2. MATERIALES Higadito de pollo Varilla de vidrio Alcohol de 96º Cloruro sódico 2M SDS ( cualquier detergente concentrado) Arena Trocito de tela para usar de filtro Eosina Vasos de precipitado Probeta Embudo Mortero OBJETIVOS El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar. A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra replegado.
3. 1.Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Para ello añadir una cucharadita de arena para que al triturar se puedan romper las membranas y queden los núcleos sueltos. METODOLOGIA
4. 2. Añadir al triturado, 20 ml de agua . Remover hasta hacer una especie de papilla o puré. METODOLOGIA
5. 3. Filtrar varias veces en una probeta sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper. METODOLOGIA
6. 4. Medir el volumen del filtrado final con una probeta . 5. Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M . Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. Verterlo todo en un vaso de precipitado. METODOLOGIA
7. 6. A continuación se añade 1 ml de SDS . La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas. . METODOLOGIA
8. 7. Añadir mediante una pipeta ( o probeta) 25-50 centímetros cúbicos de alcohol de 96 :. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas . En la interfase, precipita el ADN. Importante inclinar el vaso de precipitado para evitar el contacto directo y asegurarnos el resbale. ES EL PUNTO MAS DELICADO DE TODA LA PRACTICA. METODOLOGIA
9. 8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección . Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN. METODOLOGIA
10. RESULTADO FINAL: Aquí podeis compara dos resultados: la diferencia está en la cantidad de alcohol añadida (50 ml – 25 ml respectivamente) y la cantidad de filtrado obtenido tras el proceso de triturado en mortero (mayor en el primero)
11. 9. Tomar una pequeña muestra de las fibras y teñir con eosina , añadiendo una gota del colorante y dejándolo reposar durante 10 minutos. Observar al microscopio. Se pueden conseguir resultados similares utilizando azul de metileno y esperando 1-3 minutos. METODOLOGIA
