El documento describe un estudio sobre la expresión de la proteína de choque térmico 27 (HSP27) en líneas celulares de cáncer de próstata tratadas y no tratadas con doxazosina. Los resultados mostraron que los niveles de HSP27 fueron más altos en las células más malignas y que la doxazosina indujo la expresión de HSP27 y la apoptosis. Esto sugiere que HSP27 juega un papel en la regulación de la apoptosis y puede ser un objetivo terapéutico para el cáncer de pró

1. EXPRESSION OF HEAT
SHOCK PROTEIN 27 IN
PROSTATE CANCER CELL
LINES ACCORDING TO
THE EXTENT OF
MALIGNANCY AND
DOXAZOSIN TREATMENT
Seung Wook Lee
Jeong Woo Lee
Jae Hoon Chung
Jung Ki Jo María Isabel Pérez Palacio
Camilo Ruiz Mejía

2. INTRODUCTION

4. HEAT SHOCK PROTEIN 27
 It is important in the control of
apoptosis (anti-apoptic agent) in
tumor and cell protection by
interacting with both mitochondrial
dependent and independent
pathways of apoptosis

5.  HSP 27 interacts with caspase 9 pathways ,
interrupting caspase 3 activation and therefore
inhibiting the apoptosis process. `

6. FUNCTIONS
 HSP is related to the folding, activation, trafficking, and
transcriptional activity of most steroid receptors including
androgen receptor

7.  Prostate cancer is becoming an
increasingly common disease
in men.
PROSTATE CANCER

8.  During the normal aging process, the prostate gland grows ,
however in prostate cancer, malignant cells proliferate and cause
adenocarcinoma
PROSTATE CANCER

9.  Prostate cancer may
cause
 Pain
 Difficulty
in urinating,
 Problems during
sexual intercourse
 Erectile dysfunction
 Death
PROSTATE CANCER

10.  Many people have been treated
successfully however it is as
dangerous as any other cancer
because of the risk that it may
metastasize
PROSTATE CANCER

11.  POSSIBLE TREATMENTS
Surgery
Radiation therapy
Hormone therapy
Chemotherapy
PROSTATE CANCER

12. DOXAZOSIN (CARDURA)
Antitumor
activity
It has a potent
antigrowth effect
against androgen
independent
human prostate
cells
It is an R1 B
adrenoreceptor
antagonist which
confers it an
antiproliferative
property

14. RELATIONSHIP
Prostate
cancer is a
common
disease in
men today
Possible
treatment
: Doxazosin
which is used as an anti
proliferative in
malignant prostate cells
It can be
hindered
by the
expression
of HSP 27
Who's purpose is to play
a role in the regulation
of apoptosis acting as an
anti apoptotic agent.

15. GENERAL OBJECTIVE
 The objective of this study was to analyze the
expression of HSP 27 in prostate cancer cells both
treated and not treated with Doxazosin.

16. MÉTODOS Y
MATERIALES

17. SUJETOS
RWPE-1
LNCaP
Pc-3
TSU-Pr1
COLECCIÓN
DE CULTIVOS
DE TIPO
AMERICANO

18. SUJETOS
RWPE-1 LNCaP Pc-3 TSU-Pr1
Grupo control
Grupo tratado
con 10 o 25
microM de
Doxazosina
Grupo de
control de
vectores
tratado con
DMSO

19. CULTIVO DE CÉLULAS
TSU-
Pr1
PC-3LNCaP
RWPE-
1
Medio nutritivo F12
(10% FBS)
(Penicilina)
(Estreptomicina) • 37 C
• 5% Co2
ANTES DE
TRATAMIENTO

20. FRAGMENTACIÓN DNA
 Se realizó esta prueba para analizar la
apoptosis en la PC-3 tratada con doxazosina

21. FRAGMENTACIÓN DNA
Esta es una prueba o método cualitativo para la evaluación
de la muerte celular mediante la detección de fragmentos
de ADN.
Se basa en la utilización de electroforesis en gel de agarosa.
260 nm

22. FRAGMENTACIÓN DNA
 Una de las características clásicas de la apoptosis es la escisión
del ADN genómico en fragmentos oligonucleosomales
La visualización de estos fragmentos puede ayudar a la
caracterización de un evento apoptótico.

23. RT- PCR
 Esta prueba se utilizó con el fin de aislar el RNA total.
Se usa RT-PCR cuantitativa para cuantificar mRNA
específicos, este análisis permite para una prueba más
rápida, con una mayor sensibilidad, es simple y sencilla.

24. RT- PCR

25. TUNEL
 En el articulo se utilizó para analizar el efecto de la doxazosina en la apoptosis de PC-3
 TUNEL es un método común para la detección de la fragmentación del ADN que resulta
de cascadas de señalización de apoptosis.

26. TRATAMIENTO DOXASOZINA
 Todas las células fueron tratadas con una dosis letal
media de doxasozina y 0.25 % DMSO como el control.

27. INMUNOTINCIÓN
 Se pretendía observar la tinción de HSP27 en cada cultivo celular.
 Se utilizó una inmunotinción directa.
 Se comparo la intensidad de la tinción en los cuatro cultivos celulares.

28. INMUNOTINCIÓN
 Absorben luz= 200-400 nm (luz
UV).
 Emiten= 400-700 nm (luz
visible).
 La luz es proporcional a la
cantidad de Ag.
 Ag= HSP27.

29. RESULTADOS

30. NIVEL DE EXPRESIÓN DE HSP27

31. NIVEL DE EXPRESIÓN DE HSP27
•INMUNOFLUORECENSIA.
•La tinción para TSU-Pr1 fue la más intensa.
•El orden fue el siguiente:
•RWPE-1 <LNCaP <PC-3 <TSU-Pr1

32. EXPRESIÓN DE HSP27 EN TRATAMIENTO CON
DOXAZOSINA
RT-PCR:
Control 50 %.
CV (DMSO) 60%.
10 µM 110 %.
25 µM 128%.

33. DOXAZOSIN INDUCE EXPRESIÓN DE HSP27
• INMUNOFLUORESCENCIA DE HSP27:
• Células HSP27 positivas Más intenso 10 µM y 20
µM.

34. DOXAZOSINA INDUCE APOPTOSIS.
• TUNEL:
• La HSP se expresa en células con núcleo condensado y
escaso citoplasma (apoptosis).
• Células que expresan HSP27 TUNEL POSITIVO.

35. DISCUSSION

36. 36
AUTHOR THEORY RESULTS
Rochi et al. The increase in HSP27
protected the cells in
the process of CRPC. YES
Miyake et al. The expression of HSP27
is useful to predict
biochemical recurrence
in prostate cancer
YES

37. 37
AUTHOR THEORY RESULTS
Rochi et al. They found that HSP27
played a role as the
apoptosis controller. YES
Teimourian et al. After irradiation, there
was less viability in cells
that reduced the
expression of HSP27,
that in those who didn´t.
YES

38. CONLUSIONS

39. CONCLUSIONS
It is important to study the expression of HSP27, because it
gives us a chance to look for new therapeutic options.
Prostate cancer is really common disease, and we need to
investigate more about it.
39

40. The study of heat shock proteins might give us a
chance to understand the development of tumoral
processes.
If we find new ways of treatment, we might reduce the
mortality level due to prostate cancer.

41. CAMILO RUIZ MEJÍA

42. María Isabel Pérez Palacio

43. BIBLIOGRAFIA
1. Xanthoudakis S., & Nicholson D.W. Heat-shock proteins as death
determinants. nature (internet). 2000 (citado marzo 7 de 2014);2:1-9.
Disponible
en:http://www.nature.com/ncb/journal/v2/n9/fig_tab/ncb0900_E163_F1.h
tml
2. Martínez L.M., Vargas N., Toro A.E., Pamplona A.P., Quevedo E. Biologia
Molecular, 7ma edición. Medellín, Colombia: UPB. 2012;31(3): 247-243.
3. Seung W.L.,Jeong W.L., Jae H.C., Jung K.J. Expression of heat shock protein
27 in prostate cancer cell lines according to the extent of malignancy and
doxazosin treatment. World J Mens Health; 2014