O documento descreve os princípios e aplicações do radioimunoensaio (RIA). O RIA é uma técnica imunológica sensível que usa isótopos radioativos para detectar e quantificar substâncias biológicas em baixas concentrações. Existem diferentes tipos de RIA que variam de acordo com se o antígeno ou anticorpo é marcado com o isótopo radioativo. O RIA tem sido usado para medir diversas substâncias como hormônios, drogas e marcadores tumorais.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 RADIOIMUNOENSAIOS (RIA) Trabalho realizado pela Médica Veterinária MSc Maria Tereza Barreto Guedes sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS GERAIS

3. CARACTERÍSTICAS GERAIS 1959 Berson e Yalow – primeiro RIA para quantificação de insulina. O RIA foi a primeira técnica imunológica padronizada capaz de detectar e quantificar substâncias da ordem de nano a picogramas. Torna-se então possível determinar qualquer tipo de molécula biológica, desde que haja um receptor específico e que a molécula biológica possa ser marcada.

5. O termo radioimunoensaio(RIA) é mais empregado em ensaios com antígenos marcados.

8. Instabilidade dos radioisótopos.

9. Risco operacional.

10. Necessidades de medidas especiais.

13. Requer pouca amostra.

15. polipeptídios, catecolaminas, esteróides, antibióticos, hormônios tireoidianos, proteínas, vitaminas, drogas e outras.

16. vírus da hepatite B.

19. Antígeno radioativo

20. Amostra a ser testada

21. Leitor radiométrico Leitor radiométrico

23. É o radioisótopo mais comumente empregado.

24. Meia vida de 57,5 dias.

25. Liga-se facilmente aos resíduos de tirosina das proteínas.

26. Produz radiação Υ.

27. Estabilidade menor que 3H.

28. Dosagem de hormônios protéicos.

29. Trítio (3H)

30. Produz radiação β .

31. Dosagem de esteróides.

34. De competição com Ac marcado.

35. Sanduíche ou captura de Ag.

36. Para detecção de IgE:

37. PaperRadioimmunosorbentTest (PRIST).

39. DE COMPETIÇÃO COM Ac MARCADO Inicialmente, antígenos são fixados na fase sólida. A seguir, acrescenta-se a amostra do paciente. Y Os anticorpos específicos e marcados com o radioisótopo são acrescentados. Se a amostra for positiva, haverá a formação do complexo Ag/Ac com o Ag do soro. Y Quanto maior a quantidade de antígeno na amostra, maior será a ligação destes aos anticorpos, formando imunocomplexos, que serão retirados por lavagem e assim reduzindo a leitura da radioatividade. Y Antígeno marcado Antígeno do soro YAnticorpo marcado

40. SANDUÍCHE OU CAPTURA DE Ag Teste realizado em duas etapas: Primeira etapa: 1) Fixação de Acs não marcados na fase sólida. 2) Adição da amostra (que contém Ag específicos contra o Ac fixado e outros componentes não específicos). 3) Os Ac capturam os Ag específicos da amostra. 4) Deverá ocorrer uma primeira lavagem para eliminação de componentes não específicos. Segunda etapa: 1) Acrescenta-se um segundo anticorpo específico e marcado, que formará o “sanduíche”. Y Y Y Y 2) A formação do imunocomplexo será revelada por este segundo anticorpo. Antígeno do soro YAc marcado YAc não marcado Componentes não específicos

41. TIPOS DE RIA PARA DETECÇÃO DE IgE

42. PAPER RADIOIMMUNOSORBENT TEST (PRIST) Anticorpos anti-IgE e não marcados são fixados na fase sólida. Acrescenta-se o soro a ser pesquisado para a presença de IgE. Em caso positivo, haverá a união do anticorpo IgE + anticorpo anti-IgE. Y Y Y Y Y Y Após lavagem para retirada do excesso de Ac não ligado, acrescenta-se anticorpos anti-IgE marcados com isótopo para que haja a revelação da amostra. Y Y Y Após lavagem, procede-se com a leitura. A determinação da concentração de IgE total presente na amostra ocorrerá através de cálculo que relacionará os valores obtidos com uma determinada curva padrão. YAgIgE da amostra Y Acanti-IgE marcado YAcanti-IgE não marcado

43. RADIOALLERGOSORBENT TEST (RAST) O alérgeno específico para o Ac IgE pesquisado é previamente fixado ao fundo do tubo na fase sólida. Acrescenta-se soro do paciente. Havendo presença de IgE específica ao alérgeno em questão, haverá a formação do complexo Ag/Ac. Acrescenta-se o anticorpo anti-IgE marcado, e este se liga ao Ac IgE pesquisado. Y Y Y Y A reação então será revelada através do segundo anticorpo. Alérgeno Y IgE do soro do paciente YAcanti-IgE marcado