Aula prática: Western Blotting

1. "Western Blotting" Trabalho realizado pelos acadêmicos de Medicina da UFBA Adriana Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana Asfora, sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA. Atualizado em setembro de 2003 Ensaio imunoenzimático após transferência eletroforética Aula 11

3. “ Western Blotting” O desenvolvimento do teste (como exemplo: detecção de anticorpos anti – HIV em soro): Vírus HIV As proteínas do vírus HIV são dissociadas em SDS Separação dos Ag através de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) Os Ag são eletrotrasnferidos para o papel de nitrocelulose, onde reagirão com os Ac do soro do paciente O SDS (dodecil sulfato de sódio) é um detergente - + 35 68 45 12

4. Ac anti-Ig humana, ligado a enzima, detecta as proteínas produzindo produto final corado pela adição de cromógeno 95 45 24 Os equipamentos necessários: fontes de corrente contínua e cubas uti- lizadas para a transferência eletroforética no Laboratório de Imunologia do ICS-UFBA Resultado de um teste para HIV: controle positivo controle negativo teste PM (KDa) 160 41 24