Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad del Zulia

1. Dra. Zulamita Medina de

2. Conjunto de procedimientos y reglas a que son
sometidos los tejidos para poder ser estudiados
microscópicamente.

3. Métodos de Examen Histológico
Inmediato (En vivo)
Sin reactivos Modificadores ( al estado fresco).
Coloración Vital (Intravital y Supravital)
Uso:
Animales pequeños transparentes, membranas
transparentes, órganos opacos

4. Mediato (post morten)
Uso de fijadores que detienen los
procesos de putrefacción y conservan la
estructura histológica que presentaban en
vida.

5. Líquidos Indiferentes
Constituyen un medio adecuado para conservar la vida de
ciertos elementos de los tejidos, durante un periodo
determinado de tiempo.

6. Naturales:
Plasma
Suero Sanguíneo
Líquido Amniótico, líquido Ascítico y Humor Acuoso

7. Artificiales:
Ringer
Locker
Tyrode
Líquidos que contienen Cloruro de Sodio, Potasio y
Calcio

8. Procedimientos para la Obtención
de la Muestra
Cadáveres
Organismos Vivos (Biopsias)
Animales Pequeños:
Sangría en Blanco
Traumatismo Craneal

9. Fijación
Método histológico de preservación destinado a
obtener preparados duraderos que conservan la
estructura morfológica y química que presentan
las células y tejidos al estado vivo y que permite
realizar posteriormente el resto de
procedimientos histológicos.

10. Características de un buen fijado
Actuar con Rapidez
Alto poder de Penetración para evitar la autolisis.
Conservar detalles estructurales que poseía en vivo
Permitir el uso de resto de Técnicas Histológicas
No extraer Sustancia
No crear Artificios
No retraer excesivamente los tejidos

11. Teorías de la Fijación
Coagulando las proteínas sin combinarse con
ellos (Alcohol, Acido Pícrico y Yodo)
Formando combinaciones químicas con las
sustancias orgánicas forma nuevas sustancias
estables

12. Reducción y formación de precipitados.
Oxidación de los tejidos.

13. Fijadores Químicos
Simples (1 sola sustancia)
Formol al 10% (fijador universal)
Alcohol Etílico Absoluto al 95% (usado
en estudios histoquímicos)
Alcohol Metílico (usados para frotis)
Acido Osmico ( M.E.)
Bicloruro de Mercurio
Bicromato de Potasio al 3 a 5%

14. Fijadores Químicos
Compuestos:
Líquido de Flemming (Cromo-
Osmio.Ac. Acético)
Líquido de Zenker (Bicromato
sublimado- Ac. Acético).
Líquido de Helly( Zenker-
formol).
Líquido de Bouin (Formol-Ac.
Acético).
Líquido de Dubosca- Brasil

15. Fijadores Físicos
Desecación (extendidos o frotis).
Calor seco (Bacteriología en frotis
desecado)
Calor húmedo
Frío
Congelación y Desecación Estudios
histoquímicos).

16. Elección de un Buen Fijador
Estudios Citológicos:
 Acido Osmico, Liquido de Flemming (Fijación
Nuclear), Flemming sin Acido Acético, Zenker
-Formol (Para fijar citoplasma)
Estudios Histoquímicos:
Alcohol absoluto a 96º, Agentes Físicos, Calor, Frió y
Desecación, Incineración (Cenizas)
Estudios Generales o Topográficos:
Líquido de Zenker, de Helly , formol al 10%.

17. Relación entre el Tamaño de la Muestra y el
Volumen del Fijador
Tamaño de la Muestra: conviene
fijar piezas pequeñas que no excedan
de 0,5-1 cm de espesor, al fijar con
acido osmico el espesor debe ser de
1-3mm.

18. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Tiempo de Fijación: varia en relación al poder de penetración
del fijador, del volumen de la pieza y de la temperatura de
fijación, de 6-24 horas para el Flemming, de 12-24 horas para
el Zenker y el Helly, Duboscq –Brasil y el formol al 10% de 3-4
horas.

19. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Volumen de Fijador: la cantidad de fijador a usar debe
ser 40 a 50 veces mayor que el de la pieza o muestra a
fijar. Estas no deben apoyarse sobre el fondo del frasco
que la contiene.

20. Relación entre el Tamaño de la
Muestra y el Volumen del Fijador
Lavado y Conservación de la Muestra: cumplido el tiempo de
fijación se procede al lavado de las mismas para eliminar los
restos del fijador. Las piezas fijadas con líquidos a base de
acido osmico y de bicarbonato(Flemming,Zenker y Helly)
deberán ser avadas con agua corriente, así como también las
fijadas con formol al 10%; en cambio las fijadas con Bouin,
Duboscq-Brasil, no deben ser sometidas a lavado alguno.

22. Técnicas Histológicas
Deshidratación: Extracción del agua de los
espacios intercelulares de la muestra.

23. Proceso:
Alcoholes 30º, 50º, 70º, 80º, 90º y dos baños 100º
Pureza del alcohol (xilol no blanquecino).
Porque se realiza la Deshidratación ( La inclusión se
realiza con sustancias no miscibles con el agua que
traen los tejidos).

24. Aclaración
Proceso mediante el cual se sumerge la muestra
deshidratada en dos baños de xilol, benzol o toluol
(impregnación por un disolvente de parafina)

25. Inclusión: La pieza deshidratada
y aclarada, se sumerge en 2
baños de parafina (1 a 3 horas)
en una estufa a no más de
56°C.

26. Parafina: Blandas
Duras

29. Formación del Bloque
Cajas Metálicas
Barras de Leuckat
Simples Cajas de Papel

31. Microtomos
Tubo Cilíndrico Hueco, con Pinza en su
Interior
Microtomo de Deslizamiento
Microtomo de Minot
Microtomo de Congelación
Ultramicrotomo

33. Colorante: Sustancia que puede transferir
su color a otra.
Coloración

34. Clasificación
Naturales
 Animales (Carmín)
 Vegetales (Hematoxilina, Azafrán)
Artificiales
Ácidos (Eosina o Eosinato Sódico)
Básico (Azul de Metileno)
Neutros (Eosinato de Azul de Mitileno)
Indiferentes (Rojo Escarlata)

35. Teorías de la Coloración
Química
Física
Teoría Físico-Química

36. Coloración Ortocromática
Coloración Metacromática
Sustancia Cromotropa
Coloración Directa
Coloración Indirecta
Coloración Progresiva
Coloración Regresiva

37. Coloración Panóptica
Sustancia Mordiente
Coloración Pancrómica
Coloración en Masa
Hematoxilina: Nuclear, Indirecta y
Progresiva
Eosina: Citoplasmática, Directa y
Regresiva

38. Desparafinación antes de la Coloración
Proceso: Pasar el corte por dos baños de xilol.
Porque se realiza
Extensión y Adhesión del corte al Porta Objeto
Hidratación del corte
Alcoholes de 100º, 90º, 80º, 70º
Porque se realiza
Deshidratación del corte durante el proceso de
coloración
Alcoholes, 70º, 80º, 90º, , 100º
Porque se realiza

39. Aclaración
Montaje

40. Viraje
Diferenciación