Como hacer una tincion Gram

1. Centro De Bachillerato Tecnológico Industrial Y De
Servicios No. 134
Identifica Microrganismos Con Base En Técnicas
Bacteriológicas
Q.B.P. Teresita Alicia Vélez Carbajal
Tinción de Gram
Practica No. 3
3º “C”
Septiembre del 2015

2. INTEGRANTES:
Equipo 7
 García Maldonado Oliver
 Herrera Analco Gerardo
 Reyna Martínez Irving
 Torreblanca Godínez Luis Andrés
 Moreno Cabrera Miguel Ángel

3. OBJETIVO GENERAL:
Realizar adecuadamente el frotis de bacterias sobre el porta objetos para llevar a
cabo la tinción con los colorantes que componen la tinción de Gram, e identificar si
se tratan de bacterias Gram positivas o Gram negativas al momento de
observarla en el microscopio
INTRODUCCIÓN:
Tinción de Gram
La tinción de Gram, también conocida
como coloración de Gram, es una
técnica de laboratorio que se utiliza
rutinariamente en los estudios
microbiológicos de las bacterias. Fue
diseñada por Christian Gram, un
científico danés, en el año 1884. El
objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar
diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba
resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el
estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en
una infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para tratarla.
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier
origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no
identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras
unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el
colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso
permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación
de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma
diferente a cada tipo de antibióticos, por eso es una técnica útil para seleccionar el
fármaco antimicrobiano inicial ante una infección. Hay que tener en cuenta que en
ciertas situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento
antibiótico adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram se pide de
urgencia en muchas ocasiones.

4. La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen
pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrán identificar, al igual que los
virus.
Diferencias de bacterias Gram Positivas y Gram Negativas
BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Poseen una pared celular interna y una
pared de peptidoglucano.
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto que
da consistencia y forma esencial para
replicación y supervivencia de la bacteria.
Poseen una pared celular más compleja:
-pared celular interna
-pared de peptidoglucano
- bicapa lipídica externa
No tiene membrana externa Membrana externa: forma un saco rígido
alrededor de la bacteria, mantiene
estructura y es barrera impermeable a
macromoléculas, ofrece protección en
condiciones adversas
No tiene espacio periplasmático
Espacio periplasmático: espacio entre la
superficie externa de la membrana
citoplasmática y la interna de la
membrana externa.
La red de mureína está muy desarrollada
y llega a tener hasta 40 capas
La red de mureína presenta una sola
capa
La penicilina mata a las gram positivas,
ya que bloquea la formación de enlaces
peptídicos entre las diferentes cadenas
del peptidoglucano
La penicilina no mata a las Gram
negativas, a causa de la capa de
lipopolisacáridos situada en la parte
externa de la pared celular.
No contiene LPS
Contiene LPS: estimulador de respuestas
inmunes: activa células B, liberación de
IL, FNT, IL 6 por macrófagos.
En la tinción de Gram, retienen la tinción
azul
Quedan decoloradas.
Conservan el complejo Pierden el complejo yodocolorante
Son esporulantes y no esporulantes,
como Streptococcus, Cisteria, Frankia.
Pueden ser anaerobios o aerobios
Poseen otros componentes: ácidos
teicoicos y lipoteicoicos, y polisacáridos
complejos.
Poseen proteínas con concentraciones
elevadas.

5. MATERIALES:
 Puente para tinción
 Porta objetos
 Piseta
 Asa bacteriológica
 Mechero
 Guantes
REACTIVOS:
 Cristal violeta
 Alcohol acetona
 Lugol
 Safranina
 Agua destilada
 Aceite de inmersión
DESARROLLO:
1.- Preparamos nuestra área de trabajo, los medios de cultivos proporcionados y
nos colocamos los guantes
2.- Se preparan 2 porta objetos colocando una gota de agua destilada, se
esteriliza el asa bacteriológica en el mechero, posteriormente se enfría a un
costado de la caja del medio para después tomar una colonia de bacterias, cerca
del mechero para que no se contamine; el mismo procedimiento con el segundo
medio
3.- La colonia se coloca sobre el agua del porta y se realiza un extendido masivo
por todo el cubre dejando las esquinas libre para poder sujetarse
4.- Se flamean en el mechero 4 veces para sellarlo
5.- Se procede a realizar el tinción de Gram, preparándose el puente para tinción y
colocando el porta
6.- Se bañan con el colorante Cristal violeta y se deja reposar por 1 minuto,
posteriormente se lavan

6. 7.- El mismo procedimiento con Lugol, por 1 minuto y se lavan
8.- Una vez lavado se coloca el alcohol solo por 30 segundos para quitar el exceso
de los demás colorantes y se lavan
9.- Por último se les agrega el colorante Safranina por 1 minuto
10.- Se deja secar y se observan en el microscopio agregándole aceite de
inmersión a un objetivo 100X para identificar de qué tipo de bacterias se tratan.
RESULTADOS:
En la observación del primer porta objetos
se idéntico conjuntos de racimos esto nos
llevó a la idea de que se encontraron
estafilococos, en un objetivo 100 X con
aceite de inmersión
Al observar el segundo porta objetos se
encontró bacterias en forma de bastón
llamadas bacilos, en un objetivo 100 X con
aceite de inmersión

7. ANALISIS DE RESULTADOS:
En los resultados podemos observar que se identificaron bacterias Gram positivas
y Gram negativas
- En el primer porta objetos se determinó que eran bacterias Gram negativas
porque su color no se tiño de azul oscuro o de violeta lo hicieron rosado
esto se debe a que poseen una pared celular fina y una segunda
membrana lipídica, esta hace que no se retenga el colorante cristal violeta
dejándolas rosa por la Safranina. La bacteria tiene forma de racimos por lo
cual en este se observó estafilococos Gram negativos.
- En el segundo porta objetos se determinó que eran bacterias Gram
positivas porque se tiño de color violeta se debe a que poseen una pared
celular gruesa con numerosas capas de peptidoglucano, las cuales retienen
el colorante cristal violeta. La bacteria tiene forma de varilla, en este se
observó bacilos Gram positivos
CONCLUSION:
En esta práctica aprendimos las diferencias entre una bacteria Gram positiva y
una Gram negativa ya que con ayuda de la tinción se pueden observar ciertos
factores que son muy distintivos como por ejemplo: su color ya que unas se tiñen
de color morado o violeta ( positivas) y otras de color rosa (negativas), en este
caso se observaron estafilococos negativos por su agrupación en racimos y
bacilos positivos por su forma de varilla; pero al igual pueden haber estafilococos
positivos o bacilos negativos esto dependiendo de la bacteria que se trate y las
enfermedades serán distintas

8. BIBLIOGRAFIA:
 Tincion de Gram:
www.uv.es/~jjmateo/microb/Gram(II).doc
http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
 Bacterias Gram positivas y Gram negativas
http://biologiamedica.blogspot.mx/2010/09/bacterias-gram-positivas-y-gram.html