1. ANTIBIOGRAMA
Introducción
El antibiograma es una prueba in vitro que se realiza para determinar la sensibilidad y/o
resistencia de una bacteria a un grupo de antimicrobianos, bajo condiciones de
laboratorio específica y estandarizada.
Los antimicrobianos son sustancias químicas producidas por organismos vivientes, o
sintetizados en los laboratorios capaces de inhibir en pequeñas cantidades los procesos
vitales de los microorganismos, destruyendo e impidiendo su desarrollo y reproducción.
El antibiograma tiene 4 utilidades principales:
1. La instauración de un tratamiento correcto al paciente.
2. La confirmación de tratamientos empíricos.
3. El antibiograma tiene que confirmar o en su caso corregir el tratamiento.
4. Realizar estudios de resistencia. Es necesario conocer los niveles de resistencia
en los aislamientos clínicos para tomar medidas correctivas.
Las bacterias pueden exhibir un comportamiento de:
Sensible.- cuando una bacteria aislada e identificada es inhibida in vitro por una
concentración de un antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad de éxito
terapéutico, produciéndose a consecuencia de este fenómeno alteraciones reversibles
o irreversibles en el crecimiento bacteriano.
Intermedio, cuando una bacteria aislada e identificada es inhibida in vitro por una
concentración de un antimicrobiano que se asocia a un efecto terapéutico incierto. lo
que significa que estas pueden ser inhibidas por concentraciones más elevadas del
antimicrobiano.
Resistente, cuando una bacteria aislada no es inhibida in vitro por las concentraciones
séricas normalmente alcanzadas a dosis habituales de un antimicrobiano y que se asocia
a una alta probabilidad de fracaso terapéutico.
PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD POR DIFUSIÓN DE BAUER KIRBY
PRINCIPIO DEL ANTIBIOGRAMA
Este método se basa en el uso de una cantidad constante del antimicrobiano
impregnado en un reservorio de papel filtro, el cual al ser aplicado sobre la superficie
del agar en el que se ha sembrado el microorganismo en cuestión, formará por difusión
un gradiente de concentración del antimicrobiano, cuy sensibilidad se indicará por el
tamaño del halo de inhibición de crecimiento alrededor del disco.
APLICACIONES
• Útil para bacterias de rápido desarrollo como la familia Enterobacteriaceae,
algunas Pseudomonas, Acinetobacterspp, Staphylococcus spp, Enterococos y
Vibrio cholerae.
2. • Puede usarse también para bacterias de crecimiento fastidioso como
Streptococcus spp, Haemophilus spp y Neisseria spp.
• La lectura e interpretación debe realizarse bajo Normas del Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI) (Institutos y Laboratorios Clínicos
estándar).
• Todo el procedimiento se realizará siguiendo normas de garantía de calidad.
REGLAS DE ORO PARA REALIZAR LAS PRUEBAS DE SENSIBILIDAD POR DIFUSIÓN
• Trabajar con bacterias previamente identificadas.
• Operar con microorganismos aerobios o anaerobios facultativos que exhiben
desarrollo rápido en Agar Muller Hinton.
• En casos especiales como: Haemophilus spp, Neissera gonorrhoeae,
Streptococcus pneumoniae, Streptococcus grupo viridans y beta hemolíticos,
se procede a acuerdo a normas especiales (CLSI).
• El antibiograma se debe realizar a microorganismos que se encuentran en la
fase logarítmica de crecimiento.
Discos de antimicrobianos: Son discos de papel filtro de 5 mm de diámetro impregnados
con una concentración definida de algún agente antimicrobiano. Los discos están
claramente identificados por medio de un código que comprende 1 a 3 letras, impreso
en cada cara así como la carga del antimicrobiano. Los discos comerciales se suministran
en cartuchos o frascos de 50 discos envasados. Se utilizan para determinar la
sensibilidad o resistencia antimicrobiana por difusión.
3. PROCEDIMIENTO DEL ANTIBIOGRAMA POR DIFUSIÓN: METODO DE BAUER KIRBY
El procedimiento de Bauer Kirby sigue la siguiente secuencia:
• Preparación del inóculo
• Estandarización del inóculo
• Inoculación en placas de agar Mueller Hinton
• Aplicación de los discos de antibióticos.
• Incubación de las placas de agar Mueller Hinton
• Medición de halos de inhibición
• Interpretación de resultados según tablas de la CLSI.
Preparación del inóculo: Seleccionar 3 a 5 colonias del germen identificado, tocando la
parte superior de cada colonia con un asa bacteriológica, transferir las Colonias a un
tubo que contenga caldo BHI, caldo tripticasa soya o agua peptonada, incubar a 36ºC
durante 4 horas aproximadamente.
Estandarización del inóculo: Para estandarizar el inóculo por comparación con el patrón
de turbidez, debe transferirse el patrón que tenga las mismas características del tubo
donde se prepara la suspensión bacteriana a estudias, utilizar además una tarjeta blanca
con rayas negras de diferente grosor que permiten servir de contraste para la
comparación simultanea del patrón e inóculo.
4. Inoculación en placas de Agar Mueller Hinton: Homogenizar el inóculo, introducir un
hisopo estéril en la suspensión, hacer rotar por las paredes del tubo para eliminar el
excedente, luego sembrar suavemente sobre la superficie del medio en tres direcciones,
haciendo girar la caja de Petri en un ángulo de 65º, esto permitirá una distribución
homogénea del inóculo.
Aplicación de discos de antibióticos:
- Sacar los antimicrobianos dos horas antes para que adquieran la
temperatura ambientes antes de ser utilizados.
- No usar más de 6 discos para placas de 100 mm de diámetro (suficiente un
representante por familia de antibióticos), mayor número de discos provoca
superposición de halos de inhibición que dificultan la lectura.
- Colocar los discos sobre la superficie del agar, presionar ligeramente sobre el
disco para que no se despegue.
- La distancia entre disco y disco debe ser de 2,5 cm y de disco al borde de la
caja de 2cm.
- Una vez colocado el disco no debe ser removido, pues inmediatamente
difunde el antimicrobiano sobre el agar.
Incubación de las placas: Después de colocado los discos, incubar las placas de agar en
forma invertida en estufa a 35ºC.
5. Medida de halos de inhibición:
- Las zonas de inhibición deben ser uniformes y circulares.
- Medir con regla o calibro sosteniendo la caja de Petri en forma invertida.
- Cualquier deformación producida en los halos, deberá estudiarse para
detectar mecanismos de resistencia.
Interpretación de resultados
Utilizar las tablas de la CLSI, cada grupo de microorganismos tiene una tabla específica.
Estas tablas se actualizan una vez por año.
Para la interpretación existen tres categorías:
- Sensible
- Intermedio
- Resistente
ANTIBIOGRAMA POR DILUCIÓN:
Corresponde a la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI): Es la concentración mínima
de un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de una cepa bacteriana al cabo
de 18 a 24 horas de incubación. Se puede determinar por el procedimiento de diluciones
del antibiótico o el E-test.
MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS ANTIMICROBIANOS:
1. Inhibición de la síntesis de la pared bacteriana. (Ejemplo: penicilina,
cefalosporinas, vancomicina, teicoplanina, fosfomicina)
2. Alteración de la función de la membrana celular (Ejemplo: polimixina B,
colistin
3. Inhibición de la síntesis de proteínas (Ejemplo: aminoglicósidos, tetraciclina,
cloranfenicol, macrólidos)
4. Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos. (Ejemplo: fluorquinolonas,
6. rifampicina)
5. Inhibición de la síntesis del ácido fólico (Ejemplo: sulfamida, trimetoprima).
ORIGEN DE LA RESISTENCIA:
1. Natural o intrínseca
2. Adquirida: Resistencia mediada por plásmidos o transposones
Resistencia mediada por mutaciones (cromosómica)
MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA:
1. Inactivación enzimática: Ejemplo; Betalactamasas: BLEA (betalactamasa de
espectro ampliado), BLEE( betalactamasas de espectro extendido) en
Enterobacteriaceae
2. Alteraciones de la permeabilidad
3. Alteraciones del blanco de acción
4. Bombas de eflujo
5. Nuevas vías metabólicas
