezootehnica / alte
specificatiispecificatii
VarstaVarsta
(zile)(zile)
ProbaProba
Cod / tipCod / tip
MycoplasmaMycoplasma
meleagridismeleagridis
MycoplasmaMycoplasma
iowaeiowae
MMMM
424bp424bp
Mm-Mm-
P34-75P34-75
189bp189bp
MIMI
427bp427bp
Mi-spi1Mi-spi1
216bp216bp
CurcaCurca 1414 6533 / 2013 - tampon traheal6533 / 2013 - tampon traheal // ++ ++ //
CurcaCurca 1414 6533 / 2013 - tampon pulmon6533 / 2013 - tampon pulmon // ++ -- //
CurcaCurca 1414 6534 / 2013 - tampon traheal6534 / 2013 - tampon traheal // ++ ++ //
CurcaCurca 1414 6534 / 2013 - tampon pulmon6534 / 2013 - tampon pulmon // ++ ++ //
CurcaCurca 1414 6535 / 2013 - tampon traheal6535 / 2013 - tampon traheal // -- ++ //
CurcaCurca 1414 6535 / 2013 - tampon pulmon6535 / 2013 - tampon pulmon // -- -- //
CurcaCurca 7070 6689 (1)/2013 – tampon traheal6689 (1)/2013 – tampon traheal // -- ++ //
CurcaCurca 7070 6690 (2)/2013 – tampon traheal6690 (2)/2013 – tampon traheal // -- ++ //
CurcaCurca 7070 6691 (3)/2013 – tampon traheal6691 (3)/2013 – tampon traheal // -- -- //
CurcaCurca 6161 6694 (6)/2013 – tampon traheal6694 (6)/2013 – tampon traheal // -- ++ //
CurcaCurca 6161 6695 (7)/2013 – tampon traheal6695 (7)/2013 – tampon traheal // -- ++ //
Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis NCTC 10.153NCTC 10.153 Martor pozitivMartor pozitiv ++ ++ ++ ++
Mycoplasma iowaeMycoplasma iowae NCTC 10.185NCTC 10.185 Martor pozitivMartor pozitiv ++ ++ ++ ++
Mycoplasma gallisepticumMycoplasma gallisepticum A5969A5969 Martor specificitateMartor specificitate -- -- -- --

17. ConcluzieConcluzie
Testele PCR s-au dovedit fiabile si adecvate in diagnosticulTestele PCR s-au dovedit fiabile si adecvate in diagnosticul
complexului leucozelor la pasari si al micoplasmozelorcomplexului leucozelor la pasari si al micoplasmozelor
specifice curcilor, semnaland prezenta tulpinilor despecifice curcilor, semnaland prezenta tulpinilor de
 virus leucozic din subgrupurile ABCDE, A si Jvirus leucozic din subgrupurile ABCDE, A si J
 Mycoplasma meleagridisMycoplasma meleagridis
M. iowaeM. iowae
in efective de pasari crescute si exploatate industrial inin efective de pasari crescute si exploatate industrial in
Romania.Romania.

18. Multumiri colaboratorilor medici veterinari
si fermierilor care au contribuit la aceste
rezultate, atat material cat si financiar