1. CURSO DE ESPECIALIZACIÓN
VIGILANCIA AMBIENTAL Y OCUPACIONAL
Monitoreo Ambiental
Evao-modulo 5
CONTAMINACIÓN POR METALES
PESADOS: Monitoreo
Nelva Elena Alvarado G., PhD
Instituto Especializado de Análisis
Universidad de Panamá
Mayo, 2013
3. Crecimiento de la población Costera: Contaminación Marina
La salud de los océanos del mundo y la vida marina se está degradando rápidamente
como resultado de las actividades humanas en exceso.
6. Generalidades
METAL: Elemento químico caracterizado por una fuerte
conductividad térmica y eléctrica, brillo peculiar (metálico),
aptitud para la deformación y una marcada tendencia a
formar cationes.
7. Metales Esenciales Metales No Esenciales
Concentration
Physiological
Effects
Low Excessive
Defficiency Beneficial Toxic
Optimum
AccurateModerate High
-
+
Low ExcesiveModerate
Tolerable
High
Highly Toxic
Serious health damageToxic
-
+
Su falta Provoca Alteraciones Patológicas
Superan el Umbral Tóxico
No se conocen un papel biológico
El Umbral Tóxico es pequeño
9. METALES PESADOS
•Presentes en cantidades pequeñas o trazas en el ambiente.
•Presentes en tejidos biológicos y gran afinidad por los complejos muy estables
como cationes divalentes, libres o ligados a residuos sulfhidrilo, hidroxilo,
carboxilo, imidazol, proteínas, ácidos nucleicos y polipéptidos.
•Se unen a los grupos donadores de electrones de las bases heterocíclicas, a la
desoxirribosa de los nucleósidos y a los grupos fosfatos de los nucleótidos y los
ácidos nucleicos
•Poseen una marcada preferencia por grupos donadores de azufre (en
comparación con los donadores de oxígeno)
METALES PESADOS: grupo de elementos de P.M. 63,5 a 200,6 con una
distribución electrónica similar en su capa externa (Rainbow, 1993).
15. Efecto de los contaminantes de los MetalesEfecto de los contaminantes de los Metales
Los metales y metaloides pueden generar, carcinogénesis
química, alteraciones en la expresión génica y estrés
oxidativo
El metal interactúa con H2O2produciendo HO· mediante la
reacción de Fenton. El HO· provoca:
→Daños en lípidos de membrana
→Daños en proteínas
→Daños en ácidos nucleícos
→En general: daños metabólicos en el
organismo, que pueden conducirle a la muerte.
→Estos efectos pueden ser premutagénicos
16. Metales y Expresión GénicaMetales y Expresión Génica
METAL
Los metales interaccionan con la cromatina
Los metales deben alcanzar el núcleo
En el núcleo, los metales se unen al ADN, a proteínas histónicas o a
proteínas no histónicas.
17. Metales y Expresión GénicaMetales y Expresión Génica
Los cambios en la secuencia de nucleótidos del ADN pueden modificar la
expresión génica.
Los cambios en la secuencia de nucleótidos del ADN pueden modificar la
expresión génica.
Los metales provoca daños en el ADN El metal interactúa con, H2O2
produciendo HO· mediante la reacción de Fenton. El HO· provoca:
•Oxidación de bases o de la desoxirribosa
•Pérdida de bases
•Formación de hélices sencillas
•Roturas de hélices dobles
•Formación de “puentes” ADN-proteína
•Formación de “puentes” ADN-ADN
Los metales afectan a la fidelidad de la replicación
•Inhibición de enzimas requeridas para la replicación
•Inhibición de la síntesis de nucleótidos
•Alteración de los procesos de metilacióndel ADN
•Alteración de los componentes del complejo de replicación del ADN
18. La introducción por el hombre directa o indirectamente, de sustancias o
energías en el medio marino, ha originado efectos perjudiciales:
•Daños a los recursos vivos
•Riesgos para la salud humana,
•Obstáculos para las actividades marinas
•Deterioro de la calidad para el uso del agua del mar y reducción de
posibilidades de utilizar este medio para actividades de esparcimiento.
La contaminación es debida a un aporte por el hombre al agua del mar, agua
dulce, ambiento marino costero, sedimentos u organismos de una sustancia
por encima de los niveles naturales de la misma.
CONTAMINACIÓN MARINACONTAMINACIÓN MARINA
19. Metales en el medio Marino
Fuentes Naturales:
Degradación de las rocas (químico y físico)
Lixiviado de lo sedimentos
Ambos procesos pueden estar controlados por factores
biológicos y bacterianos
Vías de AccesoVías de Acceso
Aportes costeros: ríos y erosión por las olas
Aportes oceánicos: volcanismo submarino y procesos químicos en
los sedimentos
Aportes atmosféricos: pueden alcanzar la superficie del mar
por deposición seca (partículas) o húmeda (lluvia), así como por
intercambio gaseoso.
20. Metales en el medio Marino
Fuentes Antropogénicas:
Minería
Uso de metales en las industrias
Quema de combustibles fósiles
Vertidos humanos industriales
Vías de AccesoVías de Acceso
Tierra firme: ríos, emisarios y escorrentías
Atmósfera: compuestos volátiles y particulados de los complejos
industriales.
Aportes marítimas
Arsenico
21. TRANSPORTE DE METALES EN EL MEDIO MARINOTRANSPORTE DE METALES EN EL MEDIO MARINO
Los metales movilizados por el hombre se introducen en los ciclos
biogeoquímicos naturales y se mueven entre los cuatro grandes
compartimentos de la Tierra: atmósfera, hidrosfera, litosfera y
biosfera.
La transferencia se realiza mediante tres grupos de mecanismos:
reacciones químicas, actividad bacteriana y toma-deposición por
parte de animales y plantas.
El transporte y la distribución depende del estado químico del
elemento pudiendo transformarse en formas físico-químicas
diferentes y aparecer en algún componente del ecosistema
marino donde no deberían encontrarse provocando daños sobre
los organismos marino sobre el ser humano.
22. DESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINODESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
Agua del mar: Los movimientos horizontales y verticales de las
aguas aseguran una cierta redistribución de metales.
Procesos que modifican los niveles de metales el agua del mar:
Dilución y dispersión
Precipitación
Adsorción
En general, un metal introducido en el mar
permanece poco tiempo en el agua receptora
En general, un metal introducido en el mar
permanece poco tiempo en el agua receptora
23. DESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINODESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
Sedimentos: Metales presentan gran afinidad por las partículas en
suspensión, tanto sólidos como coloides orgánicos e inorgánicos,
siendo transportados por ellas.
Se produce un enriquecimiento del contenido de metales en los
sedimentos de fondo de estuarios y zonas costeras próximas a
áreas industriales y urbana.
DESTINO FINAL
Unido a la dinámica de la materia particulada se
acumulan en zonas de baja energía hidrodinámica.
DESTINO FINAL
Unido a la dinámica de la materia particulada se
acumulan en zonas de baja energía hidrodinámica.
24. DESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINODESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
Los sedimentos reflejan bastante bien el estado de contaminación
de un área porque acumulan los contaminantes (tanto en
suspensión como en disolución).
Los contaminantes no permanecen ligados indefinidamente a los
sedimentos, ya que por procesos físicos, químicos y biológicos
pueden ser liberados de nuevo a la columna de agua y estar
disponibles para los organismos marinos.
Sedimentos son una reserva y una fuente potencial de
contaminantes al medio marino y reflejan de un modo fiel e
integrado en el tiempo el estado de contaminación de un área por
lo que son objeto de estudio en la mayoría de los programas de
vigilancia y control de la contaminación marina.
25. DESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINODESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
Mayor incremento en los estudios desde 1965,
envenenamiento en Minamata por Hg.
Los organismos acumulan los metales, directamente desde el
agua o a partir de la alimentación, en proporciones muy
superiores a las concentraciones existentes en el agua del mar.
Los factores de concentración dependen del metal (forma
química), de factores ambientales (ciclos estacionales,
temperatura, salinidad..); biológicos (crecimiento y
reproducción).
No son biodegradables, se acumulan asociados a la materia
orgánica e inorgánica. Los organismos los regulan y los no
excretados permanecen en el cuerpo y se acumulan a lo largo
de la vida del individuo.
Organismos
26. Reducción de la diversidad del sistema
Bioacumulación de metales pesados en los tejidos de los
organismos marinos a lo largo de la cadena trófica hasta llegar
al hombre
Mutaciones en las poblaciones que va en detrimento de la
viabilidad genética y de la calidad del producto
EFECTOS QUE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE
METALES PESADOS PRODUCEN
EFECTOS QUE LAS ALTAS CONCENTRACIONES DE
METALES PESADOS PRODUCEN
27. DESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINODESTINO DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
28. ACUMULACIÓN DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINOACUMULACIÓN DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
Los metales no son biodegradables, se acumulan asociados a la
materia orgánica e inorgánica.
Los organismos los regulan y los no excretados permanecen en el
cuerpo y se acumulan a lo largo de la vida del individuo.
BIOACUMULACIÓNBIOACUMULACIÓN
Si la fuente del contaminante es solamente el agua, es más correcto
hablar de
BIOCONCENTRACIÓNBIOCONCENTRACIÓN
29. BIOACUMULACIÓN
Los organismos los regulan y los no excretados permanecen en el cuerpo
y se acumulan a lo largo de la vida del individuo.
Las concentraciones de metal
(metilmercurio) en un organismo
vivo, aumentan con la edad
Metilmercurio
30. BIOCONCENTRACIÓN
La bioconcentración es
el proceso por el cual los
organismos,
especialmente los
acuáticos, pueden
absorber y concentrar
sustancias, como los
plaguicidas,
directamente del medio
(agua) que les rodea, a
través de su superficie
respiratoria y de su piel.
31. ACUMULACIÓN DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINOACUMULACIÓN DE LOS METALES EN EL MEDIO MARINO
El grado de acumulación en invertebrados y peces depende de la
biodisponibilidad (capacidad de un compuesto para ser incorporado a
un organismo) y de la fisiología de un organismo.
Los organismos que se alimentan de estos ejemplares presentan dieta
enriquecida en metales y tampoco son capaces de excretarla por lo que
aumenta su concentración corporal
BIOMAGNIFICACIÓNBIOMAGNIFICACIÓN
32. BIOMAGNIFICACIÓN
Los organismos tróficamente superiores, entre ellos el hombre, se
pueden encontrar expuestos a elevadas concentraciones de estos
elementos.
DDT
Las concentraciones de DDT
en los organismos vivos,
aumenta a lo largo de la
cadena trófica.
33. - Forma del metal: - inorgánica - soluble: ion, complejo o quelato iónico, molécula
- orgánica - particulado: coloidal, precipitado, adsorbido,
- Presencia de - acción conjunta
otros metales - antagonismo - aditiva, más o menos que aditiva
o tóxicos - sin interacción
- Factores que
afectan a la
fisiología del organismo - T, pH, O2 disuelto, luz, salinidad
y probablemente
la forma del metal
en agua
- estadio de desarrollo (ej: huevo, larva)
- cambios en el ciclo vital (ej: reproducción)
- Condiciones - edad y tamaño
del organismo - sexo
- estado nutricional
- actividad,
- estructuras de protección adicional (ej: concha)
- adaptación a los metales
- Respuesta
etológica - comportamiento alterado
Factores que determinan la toxicidad de los metales pesados disueltos (Bryan, 1976)Factores que determinan la toxicidad de los metales pesados disueltos (Bryan, 1976)
35. Metales en el medio Marino
Exposición a Metales
Sustitución de elementos esenciales (p.e. centros activos de
enzimas).
Cambio en la conformación y reactividad de enzimas.
Sustitución de grupos (p.e. fosfato) por otros con dimensiones
similares (p.e. arsenato ).
Precipitación y formación de complejos insolubles.
Alteración de la permeabilidad de las membranas.
Sustitución de elementos con funciones electroquímicas (s).
36. M M-MT
Lysosomes
MT
M
MT
?
2. El interior de la célula (ligandos celulares: MT, lisosomas)
3. Transporte
4. Acumulación en órganos diana
5. Excreción
M
M Cl2
0
M
M
M
M
M
M
MM
+
+
+
+
Lipid Permeation
Complex Permeation
Carrier Mediated
Ion Channel
Ion Pump
Endocytosis
Clathrin
coated pit(modified from Simkiss & Taylor, 1989)
1. A través de la membrana hacia el interior de la célula.
ENTRADA E INCORPORACIÓN DE LOS METALES
37. COMPOSICIÓN CELULAR DE LA LAMINA BRANQUIALCOMPOSICIÓN CELULAR DE LA LAMINA BRANQUIAL
•Célula de cloruro (CC)
•Mucocitos (MC)
•Células respiratorias (CR)
•Células pavimentosas (PC)
•Célula de la lamina Basal (BLC)
Modified from Dang, et al., 1999
water
Gill
Lamellae
Blood
Nelva E. Alvarado, Iban Quesada, Ketil Hylland Ionan
Marigómez, Manu Soto. 2006.
Aquatic Toxicology 77:64–77
38. CC
MC
PC
BLC
RC
PC
CV
PVC
RC
Célula de Cloruro
•Rol de regulación ionica
•Balance acido -base
•Transferencia del gas
Olsson et al., 1998
BRANQUIA DE RODABALLOBRANQUIA DE RODABALLO
Nelva E. Alvarado, Iban Quesada, Ketil Hylland, Ionan
Marigómez, Manu Soto. 2006. Aquatic Toxicology 77:64–77
40. A
Control 7d
B C
D
F
E
Cambios HistopatológicosCambios HistopatológicosNelvaE.Alvarado,IbanQuesada,KetilHyllandIonanMarigómez,ManuSoto.2006.
AquaticToxicology77:64–77
41. Nelva E. Alvarado, Iban Quesada, Ketil Hylland Ionan Marigómez, Manu Soto. 2006.
Aquatic Toxicology 77:64–77
42. A Con 1h B Cd 7d C Cd Detox
D Cu 7d E Zn 7d F Zn Detox
Localización autometalografíca de metales (BSD)
HÍGADOHÍGADO
Alvaradoetal,2005.74:110–125.AquaticToxicology
43. Cuantificación de los iones
metálicos en hígado de
rodaballo, tras la técnica de
autometalografía
La cuantificación de los depósitos (iones
metálicos) negros de plata (BSD por su
siglas en inglés), se realizo mediante el
Sistema de Análisis de Imagen (BMS)
software desarrollado por Sevisan, S.A.
(Biological Measurement System-BMS);
Los parámetros que se obtienen son: Vv
y Nv. Estos parámetros se refieren al
volumen, y al número de iones
metálicos.
Nelva E. Alvarado, Amaya Buxens , Luis Ignacio Mazón , Ionan
Marigómez, Manu Soto, 2005. 74 :110–125. Aquatic Toxicology
45. Cuantificación del grado
de vacuolización
mediante densidad
volumétrica en
hepatocitos de rodaballo.
Autometalografía
Esta tinción se basa en la técnica
fotográfica tradicional o tinción de
plata, durante el revelado o tinción se
acumula plata metálica que sustituye
al metal presente en la muestra
biológica.
Nelva E. Alvarado, Amaya Buxens , Luis Ignacio Mazón ,
Ionan Marigómez, Manu Soto, 2005. 74 :110–125. Aquatic
Toxicology
47. CICIMAR Oceánides 25(2): 121-134 (2010)Frías-Espericueta, M. et al., (2010)
MÚSCULO: Pb Y CdMÚSCULO: Pb Y Cd
48. Quezada, A.O et al (2006)
Facultad de Medicina Veterinaria,
Universidad de Santa Cruz de la
Sierra-Bolivia.
Espectrofotometría de absorción atómica con
un sistema de horno de grafito.
MÚSCULO: PbMÚSCULO: Pb
49. Especies
Tuna
Jurel
Jurel del mediterráneo
Sardina
Boquerón
Pez escarcha
Merluza
Brotola de roca
Pagel
Gallo (puntos negros en las
aletas dorsal y ventral)
Gallo
Pez rosa
Salmonete de fango
Congrio
Bejel
Raya marrón
Raya estrellada
Raya común
Técnica Utilizada
Espectrofotometría
de absorción
atómica con un
sistema de horno de
grafito.
M.M. Storelli, 2008
Food and Chemical
Toxicology 46 (2008) 2782–
2788
South-Eastern
Mediterranean Italian
coast (Adriatic Sea)
50. Food and Chemical Toxicology 45 (2007) 1968–1974
Roser Martı´-Cid et al., 2007.Espectrometría de masas (ICP-MS)
Barcelona, Tarragona, Lleida, L’Hospitalet de Llobregat, Terrassa y Girona) de
Cataluña.
METALES: Pb, Hg, As, CdMETALES: Pb, Hg, As, Cd
51. BIBLIOGRAFÍA
1. Alvarado, N.E., Buxens, A., Mazón, L.I., Marigoméz, I., Soto. M.2005. Aquatic Toxicology 74: 110-
125.
2. Alvarado, N.E., Quesada, I., Hylland, K., Marigómez, I., Soto, M. 2006. Aquatic Toxicology 77:64–
77.
3. Dang, Z., Lock, R.A.C., Flick, G., Wenderlaar Bonga, S.E. 1999. American Journal Physiology. 277:
R320-R331.
4. Den Besten, P.J., 1998. Marine Environmental Resesarch. 46:253–256.
5. Frías-Espericueta, M. 2010. CICIMAR Oceánides 25(2): 121-134 .
6. Marigomez,I. , Soto, M., Cancio, I., Orbea, A., Garmendia, L., Cajaraville, M.P. 2006. Marine
Pollution Bulletin 53: 287–304.
7. Roser Martı´-Cid. 2007. Food and Chemical Toxicology 45:1968–1974.
8. Storelli, M.M. 2008. Food and Chemical Toxicology 46:2782–2788.
9. Soto, M., Zaldibar, B., Cancio, I., Taylor, M.G., Turner, M., Morgan, A.J., Marigomez, I., 2002.
Histochemical Journal 34:273–280.
10. Soto, M. 2013. Toxicity of metallic pollutants in relation with cellular accumulation and storage
processes. UPV/EHU-PIE. UPV/EHU-PIE
El medio ambiente marino recibe de forma continua el aporte de infinidad de sustancias químicas orgánicas e inorgánicas (xenobióticos) que provienen de actividades industriales y urbanas, y son aportados mediante descarga directa o mediante procesos atmosféricos e hidrológicos (Stegeman & Hahn, 1994). Muchos de estos compuestos que contaminan ecosistemas acuáticos tienen que ser identificados y se debe determinar así mismo, su impacto sobre la vida acuática. El estudio de la exposición, destino y efectos de los contaminantes químicos en el ecosistema acuático son uno de los objetivos fundamentales de los toxicólogos ambientales.
En ese sentido los metales juegan un papel muy importante.
El estrés oxidativo es causado por un desequilibrio entre la producción de especies reactivas del oxígeno y la capacidad de un sistema biológico de detoxificar rápidamente los reactivos intermedios o reparar el daño resultante. CARCINOGENESIS QUIMICA : Transformación de células normales en células malignas, que poseen crecimiento incontrolado, capacidad de metástasis y todas las características morfológicas y biológicas de las células tumorales .
Las mutaciones son Alteraciones en la información genética que pueden deberse a multitud de agentes (= agentes mutagénicos), tales como radiaciones, sustancias químicas , etc. Las alteraciones pueden ser muy puntuales y no producir efectos, o afectar a gran cantidad de información y producir grandes modificaciones en los caracteres, llegando incluso a ser letales (= producen la muerte); constituyen la principal fuente de variabilidad genética, ya que son las responsables de la aparición de ALELOS en los genes, y por tanto, de la aparición de fenotipos nuevos. Génicas: Afectan sólo a un gen, son cambios en bases nitrogenadas sueltas que se sustituyen unas por otras, o se pierde o se gana alguna.
Para comprender mejor el problema derivado de la toxicidad de los metales es necesario conocer de que manera y en que cantidad llegan al medio, y cómo se comportan en él. Así como, las vías de entrada a los seres vivos y que mecanismos de protección poseen los organismos para hacer frente a estas agresiones. Una de esas primeras barreras de protección frente a la entrada de contaminantes metálicos es la membrana celular. Los mecanismos de entrada son variados y dependen de las características químicas de los compuestos (VER GRAFICA). (CLIC) Una vez en el interior de la célula existen una serie de ligandos celulares que se encargan de neutralizar los elementos tóxicos o en exceso para evitar daños celulares irrerversibles. Entre la multitud de estrategias podemos destacar la inducción de proteínas de unión a metales como las metalotioneínas y el secuestro en lisosomas. Ambas estrategias serán abordadas con profundidad en esta memoria. A continuación, se puede dar lugar la movilización y transporte de elementos tóxicos a órganos diana donde se pueden acumular previamente a su excreción.
El órgano diana elegido en este trabajo son las branquias. Las branquias poseen una gran superficie de contacto con el medio externo. Dicha supeficie branquial esta cubierta por un epitelio fino con diversos tipos celulares: Células pavimentosas (PC); Células de cloruro (CC); Los mucocitos (CM); y Células Respiratorias (CR). Y las Células de lámina basal o indiferenciadas. La branquia de pez se puede considerar como un órgano multifuncional ya que desempeña una gran variedad de funciones fisiológicas, aparte de la función respiratoria, intercambio gaseoso, el mantenimiento del equilibrio ácido-base, metabolismo de hormonas circundantes y la excreción de residuos nitrogenados. Además, las branquias responden de manera rápida a diferentes tipos de estrés entre los que podemos destacar los contaminantes metálicos.
Aquí tenemos una micrografía de branquia de rodaballo, donde se muestra los diferentes tipos celulares que la componen: Las (CR) células RESPIRATORIAS: intercambio gaseoso Las (PC) células PAVIMENTOSAS: formar la capa superficial del epitelio branquial Los (CM) células de MUCOCITOS: lubricar el epitelio de la branquias Las (PC) células PILARES: encargadas de dar forma y sostener la laminilla branquial secundaria las Células de LA ¨LÁMINA BASAL o INDIFERENCIADAS: que están continuamente restableciendo las células del epitelio. y por último tenemos a las: Las CÉLULAS DE CLORURO : regulación ionica, balance acido base, transferencia de gases.
Localización de metales en las branquias e Histoquímica convencional En peces control se observaron más BSD en el epitelio del filamento que en el epitelio de la lamilla secundaria . La tinción de PAS y la autometalografía combinada con la tinción de azul alcián muestran que la mayoría de los BSD se localizan en los mucocitos del epitelio del filamento. Apenas se observaron BSD en las células de cloruro (CC) y en las células pavimentosas de los animales control. Nos e observaron BSD en las células indiferenciadas puestas de manifiesto mediante PCNA. La exposición a Cd, Cu y Zn produjo más BSD que en los controles en los mucocitos de las laminillas secundarias (localizados mediante PAS).
Cambios histopatológicos En esta diapositiva se observan los cambios histopatológicos más relevantes que ocurren en el epitelio branquial en relación a la exposición a Cd, Cu y Zn. Separación del epitelio Fusión Lamelar Engrosamiento del epitelio branquial La hipertrofia y proliferación de las células de cloruro hacia el ápice de las laminillas secundarias Estos cambios en el período de depuración no se recuperan
Los niveles medios de metalotioneínas obtenidos por polarografía de pulso diferencial muestran que los rodaballos expuestos a Cu tienen niveles significativamentes más altos que los especimenes control al cabo de tan sólo 1 h de exposición a la dosis alta. Sin embargo, las exposiciones a Cd y Zn sólo produjeron valores significativamente más altos que el control después de 1 d de l experimento. Estos valores siguen siendo elevados hasta después del periodo de depuración. Los niveles obtenidos para las dosis bajas en todos los tratamientos no difieren significativamente de los valores del grupo control. Después de la depuración los animales expuestos a Cd y Zn 10 ppm redujeron los niveles de MT, mientras que tras la exposición a Cu 1ppm todavía siguen siendo significativamente más altos que los correspondientes al grupo control.
Mediante autometalografía (AMG) se reveló la presencia de iones metálicos como depósitos negros de plata fácilmente distinguibles en el microscopio fotónico.Se muestran las diferencias de los depósitos negros de plata, tanto en el control como los expuestos a los diferentes metales.
La exposición a metales provoca un grado de vacuolización diferente en los hepatocitos. En esta micrografía se muestran secciones semifinas teñidas con Azul de Toluidina, que reflejan como el control se diferencia de los expuestos muy claramente, y el que presenta un mayor grado de vacuolización es la exposición a cobre.