1. EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS.
LABORATORIO DE ENZIMAS
MITOCONDRIALES
IVY ALEXANDRA CASTILLO B.
NATALIA MONTENEGRO.
KATHERIN SANCHEZ.
MARGARA SUARE
FACULTAD DE MEDICINA.
2014.

2. MATERIALES.
 10 tubos de ensayo.
 2 Erlenmeyer de 150ml
 1 de precipitado de 500ml
 1 mortero con mano
 4 pipetas de 5ml
 5 pipetas de 2ml
 2 tubos de centrífuga
 1 gradilla
 1 pipeteador.

3. REACTIVOS.
 buffer fosfato 0,1M y pH 7.4 (300ml)
 solución malonato de sodio 1% (100ml)
 Solución cianuro de potasio 0,05M (50ml) PELIGROSO
 Solución de p-fenilendiamina al 1% (100ml)
 Solución de succinato de sodio al 1% (100ml)
 Solución de azul de metileno 0,01% (100ml)
 aceite mineral (200ml)
 Agua destilada
 Baño de maría termostatado a 37ºC
 Tejido cardiaco fresco, (deben conseguir tejidos de animales
recién sacrificados en un matadero, puede ser de porcino,
vacuno o ave (órgano entero) y mantenerlos refrigerados. Son
pequeñas porciones y sirven para todo el grupo)

5. PROCEDIMIENTO.

6. 1. EXTRACCION Y PREPARACION DE LAS ENZIMAS Y LAS
COENZIMAS: Tomar aproximadamente 5 gr de tej libre de sangre y
colocarlos en un mortero con 2 gr de arena lavada y adicionar 3
porciones de 5 ml de buffer fosfato y macerar.

8. Se macero hasta obtener una pasta fina, luego se transfirió a un
Erlenmeyer y se puso en una nevera por 15 minutos mezclando
ocasionalmente.

9. Al mismo tiempo que se realizaba el proceso anterior, también, se rotularon
5 tubos de ensayo (B’, 1’, 2’, 3’,4’) para luego adicionarles los siguientes
reactivos:
TABLA 2.

11. Luego de adicionar los reactivos a los tubos de ensayo, se
mezclaron suavemente y se llevaron los tubos al baño
serológico.

12. Luego de los 15 minutos de estar el extracto enzimático en la nevera,
se adiciono este en 2 tubos de centrifuga y se llevo a centrifugar a
1500 rpm por 10 minutos.

13. Al terminar el centrifugado del extracto enzimático, se termino el
procedimiento de la tabla 2.
Se adiciono el extracto enzimático sin sacar los tubos del baño
serológico y luego el aceite mineral para establecer condiciones
anaerobias.
TABLA 2.

15. Al mismo tiempo del procedimiento anterior, se realizo otro
procedimiento en el que se adiciono los reactivos de la siguiente tabla:
TABLA 1.

17. Luego se mezclo bien el
contenido y se puso en el
baño serológico por un
periodo de 20 minutos.

18. RESULTADOS OBTENIDOS.

19. TABLA 2. Proceso realizado
con corazón.
TABLA 1. Proceso
realizado con corazón.

20. Resultado del proceso hecho
con hígado.
Resultado del proceso hecho
con hígado.